兽医寄生虫疫苗研究现状及展望课件

兽医寄生虫疫苗研究现状及展望兽医寄生虫疫苗研究现状及展望兽医寄生虫疫苗研究现状及展望兽医1已商品化的兽医寄生虫疫苗已商品化的兽医寄生虫疫苗已商品化的兽医寄生虫疫苗2Eimerian强毒苗强毒苗 Coccivac Sehering Plough Animal Health 含含8 8种球虫种球虫 Immucox Vetech 含含4 4种种 柔嫩、毒害、巨型、堆型柔嫩、毒害、巨型、堆型Eimeria强毒苗3Eimerian弱毒苗弱毒苗 鸡胚传代致弱：鸡胚传代致弱：始于英国、美国。现在很少用始于英国、美国。现在很少用 理化致弱：理化致弱：加热、冷冻、辐射处理、化学诱导等加热、冷冻、辐射处理、化学诱导等 早熟株选育早熟株选育:Paracox Sehering Plough Animal Health 含含7种主要球虫种主要球虫 Livecox Biopharm(Czech Repulic)含鸡胚致弱柔嫩株和堆型、巨型早熟株含鸡胚致弱柔嫩株和堆型、巨型早熟株Eimeria弱毒苗4Eimeria商品名商品名致弱致弱耐耐药虫种虫种使用方法使用方法免疫免疫对象象生生产商商Coccivac D不不不不A、T、M、N、B、P、H、Miv饮水饮水蛋蛋/种鸡种鸡Schering plough,美美国国Coccivac B不不不不A、T、M、Miv饮水饮水/喷雾喷雾肉仔鸡肉仔鸡Schering plough,美美国国Immucox C1不不不不A、T、M、N饮水饮水/硬胶硬胶肉仔鸡肉仔鸡Vetech Labs,加拿大加拿大Immucox C2不不不不A、T、M、N、B、Mi、P饮水饮水蛋蛋/种鸡种鸡Vetech Labs,加拿大加拿大Paracox是是不不A、T、M2、N、B、Mi、P饮水饮水蛋蛋/种鸡种鸡Schering plough,美美国国Paracox 5是是不不A、T、M2、Mi喷饲喷饲肉仔鸡肉仔鸡Schering plough,美美国国Livacox Q是是不不A、T、M、N饮水饮水蛋蛋/种鸡种鸡Biopharm,捷克捷克Livacox T是是不不A、T、M饮水饮水肉仔鸡肉仔鸡Biopharm,捷克捷克NobilisCox ATM不不是是A、T、M2饮水饮水/喷雾喷雾肉仔鸡肉仔鸡Intervet,荷兰荷兰Eimeriavax是是不不A、T、M、N滴眼滴眼肉仔肉仔/种种BioProperties,澳大澳大利亚利亚Eimeria商品名致弱耐药虫种使用方法免疫对象生产商Coc5Eimerian配子抗原亚单位苗配子抗原亚单位苗(Wallach,1995)Eimeria maxima 母源免疫母源免疫Eimeria配子抗原亚单位苗(Wallach,1995)6Toxoplasma gondii nToxovax Intervet 用于羊用于羊 致弱苗致弱苗 生活史不完整生活史不完整 不形成组织包囊不形成组织包囊 减少流产减少流产Toxoplasma gondii Toxovax 7Neospora caninum 灭活速殖子灭活速殖子 牛牛 减少流产减少流产Neospora caninum 灭活速殖子8Babesia nBabesia canis 体外培养上清中抗原体外培养上清中抗原 犬犬 减低发病减低发病Babesia Babesia canis9BabesianBabesia bovis/bigemina 传代致弱苗传代致弱苗 牛牛 本地工厂化生产应用本地工厂化生产应用BabesiaBabesia bovis/bigemin10Theileria nTheileria annulata 体外培养致弱体外培养致弱 牛牛 本地工厂化生产应用本地工厂化生产应用Theileria Theileria annulata11Theileria nTheileria parva 非致弱苗非致弱苗 牛牛 本地工厂化生产应用本地工厂化生产应用Theileria Theileria parva12GiardianGiardia duodenalis(Giardia felis)GiardiaVax Fort Dodge 速殖子速殖子 犬、猫犬、猫 减少包囊排出、预防临床症状减少包囊排出、预防临床症状 美国商品化美国商品化GiardiaGiardia duodenalis(Gia13TaenianTaenia ovis 基因工程疫苗基因工程疫苗 45W-GST(45W)（Johnson，1989）绵羊带绦虫的六钩蚴抗原绵羊带绦虫的六钩蚴抗原 E.coliE.coli中的表达产物。中的表达产物。可以保护绵羊不受绵羊囊尾蚴的感染可以保护绵羊不受绵羊囊尾蚴的感染 实验感染保护率达实验感染保护率达94%94%The University of Melbourne Pitman Moore New Zealand Ltd.New Zealand Ministry of Agriculture and Fisheries 第一个成功有效的抗寄生虫基因工程疫苗第一个成功有效的抗寄生虫基因工程疫苗TaeniaTaenia ovis 基因工程疫苗14EchinococcusEchinococcus granulosus 抗细粒棘球蚴基因工程疫苗抗细粒棘球蚴基因工程疫苗 EG95 (Lightowlers 1996)六钩蚴抗原，天然抗原分子量为六钩蚴抗原，天然抗原分子量为24.5kDa24.5kDa cDNA cDNA表达产物为表达产物为153153个氨基酸个氨基酸 分子量分子量16.5kDa16.5kDa 表达系统表达系统E.coliE.coli 产物为谷胱甘肽转硫酶产物为谷胱甘肽转硫酶(GST)(GST)融合蛋白融合蛋白EchinococcusEchinococcus granu15Echinococcus细粒棘球绦虫细粒棘球绦虫来源来源活棘球蚴包囊数活棘球蚴包囊数/平均（范围）平均（范围）对照组对照组免疫组免疫组保护率保护率新西兰新西兰156.6(70-270)5.8(0-16)96新西兰新西兰256.0(32-445)7.5(0-44)97新西兰新西兰36.8 (0-85)0.0(0)100澳大利亚澳大利亚4.7(0-16)0.2(0-1)96阿根廷阿根廷23.1(2-64)0.1(0-1)99中国中国15.4(6-40)0.4(0-2)92EG95预防棘球蚴感染免疫试验结果预防棘球蚴感染免疫试验结果Echinococcus细粒棘球绦虫来源活棘球蚴包囊数/平16DictyocaulusnDictyocaulus vivparus (牛胎生网尾线虫牛胎生网尾线虫）Huskvac Intervet Dictol Schering Plough Animal Health 辐射致弱三期幼虫辐射致弱三期幼虫 牛牛 仅在欧洲使用仅在欧洲使用DictyocaulusDictyocaulus vivpa17辐照幼虫疫苗一次免疫所需剂量辐照幼虫疫苗一次免疫所需剂量 虫体虫体剂量量胎生网尾胎生网尾线虫虫Dictyocaulus viviparusDictyocaulus viviparus10001000丝状网尾状网尾线虫虫Dictyocaulus filariaDictyocaulus filaria10001000犬犬钩口口线虫虫 Ancylostoma caninumAncylostoma caninum10001000捻捻转血矛血矛线虫虫Haemonchus contortusHaemonchus contortus1000010000蛇形毛蛇形毛圆线虫虫 Trichostrongylus colubriformisTrichostrongylus colubriformis40000-16000040000-160000Dictyocaulus辐照幼虫疫苗一次免疫所需剂量 虫体剂18BoophilusnBoophilus microplus 基因工程苗基因工程苗 Bm86 TickGardTM;TickGard PlusTM Biotech Australia E.coli 表达产物表达产物 GavacT Heber Biotec S.A.,Havana,Cuba 酵母表达产物酵母表达产物 重组蜱肠上皮抗原重组蜱肠上皮抗原 仅在澳大利亚古巴中南美国家用仅在澳大利亚古巴中南美国家用 牛牛BoophilusBoophilus microplus 19Boophilus 疫苗诱导的抗体破坏蜱肠上皮细胞，使之裂解，疫苗诱导的抗体破坏蜱肠上皮细胞，使之裂解，进而影响蜱的采食。但不对蜱产生立刻影响进而影响蜱的采食。但不对蜱产生立刻影响 蜱的出没可以减少蜱的出没可以减少20-0%20-0%蜱的不同代之间数目可以减少蜱的不同代之间数目可以减少70-90%70-90%主要益处是产生生态效益，减少抗蜱化学药物的主要益处是产生生态效益，减少抗蜱化学药物的使用。但随着蜱的适应和变异，疫苗的效果可能使用。但随着蜱的适应和变异，疫苗的效果可能会下降。需要不断改进会下降。需要不断改进Boophilus 疫苗诱导的抗体破坏蜱肠上皮细胞，使之20HypodermaHypoderma lineatum 纹皮蝇纹皮蝇 一种抗纹皮蝇幼虫蛋白酶的基因工程疫苗一种抗纹皮蝇幼虫蛋白酶的基因工程疫苗 已经在加拿大获得了证书已经在加拿大获得了证书HypodermaHypoderma lineatum 21兽医寄生虫疫苗的获得手段兽医寄生虫疫苗的获得手段n通过特殊动物传代或在体外培养通过特殊动物传代或在体外培养 使毒力降低，如牛巴贝斯致弱苗就是通过在切除脾脏牛体使毒力降低，如牛巴贝斯致弱苗就是通过在切除脾脏牛体内反复传代获得内反复传代获得n筛选缺少某一生活阶段的虫株筛选缺少某一生活阶段的虫株 如刚地弓形虫如刚地弓形虫S48S48株就不能形成包囊株就不能形成包囊n筛选生活周期缩短的的虫株筛选生活周期缩短的的虫株 如早熟艾美尔球虫苗如早熟艾美尔球虫苗n辐射致弱辐射致弱兽医寄生虫疫苗的获得手段通过特殊动物传代或在体外培养22兽医寄生虫疫苗存在的问题兽医寄生虫疫苗存在的问题n安全性问题安全性问题 目前的寄生虫疫苗主要为活苗，虽然可以产生一定的免目前的寄生虫疫苗主要为活苗，虽然可以产生一定的免疫保护，但毕竟是活的虫体，在特定的情况下，仍有致疫保护，但毕竟是活的虫体，在特定的情况下，仍有致病的可能病的可能n免疫保护效果免疫保护效果 有些寄生虫可以感染多重动物，其疫苗往往对某种动物有些寄生虫可以感染多重动物，其疫苗往往对某种动物保护效果较好，对另种动物效果较差，或者对不同年龄保护效果较好，对另种动物效果较差，或者对不同年龄的动物保护效果不一致的动物保护效果不一致n经济效益经济效益 尽管有些疫苗免疫保护性好，但生产成本高、免疫方法尽管有些疫苗免疫保护性好，但生产成本高、免疫方法复杂、与抗寄生虫药的广谱性相比具有较窄的保护范围复杂、与抗寄生虫药的广谱性相比具有较窄的保护范围均限制了疫苗在生产中的应用均限制了疫苗在生产中的应用兽医寄生虫疫苗存在的问题安全性问题23兽医寄生虫疫苗展望兽医寄生虫疫苗展望DNADNA疫苗疫苗 一一 DNA DNA疫苗的概念疫苗的概念 DNADNA疫苗（疫苗（DNA vaccineDNA vaccine）核酸疫苗（核酸疫苗（nucleic acid vaccinenucleic acid vaccine）裸裸DNADNA疫苗（疫苗（naked DNA vaccinenaked DNA vaccine）DNA DNA免疫（免疫（DNA immunizationDNA immunization）核酸免疫（核酸免疫（Nucleic acid immunizationNucleic acid immunization）基因免疫（基因免疫（gene immunizationgene immunization）遗传免疫（遗传免疫（genetic immunizationgenetic immunization兽医寄生虫疫苗展望DNA疫苗 一 DNA疫苗的概念24兽医寄生虫疫苗展望兽医寄生虫疫苗展望DNADNA疫苗疫苗 将含有编码外源蛋白基因的质粒将含有编码外源蛋白基因的质粒DNADNA，直接导，直接导入动物组织，外源基因在体细胞中表达后，表入动物组织，外源基因在体细胞中表达后，表达产物被递呈，与达产物被递呈，与MHCMHC分子结合，刺激机体产分子结合，刺激机体产生相应的抗体和细胞毒性生相应的抗体和细胞毒性T T淋巴细胞，分别介淋巴细胞，分别介导体液免疫和细胞免疫应答。这种外源基因是导体液免疫和细胞免疫应答。这种外源基因是抗原的来源，具有疫苗的功能抗原的来源，具有疫苗的功能兽医寄生虫疫苗展望DNA疫苗 将含有编码外源蛋白基因的25兽医寄生虫疫苗展望兽医寄生虫疫苗展望DNADNA疫苗疫苗二二 DNA DNA疫苗的优点疫苗的优点 1 1 诱导平衡的体液免疫和细胞免疫诱导平衡的体液免疫和细胞免疫 2 2 可以构建多价疫苗可以构建多价疫苗 3 3 免疫时间长免疫时间长 4 4 成本低、稳定、便于储存和运输成本低、稳定、便于储存和运输 5 5 安全安全 6 6 对免疫功能低下者效果较好对免疫功能低下者效果较好 7 7 可以激发特定的可以激发特定的Th1Th1或或Th2Th2免疫应答免疫应答兽医寄生虫疫苗展望DNA疫苗二 DNA疫苗的优点26兽医寄生虫疫苗展望兽医寄生虫疫苗展望DNADNA疫苗疫苗兽医寄生虫疫苗展望DNA疫苗27兽医寄生虫疫苗展望兽医寄生虫疫苗展望DNADNA疫苗疫苗寄生虫方面的探索寄生虫方面的探索 日本分体吸虫日本分体吸虫 绦虫绦虫 疟原虫疟原虫 利什曼原虫利什曼原虫 隐孢子虫隐孢子虫 弓形虫弓形虫 锥虫锥虫 球虫球虫 贾第虫贾第虫疟疾疟疾DNADNA疫苗已获准生产疫苗已获准生产兽医寄生虫疫苗展望DNA疫苗寄生虫方面的探索28兽医寄生虫疫苗研究现状及展望课件29兽医寄生虫疫苗展望兽医寄生虫疫苗展望 细胞因子佐剂细胞因子佐剂n 细胞因子细胞因子 细胞因子是机体免疫细胞或非免疫细胞产生的一组细胞因子是机体免疫细胞或非免疫细胞产生的一组具有广泛生物学活性的异质性肽类调节因子，在体具有广泛生物学活性的异质性肽类调节因子，在体内能激活和调节免疫活性细胞，对免疫应答的产生内能激活和调节免疫活性细胞，对免疫应答的产生和调节具有重要作用和调节具有重要作用 兽医寄生虫疫苗展望 30兽医寄生虫疫苗展望兽医寄生虫疫苗展望 细胞因子佐剂细胞因子佐剂细胞因子佐剂细胞因子佐剂 IL-2 IL-12 IL-18 GM-CSF IFN-兽医寄生虫疫苗展望 31兽医寄生虫疫苗展望兽医寄生虫疫苗展望 细胞因子佐剂细胞因子佐剂n细胞因子使用方式细胞因子使用方式 重组蛋白重组蛋白 单独构建单独构建DNADNA疫苗疫苗 与抗原基因串联构建与抗原基因串联构建DNADNA疫苗疫苗兽医寄生虫疫苗展望 32兽医寄生虫疫苗研究现状及展望课件33兽医寄生虫疫苗展望兽医寄生虫疫苗展望 特异性抗体亚型刺激性抗原特异性抗体亚型刺激性抗原n特异性抗体亚型刺激性抗原特异性抗体亚型刺激性抗原 在一些寄生虫病中，起主要保护性作用的往往是某一在一些寄生虫病中，起主要保护性作用的往往是某一亚型的抗体，因此，通过筛选能够刺激这一亚型抗体亚型的抗体，因此，通过筛选能够刺激这一亚型抗体的抗原，可以研究高效的疫苗的抗原，可以研究高效的疫苗n疟疾疟疾 抗感染作用以抗感染作用以IgG1IgG1和和IgG3IgG3型抗体及其介导的细胞免疫型抗体及其介导的细胞免疫为主，通过体外培养从疟疾病人分离的为主，通过体外培养从疟疾病人分离的B B淋巴细胞，筛淋巴细胞，筛选能够刺激产生特异性亚型抗体（选能够刺激产生特异性亚型抗体（IgG1IgG1、IgG3IgG3）的蛋）的蛋白分子作为疫苗侯选抗原，对研究抗疟原虫疫苗具有白分子作为疫苗侯选抗原，对研究抗疟原虫疫苗具有重要意义重要意义兽医寄生虫疫苗展望 特异性抗体亚型刺激性抗原34兽医寄生虫疫苗展望兽医寄生虫疫苗展望 T T细胞刺激性抗原细胞刺激性抗原nT细胞刺激性抗原细胞刺激性抗原 能够刺激T细胞增值或活化T细胞的抗原 Breed等以抗原对T细胞的激发能力为标准来筛选鸡球虫抗原，取得了良好的效果兽医寄生虫疫苗展望 T细胞刺激性抗35兽医寄生虫疫苗展望兽医寄生虫疫苗展望 T T细胞刺激性抗原细胞刺激性抗原兽医寄生虫疫苗展望 T细胞刺激性抗36兽医寄生虫疫苗展望兽医寄生虫疫苗展望 T T细胞刺激性抗原细胞刺激性抗原兽医寄生虫疫苗展望 T细胞刺激性抗37兽医寄生虫疫苗展望兽医寄生虫疫苗展望 T T细胞刺激性抗原细胞刺激性抗原抗原粗提液、3.0蛋白、3.2蛋白免疫保护试验。A.盲肠病变计分指标；B.增重指标。兽医寄生虫疫苗展望 T细胞刺激性抗38兽医寄生虫疫苗展望兽医寄生虫疫苗展望 多克隆活化因子多克隆活化因子n寄生虫感染后，往往能够活化或抑制某一类型寄生虫感染后，往往能够活化或抑制某一类型的免疫细胞。这些由寄生虫分泌的物质称作多的免疫细胞。这些由寄生虫分泌的物质称作多克隆活化因子克隆活化因子n对能够活化机体免疫系统的寄生虫分子对能够活化机体免疫系统的寄生虫分子进行分离和鉴定，对筛选有效的寄生虫进行分离和鉴定，对筛选有效的寄生虫疫苗抗原，具有重要意义疫苗抗原，具有重要意义兽医寄生虫疫苗展望 多克隆活化因子39兽医寄生虫疫苗展望兽医寄生虫疫苗展望 表达表达文库免疫文库免疫兽医寄生虫疫苗展望 表达文库免40兽医寄生虫疫苗研究现状及展望课件41兽医寄生虫疫苗展望兽医寄生虫疫苗展望 表达表达文库免疫文库免疫n表达文库免疫的应用表达文库免疫的应用 筛选保护性抗原筛选保护性抗原 筛选体液免疫抗原筛选体液免疫抗原 筛选细胞免疫抗原筛选细胞免疫抗原 筛选免疫抑制分子筛选免疫抑制分子 兽医寄生虫疫苗展望 表达文库免42Thanks!43谢谢！谢谢！谢谢！44