实验1 微生物实验室规则 实验2培养基配制及灭菌 课件

微生物学实验微生物学实验 华侨大学化工学院华侨大学化工学院微生物学实验华侨大学化工学院华侨大学化工学院11实验实验11微生物实验室规则、工作环微生物实验室规则、工作环境要求、实验记录、常用器皿材境要求、实验记录、常用器皿材料和仪器设备料和仪器设备实验1微生物实验室规则、工作环境要求、实验记录、常用器皿材22微生物实验的意义、研究进展微生物实验的意义、研究进展和实验内容和实验内容 一、研究内容一、研究内容一、研究内容一、研究内容 研究微生物的形态、结构、生理生化、遗传变异、研究微生物的形态、结构、生理生化、遗传变异、研究微生物的形态、结构、生理生化、遗传变异、研究微生物的形态、结构、生理生化、遗传变异、微生物与其他生物、与自然界之间的关系微生物与其他生物、与自然界之间的关系微生物与其他生物、与自然界之间的关系微生物与其他生物、与自然界之间的关系 1.1.机理研究：微生物适应环境的机制，鞭毛运动机理研究：微生物适应环境的机制，鞭毛运动机理研究：微生物适应环境的机制，鞭毛运动机理研究：微生物适应环境的机制，鞭毛运动的机理等的机理等的机理等的机理等（是生化和分子生物学研究的重要研究内容和研究（是生化和分子生物学研究的重要研究内容和研究（是生化和分子生物学研究的重要研究内容和研究（是生化和分子生物学研究的重要研究内容和研究材料。）材料。）材料。）材料。）微生物实验的意义、研究进展和实验内容一、研究内容332.2.微生物与实际应用微生物与实际应用 微生物与发酵工程微生物与发酵工程微生物与发酵工程微生物与发酵工程 微生物与环境工程微生物与环境工程微生物与环境工程微生物与环境工程 微生物与农业微生物与农业微生物与农业微生物与农业 微生物与医学领域微生物与医学领域微生物与医学领域微生物与医学领域 微生物与食品工业微生物与食品工业微生物与食品工业微生物与食品工业2.微生物与实际应用44二、微生物学研究进展二、微生物学研究进展 微生物基因组学研究（微生物基因组学研究（微生物基因组学研究（微生物基因组学研究（MicrobialGenomicsMicrobialGenomics）不可培养微生物（不可培养微生物（不可培养微生物（不可培养微生物（UnculturedMicroorganismsUnculturedMicroorganisms）DNADNA芯片（芯片（芯片（芯片（DNAChipDNAChip）三域学说（三域学说（三域学说（三域学说（Bacteria,Archae,EucaryoteBacteria,Archae,Eucaryote）二、微生物学研究进展微生物基因组学研究（Microbial55三、微生物学与三、微生物学与NobelNobel奖奖 到目前为止，几十项到目前为止，几十项到目前为止，几十项到目前为止，几十项NobelNobel生理学和医学奖，化学生理学和医学奖，化学生理学和医学奖，化学生理学和医学奖，化学奖都与微生物学有关参考：沈萍教授微生物学奖都与微生物学有关参考：沈萍教授微生物学奖都与微生物学有关参考：沈萍教授微生物学奖都与微生物学有关参考：沈萍教授微生物学绪论部分绪论部分绪论部分绪论部分NobelNobel获奖者。获奖者。获奖者。获奖者。三、微生物学与Nobel奖到目前为止，几十项Nobel生理66四、如何进行微生物学实验四、如何进行微生物学实验 严肃认真严肃认真严肃认真严肃认真 科学态度科学态度科学态度科学态度 分析问题分析问题分析问题分析问题 搞清原理搞清原理搞清原理搞清原理四、如何进行微生物学实验77五、微生物实验安排与考核五、微生物实验安排与考核 平时表现、基础实验：平时表现、基础实验：平时表现、基础实验：平时表现、基础实验：10+30%10+30%，一次考试，一次考试，一次考试，一次考试 考试：考试：考试：考试：60%60%五、微生物实验安排与考核88课堂纪律课堂纪律课堂纪律课堂纪律 严格遵守实验室规章制度严格遵守实验室规章制度 严肃课堂纪律严肃课堂纪律 不允许无故旷课、早退不允许无故旷课、早退 迟到（迟到（3 3次）次）课堂纪律99实验室安全和卫生实验室安全和卫生实验室安全和卫生实验室安全和卫生 安全安全安全安全 实验室严禁吸烟。实验室严禁吸烟。实验室严禁吸烟。实验室严禁吸烟。注意用水、用电和防火注意用水、用电和防火注意用水、用电和防火注意用水、用电和防火 正确使用化学试剂和仪器正确使用化学试剂和仪器正确使用化学试剂和仪器正确使用化学试剂和仪器 正确清洗器具正确清洗器具正确清洗器具正确清洗器具 禁止在实验室吃东西及饮水禁止在实验室吃东西及饮水禁止在实验室吃东西及饮水禁止在实验室吃东西及饮水 实验废弃物分类处理，勿污染环境实验废弃物分类处理，勿污染环境实验废弃物分类处理，勿污染环境实验废弃物分类处理，勿污染环境 卫生卫生卫生卫生 每次实验需留下每次实验需留下每次实验需留下每次实验需留下4 4 4 4位同学值日，协助保位同学值日，协助保位同学值日，协助保位同学值日，协助保 持实验室清洁（班长及生活委员安排）持实验室清洁（班长及生活委员安排）持实验室清洁（班长及生活委员安排）持实验室清洁（班长及生活委员安排）实验室安全和卫生安全1010实验预习报告及实验结果实验预习报告及实验结果 目的目的 原理原理 步骤步骤 结果及分析结果及分析 学习委员（报告批改后返给同学修改，再收回留学习委员（报告批改后返给同学修改，再收回留档，统计分数）档，统计分数）实验预习报告及实验结果目的1111实验1微生物实验室规则实验2培养基配制及灭菌课件12分组及各组器皿清单分组及各组器皿清单 每组器皿清单每组器皿清单每组器皿清单每组器皿清单 酒精灯酒精灯11个个/人人 镊子镊子11把把/人人 培养皿培养皿培养皿培养皿55套套套套/组组组组 三角瓶（三角瓶（250ml250ml）22套套/组组 烧杯（烧杯（250ml250ml）11个个/组组 载波片载波片1010片片/组组废液缸1个/组接种针/环1把/组（或人）玻棒2根/组试管6个/组试管架1个/组绳子绳子2段段/组组蒸馏水瓶带滴管1套/组2人一组（最后一组人一组（最后一组3人）（按学号）人）（按学号）用后各自清理保管。损毁或丢失，找实验室管理老师登记赔偿并补领分组及各组器皿清单废液缸1个/组2人1313实验实验2 2 微生物营养成分配制和消微生物营养成分配制和消毒灭菌技术毒灭菌技术实验2微生物营养成分配制和消毒灭菌技术1414一、目的要求一、目的要求一、目的要求一、目的要求 1 1、了解培养基制备原理，掌握培养基制备方法。、了解培养基制备原理，掌握培养基制备方法。、了解培养基制备原理，掌握培养基制备方法。、了解培养基制备原理，掌握培养基制备方法。2 2、掌握干热灭菌和高压蒸汽灭菌的原理和方法。、掌握干热灭菌和高压蒸汽灭菌的原理和方法。、掌握干热灭菌和高压蒸汽灭菌的原理和方法。、掌握干热灭菌和高压蒸汽灭菌的原理和方法。3 3、学会培养皿、瓶口的包扎。、学会培养皿、瓶口的包扎。、学会培养皿、瓶口的包扎。、学会培养皿、瓶口的包扎。一、目的要求1515（二）灭菌原理（二）灭菌原理11干热灭菌原理（蛋白质凝固变性）干热灭菌原理（蛋白质凝固变性）干热灭菌原理（蛋白质凝固变性）干热灭菌原理（蛋白质凝固变性）一般繁殖体一般繁殖体一般繁殖体一般繁殖体8080100100，11hh 芽孢芽孢芽孢芽孢160160170170，22hh 180180（二）灭菌原理1干热灭菌原理（蛋白质凝固变性）161622湿热灭菌原理高压蒸汽灭菌湿热灭菌原理高压蒸汽灭菌 在密闭的蒸锅内，锅内温度达在密闭的蒸锅内，锅内温度达在密闭的蒸锅内，锅内温度达在密闭的蒸锅内，锅内温度达121121，15min15min30min30min，可以很快杀死各种细菌及，可以很快杀死各种细菌及，可以很快杀死各种细菌及，可以很快杀死各种细菌及其高度耐热的芽孢（蛋白凝固变性）。其高度耐热的芽孢（蛋白凝固变性）。其高度耐热的芽孢（蛋白凝固变性）。其高度耐热的芽孢（蛋白凝固变性）。优点？优点？2湿热灭菌原理高压蒸汽灭菌在密闭的蒸锅内，锅内温度达11717实验1微生物实验室规则实验2培养基配制及灭菌课件1818实验1微生物实验室规则实验2培养基配制及灭菌课件1919三、实验器材三、实验器材 1 1、材料、材料、材料、材料琼脂粉、酵母膏（粉）、蛋白胨、琼脂粉、酵母膏（粉）、蛋白胨、琼脂粉、酵母膏（粉）、蛋白胨、琼脂粉、酵母膏（粉）、蛋白胨、NaClNaCl等。等。等。等。2 2、设备、设备、设备、设备天平（天平（天平（天平（6 6台）、称量纸、量筒、玻璃注射器（台）、称量纸、量筒、玻璃注射器（台）、称量纸、量筒、玻璃注射器（台）、称量纸、量筒、玻璃注射器（3-53-5把）、烧杯、把）、烧杯、把）、烧杯、把）、烧杯、玻璃棒、玻璃棒、玻璃棒、玻璃棒、pHpH试纸、标签，纱布（试纸、标签，纱布（试纸、标签，纱布（试纸、标签，纱布（8 8层纱布，包扎瓶口用，层纱布，包扎瓶口用，层纱布，包扎瓶口用，层纱布，包扎瓶口用，每组每组每组每组1 1份）、报纸、三角瓶、绳子、试管及试管塞、酒精份）、报纸、三角瓶、绳子、试管及试管塞、酒精份）、报纸、三角瓶、绳子、试管及试管塞、酒精份）、报纸、三角瓶、绳子、试管及试管塞、酒精灯、火柴、药勺（灯、火柴、药勺（灯、火柴、药勺（灯、火柴、药勺（4 4把）、高压蒸汽灭菌锅（把）、高压蒸汽灭菌锅（把）、高压蒸汽灭菌锅（把）、高压蒸汽灭菌锅（1 1台）、烘箱台）、烘箱台）、烘箱台）、烘箱（1 1台）、电热板（台）、电热板（台）、电热板（台）、电热板（6 6台）等。台）等。台）等。台）等。三、实验器材1、材料2020四、操作步骤四、操作步骤（一）培养基的制备（一）培养基的制备（一）培养基的制备（一）培养基的制备 LBLB培养基培养基培养基培养基(Luria-Bertanimedium)(Luria-Bertanimedium)为例为例为例为例四、操作步骤（一）培养基的制备2121 LB 酵母粉酵母粉 5g 5g蛋白胨蛋白胨 10g 10gNaCl 5gNaCl 5g琼脂粉或琼脂条琼脂粉或琼脂条 12-15g 12-15g蒸馏水蒸馏水 1000ml 1000mlpH 7.2-7.8pH 7.2-7.8依上述配方配制150ml，请换算好相应的质量数。（称量纸，药勺，天平，烧杯，量筒，三角瓶，试管）（试管（试管 4-5ml；剩余装；剩余装入三角瓶入三角瓶）倒平板（倒平板（5个）搁置斜面（个）搁置斜面（4个个）干热或湿热干热或湿热L2222 制备制备LBLB平板平板待培养基冷却至待培养基冷却至45-6045-60（不烫手）时，于酒精灯（不烫手）时，于酒精灯火焰无菌区均匀倒入培养皿中（每个约火焰无菌区均匀倒入培养皿中（每个约20ml20ml），），冷却后凝固成固体胶状平板（冷却后凝固成固体胶状平板（LBLB平板）。平板）。搁置斜面：适当冷却后便可将试管口端搁在玻璃搁置斜面：适当冷却后便可将试管口端搁在玻璃棒或其他合适高度的器具上，斜面长度不超过试棒或其他合适高度的器具上，斜面长度不超过试管总长的管总长的1/21/2为宜。为宜。制备LB平板2323 每人携带每人携带2 2个平板，自己设计实验，分离培养微生个平板，自己设计实验，分离培养微生物。物。倒扣培养，尽可能密封倒扣培养，尽可能密封。注意观察，将实验。注意观察，将实验结果简单描述。（采集的样品、生长的状况结果简单描述。（采集的样品、生长的状况 时间，时间，快慢快慢、种类和数量是否可区分，各多少），交给、种类和数量是否可区分，各多少），交给学习委员，下次课分享。学习委员，下次课分享。每人携带2个平板，自己设计实验，分离培养微生物。倒扣培养，尽2424（二）灭菌（二）灭菌（二）灭菌（二）灭菌 干热灭菌操作步骤：干热灭菌操作步骤：干热灭菌操作步骤：干热灭菌操作步骤：（1 1）用报纸条包好干燥的培养皿。）用报纸条包好干燥的培养皿。）用报纸条包好干燥的培养皿。）用报纸条包好干燥的培养皿。（2 2）将待灭菌物品均匀放入烘箱内。）将待灭菌物品均匀放入烘箱内。）将待灭菌物品均匀放入烘箱内。）将待灭菌物品均匀放入烘箱内。（3 3）开启电源，设定温度和时间（）开启电源，设定温度和时间（）开启电源，设定温度和时间（）开启电源，设定温度和时间（160160170170，2 2小时小时小时小时）。）。）。）。（4 4）切断电源，待温度降至）切断电源，待温度降至）切断电源，待温度降至）切断电源，待温度降至7070以下时，打开箱以下时，打开箱以下时，打开箱以下时，打开箱门，取出灭菌物品。门，取出灭菌物品。门，取出灭菌物品。门，取出灭菌物品。（二）灭菌干热灭菌操作步骤：2525湿热灭菌操作步骤：1 1、灭菌物准备、灭菌物准备、灭菌物准备、灭菌物准备 2 2、高压蒸汽灭菌、高压蒸汽灭菌、高压蒸汽灭菌、高压蒸汽灭菌（1 1）加水）加水）加水）加水（2 2）装锅）装锅）装锅）装锅（3 3）接通热源，设置参数（）接通热源，设置参数（）接通热源，设置参数（）接通热源，设置参数（121121，15min15min30min30min）（4 4）升压、升温）升压、升温）升压、升温）升压、升温（5 5）切断电源）切断电源）切断电源）切断电源（6 6）取出灭菌物）取出灭菌物）取出灭菌物）取出灭菌物（7 7）待培养基冷却后置于）待培养基冷却后置于）待培养基冷却后置于）待培养基冷却后置于3737恒温箱内培养恒温箱内培养恒温箱内培养恒温箱内培养24h24h，若无菌生长，若无菌生长，若无菌生长，若无菌生长则放入冰箱或阴凉处保存备用。则放入冰箱或阴凉处保存备用。则放入冰箱或阴凉处保存备用。则放入冰箱或阴凉处保存备用。湿热灭菌操作步骤：1、灭菌物准备2626五五五五 思考题思考题思考题思考题 1 1、培养微生物的培养基应具备哪些条件？、培养微生物的培养基应具备哪些条件？、培养微生物的培养基应具备哪些条件？、培养微生物的培养基应具备哪些条件？2 2、为什么培养基配制好后必须立即灭菌？采用那种灭菌、为什么培养基配制好后必须立即灭菌？采用那种灭菌、为什么培养基配制好后必须立即灭菌？采用那种灭菌、为什么培养基配制好后必须立即灭菌？采用那种灭菌方式？方式？方式？方式？3 3、为什么高压蒸汽灭菌时要先将冷空气排尽？、为什么高压蒸汽灭菌时要先将冷空气排尽？、为什么高压蒸汽灭菌时要先将冷空气排尽？、为什么高压蒸汽灭菌时要先将冷空气排尽？4 4、还有哪种灭菌方式属于干热灭菌？、还有哪种灭菌方式属于干热灭菌？、还有哪种灭菌方式属于干热灭菌？、还有哪种灭菌方式属于干热灭菌？5 5、紫外线灭菌的原理是什么？、紫外线灭菌的原理是什么？、紫外线灭菌的原理是什么？、紫外线灭菌的原理是什么？3 3方面方面方面方面 6 6、过滤除菌一般用多大孔径的滤膜？、过滤除菌一般用多大孔径的滤膜？、过滤除菌一般用多大孔径的滤膜？、过滤除菌一般用多大孔径的滤膜？五思考题2727六六六六 设计题设计题设计题设计题 1 1、为什么干热灭菌比湿热灭菌所需要的温、为什么干热灭菌比湿热灭菌所需要的温、为什么干热灭菌比湿热灭菌所需要的温、为什么干热灭菌比湿热灭菌所需要的温度高，时间长？请设计干热灭菌和湿热度高，时间长？请设计干热灭菌和湿热度高，时间长？请设计干热灭菌和湿热度高，时间长？请设计干热灭菌和湿热灭菌的效果比较实验方案。灭菌的效果比较实验方案。灭菌的效果比较实验方案。灭菌的效果比较实验方案。六设计题1、为什么干热灭菌比湿热灭菌所需要的温2828