《薄层色谱鉴别》ppt课件

薄层色谱法薄层色谱法 薄层色谱鉴别薄层色谱法 薄层色谱鉴别1概念概念薄层色谱法薄层色谱法(TLC)(TLC)将固定相将固定相(如硅胶如硅胶)薄薄地均匀涂敷在底板薄薄地均匀涂敷在底板(或棒或棒)上，试样点在薄层一端，在展开罐内上，试样点在薄层一端，在展开罐内展开，由于各组分在薄层上的移动距离不同，展开，由于各组分在薄层上的移动距离不同，形成互相分离的斑点，测定各斑点的位置及形成互相分离的斑点，测定各斑点的位置及其密度就可以完成对试样的定性、定量分析其密度就可以完成对试样的定性、定量分析的色谱法。的色谱法。薄层色谱鉴别概念薄层色谱法(TLC)薄层色谱鉴别2 薄层色谱法是一种吸附薄层色谱分离法，它薄层色谱法是一种吸附薄层色谱分离法，它利用各成分对同一吸附剂吸附能力不同，使在利用各成分对同一吸附剂吸附能力不同，使在移动相（溶剂）流过固定相（吸附剂）的过程移动相（溶剂）流过固定相（吸附剂）的过程中，连续的产生吸附、解吸附、再吸附、再解中，连续的产生吸附、解吸附、再吸附、再解吸附，从而达到各成分的互相分离的目的。吸附，从而达到各成分的互相分离的目的。基本原理基本原理薄层色谱鉴别 薄层色谱法是一种吸附薄层色谱分离法，它利用各成分对同3在给定的条件下（吸附剂、展开剂、板层厚在给定的条件下（吸附剂、展开剂、板层厚度等），化合物移动的距离和展开剂移动的度等），化合物移动的距离和展开剂移动的距离之比是一定的，即距离之比是一定的，即RfRf值是化合物的物理值是化合物的物理常数，其大小只与化合物本身的结构有关，常数，其大小只与化合物本身的结构有关，因此可以根据因此可以根据RfRf值鉴别化合物值鉴别化合物。薄层色谱鉴别在给定的条件下（吸附剂、展开剂、板层厚度等），化合物移动的距4比移值比移值组分二组分二组分一组分一被分离被分离混合物混合物薄层色谱展开示意图薄层色谱展开示意图薄层色谱鉴别比移值组分二组分一被分离混合物薄层色谱展开示意图薄层色谱鉴5薄层色谱法薄层色谱法优点优点 操作简单，定性结果直观操作简单，定性结果直观缺点缺点有一定毒性、定量方面的精密度有一定毒性、定量方面的精密度较差较差薄层色谱鉴别薄层色谱法优点 操作简单，定性结果直观缺点有一定毒性、定量方6实验仪器实验仪器 载板载板 固定相（吸附剂）或载体固定相（吸附剂）或载体 涂布器涂布器 点样器点样器 展开室展开室 实验操作实验操作薄层色谱鉴别实验仪器实验操作薄层色谱鉴别7实验操作实验操作1 薄层板的制备薄层板的制备 吸附剂（硅胶）调制玻璃板玻璃板涂布调制时慢慢搅拌，勿使产生气泡。调制时慢慢搅拌，勿使产生气泡。均匀涂布在玻璃板上，摇动摊平，晾干。均匀涂布在玻璃板上，摇动摊平，晾干。使用前放入烘箱内，在使用前放入烘箱内，在105-115105-115左右烘干左右烘干40-50min40-50min。冷。冷 却后使用。却后使用。粘合剂、添加剂粘合剂、添加剂薄层色谱鉴别实验操作1 薄层板的制备 吸附剂（硅胶）调制玻璃板涂布调8 固定相（吸附剂）的选择固定相（吸附剂）的选择纤维素、淀粉纤维素、淀粉硅酸镁硅酸镁硫酸钙硫酸钙 硅胶硅胶佛罗里硅土佛罗里硅土氧化镁氧化镁 氧化铝氧化铝活性炭活性炭对极性有机物的吸附作用增强对极性有机物的吸附作用增强薄层色谱鉴别 固定相（吸附剂）的选择纤维素、淀粉硅酸镁硫酸钙 硅胶佛92 供试品的制备供试品的制备：按照各药品质量标准规：按照各药品质量标准规定的方法进行提取分离。制得的供试品应放定的方法进行提取分离。制得的供试品应放置于密塞的小瓶中，防止溶剂挥发影响点样置于密塞的小瓶中，防止溶剂挥发影响点样量。量。3 3 对照品溶液的制备对照品溶液的制备：可按质量标准规定：可按质量标准规定精配成一定浓度的对照品溶液，置密塞小瓶精配成一定浓度的对照品溶液，置密塞小瓶中备用。标准药材对照溶液，一般需照供试中备用。标准药材对照溶液，一般需照供试品的制备方法制备。在使用对照品溶液时一品的制备方法制备。在使用对照品溶液时一定要注意将取样的毛细管充分洗干净，防止定要注意将取样的毛细管充分洗干净，防止造成对照品污染。造成对照品污染。薄层色谱鉴别2 供试品的制备：按照各药品质量标准规定的方法进行提取分104 4 点样点样：按规定吸取溶液用定量点样毛细按规定吸取溶液用定量点样毛细管或色谱用微量注射器点样于薄层板上。管或色谱用微量注射器点样于薄层板上。点样基线距底边的距离为点样基线距底边的距离为1 12cm2cm，点间距，点间距一般为一般为1.0-1.5cm1.0-1.5cm。点样直径一般应小于。点样直径一般应小于5mm5mm。两个以上的点样应在同一水平线上，。两个以上的点样应在同一水平线上，并与薄层板的底边平行。点样时必须注意并与薄层板的底边平行。点样时必须注意勿损伤薄层表面。勿损伤薄层表面。薄层色谱鉴别4 点样：按规定吸取溶液用定量点样毛细管或色谱用微量注射器点11 点样示意图点样示意图对照品对照品样样供试品样供试品样点样直径点样直径5mm1cm点间距点间距1.5cm1-2cm薄层色谱鉴别 点样示意图对照品样供试品样点样直径5mm1cm点间12自动点样器自动点样器毛细管点样毛细管点样薄层色谱鉴别自动点样器毛细管点样薄层色谱鉴别135 5 展开展开展开室展开室展开剂（流动相）的选择展开剂（流动相）的选择：主要根据样品中主要根据样品中各组分的极性、溶剂对于样品中各组分溶解各组分的极性、溶剂对于样品中各组分溶解度等因素来考虑。度等因素来考虑。薄层色谱鉴别5 展开薄层色谱鉴别14展开剂的选择展开剂的选择 正己烷正己烷 环己烷环己烷 四氯化碳四氯化碳 甲苯甲苯 氯仿氯仿 正丁醇正丁醇 乙酸乙酯乙酸乙酯 丙酮丙酮 乙醇乙醇 甲醇甲醇 水水溶剂的洗脱能力随溶剂的极性增大而增强溶剂的洗脱能力随溶剂的极性增大而增强在一块薄层板上进行试验：在一块薄层板上进行试验：若所选展开剂使混合物中所有的组分点都移到了溶剂前沿，此溶剂的极若所选展开剂使混合物中所有的组分点都移到了溶剂前沿，此溶剂的极性过强；性过强；若所选展开剂几乎不能使混合物中的组分点移动，留在了原点上，此溶剂若所选展开剂几乎不能使混合物中的组分点移动，留在了原点上，此溶剂的极性过弱。的极性过弱。理想的展开剂应能使混合物分离后各组分的理想的展开剂应能使混合物分离后各组分的R Rf f值相差尽可能大。值相差尽可能大。各组分理想的比移值在各组分理想的比移值在0.2-0.80.2-0.8之间。之间。当一种溶剂不能很好地展开各组分时，常选择用混合溶剂作为展开剂。先当一种溶剂不能很好地展开各组分时，常选择用混合溶剂作为展开剂。先用一种极性较小的溶剂为基础溶剂展开混合物，若展开不好，用极性较大用一种极性较小的溶剂为基础溶剂展开混合物，若展开不好，用极性较大的溶剂与前一溶剂混合，调整极性，再次试验，直到选出合适的展开剂组的溶剂与前一溶剂混合，调整极性，再次试验，直到选出合适的展开剂组合。合。薄层色谱鉴别展开剂的选择 正己烷 环己烷 四氯化碳 甲苯 氯仿 151-2cm展开示意图展开示意图展开剂要接触到薄展开剂要接触到薄层板下沿，但切勿层板下沿，但切勿接触到样点。接触到样点。盖上盖子，展开。盖上盖子，展开。观察展开情况。观察展开情况。取出薄层板取出薄层板薄层色谱鉴别1-2cm展开示意图展开剂要接触到薄层板下沿，但切勿接触到样16上升法上升法倾斜上行法倾斜上行法下降法下降法展开方式示意图展开方式示意图薄层色谱鉴别上升法倾斜上行法下降法展开方式示意图薄层色谱鉴别17影响展开的因素影响展开的因素 A A 相对湿度的影响相对湿度的影响 B B 溶剂蒸汽的影响溶剂蒸汽的影响 C C 温度的影响温度的影响 D D 展距的影响展距的影响薄层色谱鉴别影响展开的因素 薄层色谱鉴别18展开中斑点异常现象的探讨展开中斑点异常现象的探讨（1 1）边缘效应边缘效应：同一种化合物，在同一块薄层板上，：同一种化合物，在同一块薄层板上，用同一展开剂，在同一层析缸内展开后，薄层中部的用同一展开剂，在同一层析缸内展开后，薄层中部的斑点比薄层两侧边缘处的斑点的斑点比薄层两侧边缘处的斑点的 Rf Rf值小即为边缘效应。值小即为边缘效应。常用的常用的解决办法解决办法：增加展开室（层析缸）中溶剂蒸气饱和度。增加展开室（层析缸）中溶剂蒸气饱和度。选用较合适的单一展开剂代替混合展开剂。选用较合适的单一展开剂代替混合展开剂。采用共沸混合展开剂代替一般混合展开剂。采用共沸混合展开剂代替一般混合展开剂。在薄层板的两边各刮去约在薄层板的两边各刮去约5mm5mm的吸附剂有助于防止的吸附剂有助于防止 边缘效应。边缘效应。薄层色谱鉴别展开中斑点异常现象的探讨薄层色谱鉴别19（2 2）拖尾现象拖尾现象（3 3）斑点形成念珠状斑点形成念珠状（4 4）同一块薄板上出现比移值相差悬殊同一块薄板上出现比移值相差悬殊 的斑点的斑点（5 5）斑点比移值不稳定斑点比移值不稳定（6 6）斑点异形斑点异形薄层色谱鉴别（2）拖尾现象薄层色谱鉴别206 6 显色显色 A 光学检出法光学检出法 a a 自然光自然光b b 紫外光紫外光c c 荧光荧光 B 蒸汽显色法蒸汽显色法 C 物理显色法物理显色法 D 试剂显色法试剂显色法 a a喷雾显色喷雾显色 b b 浸渍显色浸渍显色 (通用显色剂通用显色剂 硫酸溶液、硫酸溶液、0.5%0.5%碘的氯仿溶液、碘的氯仿溶液、中性中性0.05%0.05%高锰酸钾溶液、碱性高锰酸钾溶液高锰酸钾溶液、碱性高锰酸钾溶液)薄层色谱鉴别6 显色薄层色谱鉴别21三用紫外仪三用紫外仪显色用喷雾器显色用喷雾器薄层色谱鉴别三用紫外仪显色用喷雾器薄层色谱鉴别22举例举例麻杏石甘冲剂中麻黄的鉴别麻杏石甘冲剂中麻黄的鉴别 处方处方 麻黄麻黄31g 31g 苦杏仁苦杏仁31g 31g 生石膏生石膏157g 157g 甘草甘草 31g31g 鉴别鉴别 供试品溶液制备：取本品供试品溶液制备：取本品10g10g，加水，加水50ml50ml使溶解，使溶解，加氨水加氨水1ml1ml使成碱性，用乙醚提取使成碱性，用乙醚提取2 2次，每次次，每次10ml10ml，合并提取液，用无水硫酸钠脱水，过滤，滤液挥去合并提取液，用无水硫酸钠脱水，过滤，滤液挥去乙醚，残渣加甲醇乙醚，残渣加甲醇2ml2ml，作为供试品溶液。，作为供试品溶液。对照品溶液制备：取盐酸麻黄碱对照品加甲醇制成对照品溶液制备：取盐酸麻黄碱对照品加甲醇制成每每1ml1ml含含1mg1mg的溶液，作为对照品溶液。的溶液，作为对照品溶液。薄层色谱鉴别举例麻杏石甘冲剂中麻黄的鉴别处方 麻黄31g 苦杏23展开系统：硅胶板；以展开系统：硅胶板；以氯仿甲醇浓氨水试液氯仿甲醇浓氨水试液（20:5:0.520:5:0.5）为展开剂；）为展开剂；显色：茚三酮试液，在显色：茚三酮试液，在105105加热至斑点清晰。加热至斑点清晰。显色结果：供试品溶液中，显色结果：供试品溶液中，在与对照品色谱相应的位在与对照品色谱相应的位置上，显相同的红色斑点。置上，显相同的红色斑点。盐酸麻黄碱盐酸麻黄碱 供试品供试品薄层色谱鉴别展开系统：硅胶板；以氯仿甲醇浓氨水试液（20:5:0.24薄层色谱法薄层色谱法应用应用1 食品和营养食品和营养2 药物和药物代谢药物和药物代谢3 化学和化工化学和化工4 医学和临床医学和临床5 毒物分析和法医化学毒物分析和法医化学 6 农药农药薄层色谱鉴别薄层色谱法应用薄层色谱鉴别25薄层色谱鉴别谢谢薄层色谱鉴别26