岛津液相色谱常见问题和其对策课件

SHIMADZU采用采用“HPLC”级溶剂级溶剂避免使用会引起柱效损失或保留特性变避免使用会引起柱效损失或保留特性变化的溶剂化的溶剂对试样有适宜的溶解度对试样有适宜的溶解度溶剂粘度要小溶剂粘度要小与检测器相匹配与检测器相匹配流动相的选择其他问题6/14/20241岛津液相色谱常见问题和其对策SHIMADZU其他问题水的等级水的等级纯化水纯化水蒸馏水蒸馏水去离子去离子水水波长波长(nm)纯化水纯化水去离子水去离子水因为不纯物的存在，去离子的吸光率较高因为不纯物的存在，去离子的吸光率较高纯化水中去除了无机和有机的污染物纯化水中去除了无机和有机的污染物吸吸吸吸光光光光率率率率6/14/20242岛津液相色谱常见问题和其对策SHIMADZU其他问题水水/MeOH梯度梯度ODS 柱柱鬼峰鬼峰Gradient Curve1 ml/min,0-100%MeOHover 10 mins and hold for15 mins.鬼峰的出现鬼峰的出现鬼峰的出现鬼峰的出现6/14/20243岛津液相色谱常见问题和其对策SHIMADZU其他问题溶剂的等级溶剂的等级HPLC级级优级纯优级纯分析纯分析纯都经过蒸馏和都经过蒸馏和0.45u的过滤的过滤(除纤维毛除纤维毛,未溶解的机械颗粒未溶解的机械颗粒优级纯的纯度比分析纯大优级纯的纯度比分析纯大,但里面含有防腐剂和抗氧化剂但里面含有防腐剂和抗氧化剂HPLC级经过级经过0.2u的过滤的过滤,且除去有紫外吸收的杂质且除去有紫外吸收的杂质微量分析、梯度洗脱微量分析、梯度洗脱微量分析、梯度洗脱微量分析、梯度洗脱6/14/20244岛津液相色谱常见问题和其对策SHIMADZU其他问题甲醇甲醇 乙睛乙睛 正己烷正己烷分析纯级和 HPLC 级溶剂的吸光度比较图6/14/20245岛津液相色谱常见问题和其对策SHIMADZU其他问题溶剂的过滤 滤膜类型：聚四氟乙烯滤膜：适用于所有溶剂，酸和盐。醋酸纤维滤膜：不适用于有机溶剂，特别适用于水基溶剂。尼龙66滤膜：适用于绝大多数有机溶剂和水溶液，可以用于强酸，不适用于二甲基甲酰胺。再生纤维素滤膜：蛋白吸收低，同样适用于水溶性样品和有机溶剂6/14/20246岛津液相色谱常见问题和其对策SHIMADZU脱气：脱气：除去流动相中溶解或因混合而产生的气泡除去流动相中溶解或因混合而产生的气泡 气泡对测定的影响：气泡对测定的影响：1）泵中气泡使液流波动，改变保留时间和）泵中气泡使液流波动，改变保留时间和峰面积峰面积 2）柱中气泡使流动相绕流，峰变形）柱中气泡使流动相绕流，峰变形 3）检测器中的气泡产生基线波动）检测器中的气泡产生基线波动其他问题6/14/20247岛津液相色谱常见问题和其对策SHIMADZU脱气的目的脱气的目的 1.防止由气泡的产生引起的故障 2.防止由溶解（在液体中的）气体量 的变动引起的检测不稳定程度 1）示差折射率检测器 *使折射率变化 2）UV检测器（200nm以下）*溶解氧气有吸收 3）荧光检测器 *溶解氧气有消光作用其他问题6/14/20248岛津液相色谱常见问题和其对策SHIMADZU其他问题脱气的方法脱气的方法1.超身波脱气法超身波脱气法2.He清除法清除法3.使用氟树脂膜的减压脱气法使用氟树脂膜的减压脱气法6/14/20249岛津液相色谱常见问题和其对策SHIMADZU其他问题He清除法清除法调压阀调压阀排气阀排气阀往送液泵往送液泵流动相流动相过滤器过滤器6/14/202410岛津液相色谱常见问题和其对策SHIMADZU其他问题氟树脂膜氟树脂膜真空室真空室往送液泵往送液泵真空泵真空泵控制器控制器流动相流动相使用氟树脂膜的减压脱气法使用氟树脂膜的减压脱气法6/14/202411岛津液相色谱常见问题和其对策SHIMADZU梯度洗脱法梯度洗脱法梯度洗脱装置：梯度洗脱装置：梯度洗脱装置：梯度洗脱装置：高压梯度：用两台高压输液泵将两种溶剂输入低压梯度：在常压下将两种溶剂（或多元溶剂）混合，然后用高压输液泵将流动相输入到色谱柱中。梯度洗脱：梯度洗脱：梯度洗脱：梯度洗脱：优点：可提高分离度、缩短分离时间、降低最小检测量和提高分离精度6/14/202412岛津液相色谱常见问题和其对策SHIMADZU梯度洗脱法的注意点梯度洗脱法的注意点l溶剂的纯度要高，否则梯度洗脱的重现性差l梯度混合的溶剂互溶性要好l梯度洗脱应使用对流动相组成变化不敏感的选择性检测器（如紫外吸收检测器或荧光检测器），而不能使用对流动相组成变化敏感的通用型检测器（如示差折光检测器）l查看空白实验的数据。l遵守分析周期。（最初的分析数据不采用）6/14/202413岛津液相色谱常见问题和其对策SHIMADZU样 品 处 理1.使用流动相溶解样品 -减少溶剂峰，尤其是组分峰靠近溶剂峰时由为重要 -保证样品在流动相中的溶解度，避免样品在系统中尤其在柱中产生沉淀 6/14/202414岛津液相色谱常见问题和其对策SHIMADZU其他问题缓冲液缓冲液 选择缓冲液的步骤 1.确定最佳分离状态时的流动相pH 2.选择具有与流动相的pH相近的pKa 的缓冲液 （即使浓度稀也具有较强能力的缓冲液）3.确认检测波长下缓冲液是否有大的吸收 （在波长210nm附近进行检测时，不能用醋酸和 柠檬酸的缓冲液）6/14/202415岛津液相色谱常见问题和其对策SHIMADZU一些代表性弱酸的一些代表性弱酸的pKa pK1 pK2 pK3 醋酸 4.87 柠檬酸 3.13 4.76 6.40 磷酸 2.16 7.2 1 12.32其他问题6/14/202416岛津液相色谱常见问题和其对策SHIMADZU缓冲液的使用缓冲液的使用 使用前必须过滤使用前必须过滤 使用后一定要进行清洗使用后一定要进行清洗，以免造成腐蚀、磨损、，以免造成腐蚀、磨损、阻塞阻塞:用纯水冲洗用纯水冲洗30-60min（1ml/min），），再用甲醇冲再用甲醇冲洗洗30min易受到细菌和霉菌的影响易受到细菌和霉菌的影响 不能直接用有机溶剂冲洗不能直接用有机溶剂冲洗6/14/202417岛津液相色谱常见问题和其对策SHIMADZU液相色谱容易出问题的部件维护流程图吸滤头单向阀柱塞密封圈线路过滤器手动进样器检测器6/14/202418岛津液相色谱常见问题和其对策SHIMADZU管线选择材料 不锈钢 Teflon PEEK(聚醚酮)尺寸 0.1 mmI.D.x 1.6 mmO.D.0.3 mmI.D.x 1.6 mmO.D.0.5 mmI.D.x 1.6 mmO.D.0.8 mmI.D.x 1.6 mmO.D.6/14/202419岛津液相色谱常见问题和其对策SHIMADZU管线材料管线材料不锈钢不锈钢(可用于所有连接可用于所有连接)能承受几千能承受几千 kg/cm2 压力压力酸性或高浓度盐环境中易腐蚀酸性或高浓度盐环境中易腐蚀(尤其在尤其在pH小于小于2时时)PEEK(可用于所有连接可用于所有连接)能承受高达能承受高达 250 kg/cm2压力压力可在整个可在整个PH范围范围(pH 1-14)内使用内使用 不适用于高溶解性溶剂如氯仿等不适用于高溶解性溶剂如氯仿等Teflon(用于柱后阻尼管、反应管和排液管用于柱后阻尼管、反应管和排液管)化学惰性大化学惰性大能承受能承受 5 kgf/cm2 压力压力6/14/202420岛津液相色谱常见问题和其对策SHIMADZU材料：不锈钢烧结，孔径10um故障：堵塞表现：管路中不断有气泡生成措施：用520的稀硝酸，超声波清洗，再用蒸馏水清洗注意点：吸滤头拆下时不必将塑料管剪断吸滤头吸滤头液相色谱容易出问题的部件6/14/202421岛津液相色谱常见问题和其对策SHIMADZULC-10ATvp泵：串联 式往复泵LC-10ADvp泵：并联式 往复泵液相色谱容易出问题的部件6/14/202422岛津液相色谱常见问题和其对策SHIMADZU液相色谱容易出问题的部件单向阀结构单向阀结构抛光面透明塑料垫片宝石球吸液冲程排液冲程出口单向阀进口单向阀泵头流动相单向阀原理单向阀原理吸液冲程排液冲程出口单向阀进口单向阀泵头6/14/202423岛津液相色谱常见问题和其对策SHIMADZU液相色谱容易出问题的部件故障1：宝石球粘附于垫片表现：泵无法吸液或排液，流路不通措施：1）用针筒抽出口单向阀以产生负压，使宝石球与垫片分开 2）拆下单向阀，放入异丙醇或水中，用超声波清洗单向阀单向阀6/14/202424岛津液相色谱常见问题和其对策SHIMADZU液相色谱容易出问题的部件故障2：宝石球或塑料垫片受污导致密封不好表现：系统压力波动大措施：拆下单向阀，放入异丙醇或水中，用超 声波清洗单向阀单向阀6/14/202425岛津液相色谱常见问题和其对策SHIMADZU故障：密封圈磨损而导致 密封不良现象：系统压力波动大或 漏夜措施：更换密封圈注意点：更换密封圈 拆卸泵头前，柱塞杆 复位 （PSET）柱塞密封圈柱塞密封圈流动相泵头清洗管路柱塞杆密封圈液相色谱容易出问题的部件6/14/202426岛津液相色谱常见问题和其对策SHIMADZU故障：堵塞现象：系统压力波动大或压 力偏高措施：5稀硝酸，超声波清 洗判断依据：关闭排液阀，断开出口管路，设定流速1mL/min，如压力3kgf/cm2，则可能堵塞。线路过滤器线路过滤器排液阀压力传感器线路过滤器流动相液相色谱容易出问题的部件6/14/202427岛津液相色谱常见问题和其对策SHIMADZU液相色谱容易出问题的部件进样器进样器自动进样器手动进样器 原理：（六通阀）注入方式：1）全量注入 2）部分注入6/14/202428岛津液相色谱常见问题和其对策SHIMADZU液相色谱容易出问题的部件进样量和检测器响应的关系示意图进样量和检测器响应的关系示意图进样体体积 检检测测器器响响应应值值定量定量环环体体积的一半的一半3倍定量倍定量环环体体积全量注入全量注入部分注入部分注入6/14/202429岛津液相色谱常见问题和其对策SHIMADZU手动进样器的原理图手动进样器的原理图 装填状态装填状态进样状态进样状态6/14/202430岛津液相色谱常见问题和其对策SHIMADZU交叉污染的原因6/14/202431岛津液相色谱常见问题和其对策SHIMADZU便捷的方法（不需清洗）便捷的方法（不需清洗）1.进样状态下插入微量注射器进样状态下插入微量注射器 2.切到装填状态切到装填状态 3.注入样品注入样品 4.切回到进样状态切回到进样状态手动进样法手动进样法手动进样法手动进样法6/14/202432岛津液相色谱常见问题和其对策SHIMADZU操作注意点：操作注意点：1）插针应插到底2）进样应使用液相色谱专用平头进样针3）清洗应使用专用针口清洗器手动进样器手动进样器定子转子塑料箍弹簧不锈钢套液相色谱容易出问题的部件6/14/202433岛津液相色谱常见问题和其对策SHIMADZU手动进样阀 故障：转子密封损坏 现象：漏液 原因：a 拧的太紧 b 样品太脏 c 针头损坏或不使用液相专用针 解决措施：更换转子密封，并在使用液相色谱容易出问题的部件6/14/202434岛津液相色谱常见问题和其对策SHIMADZU液相色谱容易出问题的部件手动进样阀 故障：载样困难 原因：a 定量环堵塞 b 进样器污染 解决措施：清洗或更换定量环、进样器6/14/202435岛津液相色谱常见问题和其对策SHIMADZU液相色谱容易出问题的部件分析结果重现性好分析结果重现性好提高柱效提高柱效降低柱压降低柱压保证检测稳定性保证检测稳定性 6/14/202436岛津液相色谱常见问题和其对策SHIMADZU柱子 故障：系统高压、峰型变差（拖尾峰、前沿峰、分叉峰），保留时间的改变 解决措施：清洗 正相柱，正庚烷、氯仿、乙酸乙酯、丙酮、乙醇 反相柱，甲醇、乙腈、氯仿、异丙醇、0.05M稀硫酸液相色谱容易出问题的部件6/14/202437岛津液相色谱常见问题和其对策SHIMADZU液相色谱容易出问题的部件峰产生有肩或分叉的原因峰产生有肩或分叉的原因1.柱子劣化柱子劣化 （进口处产生不均匀的空隙）（进口处产生不均匀的空隙）2.样品劣化样品劣化 （生成氧化物、分解物等）（生成氧化物、分解物等）判断标准判断标准 所有的峰都产生有肩峰或分叉时则为柱子劣化所有的峰都产生有肩峰或分叉时则为柱子劣化6/14/202438岛津液相色谱常见问题和其对策SHIMADZU延长柱寿命方法：延长柱寿命方法：倒冲柱倒冲柱 换过滤片换过滤片 修补柱头修补柱头 液相色谱容易出问题的部件6/14/202439岛津液相色谱常见问题和其对策SHIMADZU液相色谱容易出问题的部件柱的补修柱的补修6/14/202440岛津液相色谱常见问题和其对策SHIMADZU填料的取出填料的取出液相色谱容易出问题的部件6/14/202441岛津液相色谱常见问题和其对策SHIMADZU恢复例恢复例液相色谱容易出问题的部件6/14/202442岛津液相色谱常见问题和其对策SHIMADZU硅胶基底硅胶基底聚合物基底聚合物基底pH 范围范围2-7.5宽范围宽范围有机溶剂有机溶剂所有所有有限制有限制压力压力 250 kgf/cm2低压低压温度温度宽范围宽范围60C色谱柱的类型及适用范围色谱柱的类型及适用范围液相色谱容易出问题的部件6/14/202443岛津液相色谱常见问题和其对策SHIMADZU分分 析析 柱柱 的的 维维 护护1.在在使用新柱之前，最好用强溶剂在低流量下使用新柱之前，最好用强溶剂在低流量下(0.2-0.3 ml/min)冲洗冲洗 30 mins，长时间未用的分析柱也要长时间未用的分析柱也要同样同样 处理处理2.定期使用强溶剂冲洗柱子定期使用强溶剂冲洗柱子3、使用缓冲盐时，要先用水冲洗，再用有机溶剂冲洗、使用缓冲盐时，要先用水冲洗，再用有机溶剂冲洗4、净化样品净化样品5、分离条件、分离条件6、不使用时，要盖上盖子，避免固定相干枯、不使用时，要盖上盖子，避免固定相干枯7、使用预柱、使用预柱8、避免流动相组成及极性的剧烈变化、避免流动相组成及极性的剧烈变化9、避免压力脉冲的剧烈变化、避免压力脉冲的剧烈变化液相色谱容易出问题的部件6/14/202444岛津液相色谱常见问题和其对策SHIMADZU柱压低于柱压低于150kgf/cm2柱温在柱温在40左右，最高使用温度为左右，最高使用温度为50缓冲液缓冲液PH使用范围为使用范围为27流动相有机溶剂比例过低流动相有机溶剂比例过低,柱效下降快柱效下降快硅胶在硅胶在硅胶在硅胶在PHPHPHPH为为为为3 3 3 34 4 4 4时稳定性最好时稳定性最好时稳定性最好时稳定性最好碱浓度越低，流动相含水量越低，硅胶越稳定。碱浓度越低，流动相含水量越低，硅胶越稳定。碱浓度越低，流动相含水量越低，硅胶越稳定。碱浓度越低，流动相含水量越低，硅胶越稳定。ODSODS柱的使用注意点：柱的使用注意点：柱的使用注意点：柱的使用注意点：液相色谱容易出问题的部件6/14/202445岛津液相色谱常见问题和其对策SHIMADZU紫外检测器紫外检测器参比池样品池光线光电倍增管液相色谱容易出问题的部件6/14/202446岛津液相色谱常见问题和其对策SHIMADZU更换氘灯更换氘灯（紫外检测器）判断氘灯能量：设定220nm波长，检查参比池能量，如 能量低于800，需更换氘灯。操作注意点：不要用手直接接触氘灯表面液相色谱容易出问题的部件6/14/202447岛津液相色谱常见问题和其对策SHIMADZU液相色谱容易出问题的部件故障：样品池受污故障：样品池受污表现：样品池和参比池能量相差较大表现：样品池和参比池能量相差较大检查方法：设定检查方法：设定250nm250nm波长，通甲醇或水，查看波长，通甲醇或水，查看SMPL ENSMPL EN和和 REF EN REF EN，如两者相差较大，则样品，如两者相差较大，则样品池受污。池受污。措施：用针筒注入异丙醇，清洗样品池；如污染措施：用针筒注入异丙醇，清洗样品池；如污染严重，严重，拆开样品池，将透镜等放入异丙醇中超拆开样品池，将透镜等放入异丙醇中超声波清洗。声波清洗。紫外检测器紫外检测器6/14/202448岛津液相色谱常见问题和其对策SHIMADZU示差折光检测器原理：连续测定流通池中溶液折射率来测原理：连续测定流通池中溶液折射率来测定试样中各组分浓度。定试样中各组分浓度。优点：通用型检测器，优点：通用型检测器，缺点：缺点：1）对温度变化敏感）对温度变化敏感2）对溶剂组成变化敏感，不能用于梯度检）对溶剂组成变化敏感，不能用于梯度检测测3）属于中等灵敏度的检测器）属于中等灵敏度的检测器6/14/202449岛津液相色谱常见问题和其对策SHIMADZU液相色谱常见问题及其对策液相色谱常见问题及其对策液相色谱常见问题类型液相色谱常见问题类型l A.压力异常（偏高、波动）压力异常（偏高、波动）l B.漏液漏液 l C.保留时间漂移保留时间漂移l D.基线问题（漂移、噪声）基线问题（漂移、噪声）l E.峰形异常峰形异常6/14/202450岛津液相色谱常见问题和其对策SHIMADZU现象：无压力，流动相不流动可能原因 1、保险丝断或电源问题 2、柱塞杆折断 3、泵头内有空气或流动相不足 4、单向阀损坏 5、漏液 6、压力传感器损坏(流动相流动正常，但无压力)压力异常压力异常6/14/202451岛津液相色谱常见问题和其对策SHIMADZU现象：压力持续偏高或不断上升 1、流速设定过高 2、保护柱或柱子筛板堵塞 3、流动相使用不当或有缓冲盐析出 4、色谱柱选择不当 5、进样阀损坏 6、线路过滤器堵塞压力异常压力异常6/14/202452岛津液相色谱常见问题和其对策SHIMADZU压力异常压力异常现象：压力持续偏低 1、流速设定过低 2、色谱柱选择不当 3、柱温过高 4、系统漏液6/14/202453岛津液相色谱常见问题和其对策SHIMADZU现象：压力持续偏低 1、流速设定过低 2、色谱柱选择不当 3、柱温过高 4、系统漏液压力异常压力异常6/14/202454岛津液相色谱常见问题和其对策SHIMADZU压力异常压力异常现象：压力波动可能原因 1、泵头中有气泡 2、单向阀损坏 3、柱塞密封圈损坏 4、脱气不充分 5、系统漏液 6、使用了梯度洗脱6/14/202455岛津液相色谱常见问题和其对策SHIMADZU漏液漏液接头处漏液 1、接头处松动 2、接头磨损 3、接头被污染 4、部件不匹配 6/14/202456岛津液相色谱常见问题和其对策SHIMADZU漏液漏液泵漏液 1、单向阀松动 2、泵密封损坏 3、放空阀损坏 4、接头松动（不要拧的太紧）6/14/202457岛津液相色谱常见问题和其对策SHIMADZU漏液漏液泵漏液 1、单向阀松动 2、泵密封损坏 3、放空阀损坏 4、接头松动（不要拧的太紧）6/14/202458岛津液相色谱常见问题和其对策SHIMADZU进样阀漏液 可能原因 1、转子密封损坏 2、定量环堵塞 3、进样口密封松动 4、进样针尺寸不合适 5、废液管产生虹吸 6、废液管堵塞漏液漏液6/14/202459岛津液相色谱常见问题和其对策SHIMADZU检测器漏液 可能原因 1、流通池垫片损坏 2、流通池透镜破碎 3、手紧接头处漏液 4、进样针尺寸不合适 5、废液管堵塞 6、流通池堵塞漏液漏液6/14/202460岛津液相色谱常见问题和其对策SHIMADZU保留时间漂移保留时间漂移 可能原因 1、柱温变化 2、流动相组分变化 3、色谱柱没有平衡 4、流速变化 5、泵中有气泡 6、流动相选择不当 7、键合相流失 8、缓冲容量不够保留时间漂移保留时间漂移6/14/202461岛津液相色谱常见问题和其对策SHIMADZU基线漂移基线漂移 可能原因 1、温度波动 2、流动相不均匀(脱气，使用纯度更高的溶剂)3、流通池被污染或有气泡 4、流通池窗口破裂 5、流动相配比不当或流速变化 6、柱子平衡（约3060min）基线问题基线问题6/14/202462岛津液相色谱常见问题和其对策SHIMADZU基线漂移基线漂移 可能原因 7、流动相污染，变质或由低品质溶剂配成 8、样品中有强保留的物质以馒头样峰被洗出 9、检测器没有设定在最大吸收波长处基线问题基线问题6/14/202463岛津液相色谱常见问题和其对策SHIMADZU基线噪声（规则的）基线噪声（规则的）可能原因 1、流动相、泵、检测器中有气泡 2、有地方漏液 3、流动相混和不均匀 4、温度影响（检测器和柱温差别太大）5、其他电子设备的影响 基线问题基线问题6/14/202464岛津液相色谱常见问题和其对策SHIMADZU基线噪声（不规则的）基线噪声（不规则的）可能原因 1、流动相污染、变质或由低质溶剂配成 2、有地方漏液 3、流动相各溶剂不相溶或混和不均匀 4、流通池污染 5、检测池能量不足 6、系统内有气泡基线问题基线问题6/14/202465岛津液相色谱常见问题和其对策SHIMADZU前沿峰、拖尾峰前沿峰、拖尾峰 可能原因 1、柱塞板堵塞 2、色谱柱塌陷 3、柱外效应 4、干扰峰 5、缓冲不足或不合适 6、化学或次级保留（硅羟基效应）峰形异常峰形异常6/14/202466岛津液相色谱常见问题和其对策SHIMADZU前沿峰、拖尾峰前沿峰、拖尾峰 可能原因 7、重金属污染 8、样品溶剂选择不当 9、样品过载 10、柱温过低峰形异常峰形异常6/14/202467岛津液相色谱常见问题和其对策SHIMADZU分叉峰分叉峰 可能原因 1、保护柱或分析柱污染 2、样品溶剂不溶于流动相峰形异常峰形异常6/14/202468岛津液相色谱常见问题和其对策SHIMADZU峰展宽1.进样体积过大2.流动相粘度过高3.检测池体积过大4.保留时间过长5.柱外体积过大6.样品过载峰形异常峰形异常6/14/202469岛津液相色谱常见问题和其对策SHIMADZU峰变形峰变形 可能原因 1、样品过载 2、样品溶剂选择不当峰形异常峰形异常6/14/202470岛津液相色谱常见问题和其对策SHIMADZU鬼峰1、进样阀残余峰2、样品中未知物3、柱未平衡4、水污染5、三氟乙酸氧化6/14/202471岛津液相色谱常见问题和其对策