肝胆生化及检测课件

第九章第九章 肝胆生化及检测肝胆生化及检测第九章 肝胆生化及检测1第一节第一节 概概 述述第一节 概 述2一、肝脏结构一、肝脏结构（一（一）解剖学特点）解剖学特点双重血液供应双重血液供应 腹主动脉的分技肝动脉腹主动脉的分技肝动脉 氧氧 门静脉门静脉 营养营养 双重输出管道双重输出管道 肝静脉肝静脉 代谢降解物代谢降解物 下腔静脉下腔静脉 胆道系统胆道系统 脂溶性物质及其代谢产物脂溶性物质及其代谢产物 体外体外 一、肝脏结构（一）解剖学特点双重血液供应 腹主动脉的分技肝3（二（二）肝脏的显微结构特点）肝脏的显微结构特点1 1、组织结构、组织结构2 2、亚细胞结构、亚细胞结构（三（三）细胞的再生）细胞的再生（二）肝脏的显微结构特点1、组织结构2、亚细胞结构（三）4二、肝脏的生物化学功能二、肝脏的生物化学功能排泄功能排泄功能物质代谢功能物质代谢功能生物转化生物转化重要生化功能重要生化功能二、肝脏的生物化学功能排泄功能重要生化功能5（一）排泄功能（一）排泄功能主要排泄对象：胆汁酸、胆红素、氨主要排泄对象：胆汁酸、胆红素、氨1 1、胆汁酸代谢、胆汁酸代谢（1 1）胆汁的分泌：）胆汁的分泌：胆汁功能：促进脂类的消化吸收，同时能将体内某些代谢产物及生物转化胆汁功能：促进脂类的消化吸收，同时能将体内某些代谢产物及生物转化产物不断地排入肠道随粪便排出体外。产物不断地排入肠道随粪便排出体外。胆汁的来源：胆汁的来源：肝胆汁肝胆汁 胆囊胆汁胆囊胆汁 十二指肠十二指肠胆汁的成分：胆汁的成分：水水/胆汁酸（盐）、卵磷脂、蛋白质、脂肪酸和胆固醇胆汁酸（盐）、卵磷脂、蛋白质、脂肪酸和胆固醇（一）排泄功能主要排泄对象：胆汁酸、胆红素、氨1、胆汁酸代谢6（2 2）胆汁酸生成及种类：）胆汁酸生成及种类：初级胆汁酸（肝细胞）初级胆汁酸（肝细胞）初级胆汁酸（肝细胞）初级胆汁酸（肝细胞）次级胆汁酸（肠道）次级胆汁酸（肠道）次级胆汁酸（肠道）次级胆汁酸（肠道）初级游离胆汁酸初级游离胆汁酸初级游离胆汁酸初级游离胆汁酸初级结合胆汁酸初级结合胆汁酸初级结合胆汁酸初级结合胆汁酸（甘氨酸（甘氨酸（甘氨酸（甘氨酸/牛磺酸）牛磺酸）牛磺酸）牛磺酸）次级游离胆汁酸次级游离胆汁酸次级游离胆汁酸次级游离胆汁酸次级结合胆汁酸次级结合胆汁酸次级结合胆汁酸次级结合胆汁酸（甘氨酸（甘氨酸（甘氨酸（甘氨酸/牛磺酸）牛磺酸）牛磺酸）牛磺酸）（2）胆汁酸生成及种类：初级胆汁酸（肝细胞）初级游离胆汁酸7（3 3）胆汁酸肝肠循环：）胆汁酸肝肠循环：（4 4）胆汁酸的功能：）胆汁酸的功能：促进脂类消化促进脂类消化促进脂类吸收促进脂类吸收抑制胆固醇从胆汁中析出沉淀抑制胆固醇从胆汁中析出沉淀游离型胆汁酸游离型胆汁酸游离型胆汁酸游离型胆汁酸结合型胆汁酸结合型胆汁酸结合型胆汁酸结合型胆汁酸（3）胆汁酸肝肠循环：（4）胆汁酸的功能：促进脂类消化游离82 2、胆红素代谢、胆红素代谢胆色素胆色素 尿胆素原尿胆素原 粪胆素原粪胆素原尿胆素尿胆素粪胆素粪胆素胆绿素胆绿素胆红素胆红素未结合胆红素未结合胆红素(单核吞噬细胞系统如骨髓、脾脏单核吞噬细胞系统如骨髓、脾脏)结合胆红素（肝脏）结合胆红素（肝脏）胆素原胆素原2、胆红素代谢胆色素 尿胆素原未结合胆红素(单9部位肝脏细胞鸟氨酸鸟氨酸瓜瓜氨氨酸酸瓜氨酸瓜氨酸精氨酸代琥珀酸精氨酸代琥珀酸ATPAMP+PPi延延胡胡索索酸酸鸟氨酸鸟氨酸精氨酸精氨酸H2O尿素尿素天门冬氨酸天门冬氨酸NH3CO2氨氨甲甲酰酰磷磷酸酸+H2O尿素循环尿素循环部位肝脏细胞鸟氨酸瓜氨酸瓜氨酸精氨酸代琥珀酸ATPAMP10（二）物质代谢功能（二）物质代谢功能1 1、营养物质代谢、营养物质代谢2 2、激素及维生素代谢、激素及维生素代谢 (1)(1)在蛋白质代谢中的作用在蛋白质代谢中的作用 (2)(2)在氨基酸代谢中的作用在氨基酸代谢中的作用 (3)(3)在糖代谢中的作用在糖代谢中的作用 (4)(4)在脂代谢中的作用在脂代谢中的作用激素的灭活主要在肝脏进行激素的灭活主要在肝脏进行 多种维生素能在肝细胞内储存并进行转化多种维生素能在肝细胞内储存并进行转化 （二）物质代谢功能1、营养物质代谢2、激素及维生素代谢 11三、肝脏疾病的生化改变三、肝脏疾病的生化改变（一）胆红素代谢障碍（黄疸）（一）胆红素代谢障碍（黄疸）n定义定义:n黄疸分类黄疸分类:黄疸黄疸和阻塞性黄疸和阻塞性黄疸 溶血性黄疸溶血性黄疸肝细胞性黄疸肝细胞性黄疸高胆红素血症高胆红素血症三、肝脏疾病的生化改变（一）胆红素代谢障碍（黄疸）定义:黄疸12（二）胆汁酸代谢障碍（二）胆汁酸代谢障碍1 1、胆汁酸合成障碍、胆汁酸合成障碍2 2、胆汁酸向肠道排出障碍、胆汁酸向肠道排出障碍3 3胆汁酸肠肝循环紊乱胆汁酸肠肝循环紊乱4 4胆汁瘀积病变时胆汁酸代谢紊乱胆汁瘀积病变时胆汁酸代谢紊乱 （二）胆汁酸代谢障碍1、胆汁酸合成障碍13（三）血浆酶异常（三）血浆酶异常1 1肝脏合成酶类肝脏合成酶类:胆碱脂酶、凝血因子、铜蓝蛋白；胆碱脂酶、凝血因子、铜蓝蛋白；2.2.肝细胞内酶肝细胞内酶:ALT、AST 3 3肝脏阻塞性疾病酶活性改变：肝脏阻塞性疾病酶活性改变：ALP、GGT4 4肝硬化疾病酶活性改变：肝硬化疾病酶活性改变：单胺氧化酶（单胺氧化酶（MAOMAO）（四）血浆蛋白异常（四）血浆蛋白异常（三）血浆酶异常1肝脏合成酶类:胆碱脂酶、凝血因子、铜蓝蛋14第二节第二节 肝功能试验肝功能试验n血清（浆）蛋白血清（浆）蛋白n测定血清酶测定测定血清酶测定n血清胆红素测定血清胆红素测定n血清胆汁酸测定血清胆汁酸测定n血氨测定血氨测定第二节 肝功能试验血清（浆）蛋白15血清酶测定血清酶测定（一）氨基转移酶测定（一）氨基转移酶测定1 1赖氏法测定赖氏法测定ALTALT（）原理：（）原理：ALTALT催化催化丙氨酸丙氨酸(alamine)(alamine)与与-酮戊二酸酮戊二酸(-oxoglutarate)(-oxoglutarate)之间的氨基转移之间的氨基转移反应，生成反应，生成丙酮酸丙酮酸(pyruvate)(pyruvate)和谷氨酸和谷氨酸(glutamate)(glutamate)。在在3737及及pH7.4pH7.4条件下反应条件下反应30min30min，以，以2 2，4-4-二硝基苯肼二硝基苯肼终止反应，并与底物终止反应，并与底物-酮戊二酸和产物酮戊二酸和产物-丙酮酸的丙酮酸的羰基生成羰基生成2 2，4-4-二硝基苯腙二硝基苯腙，苯腙在碱性条件下生成红棕色，与，苯腙在碱性条件下生成红棕色，与505nm505nm波长处读取波长处读取吸光度后计算活性。吸光度后计算活性。（）（）方法评价：方法评价：赖氏法的实验结果需与赖氏法的实验结果需与卡门分光法的结果卡门分光法的结果对比后求出；对比后求出；NaOHNaOH的浓度的浓度对显色有影响；对显色有影响；该法的该法的重复性差重复性差。血清酶测定（一）氨基转移酶测定1赖氏法测定ALT（）原理16【参考范围参考范围】5 52525卡门氏单位卡门氏单位 【临床意义临床意义】(2)(2)慢性活动性肝炎或脂肪肝：慢性活动性肝炎或脂肪肝：(1)(1)肝细胞损伤的灵敏指标肝细胞损伤的灵敏指标:ALT轻度增高轻度增高(100200IU),或属正常范围或属正常范围,【参考范围】525卡门氏单位【临床意义】(2)慢性活172.2.连续监测法测定连续监测法测定ALT ALT（）原理：（）原理：采用酶偶联反应采用酶偶联反应,即即L-L-丙氨酸和丙氨酸和-酮戊二酸酮戊二酸在在ALTALT作用下，生成作用下，生成丙酮酸丙酮酸和和L-L-谷氨酸谷氨酸。丙酮酸再在丙酮酸再在LDLD作用下生成作用下生成L-L-乳酸乳酸，同时，同时NADHNADH被氧化为被氧化为NAD+,NAD+,可可在在340nm340nm处连续监测到处连续监测到NADHNADH的消耗量的消耗量,从而计算出从而计算出ALTALT活性浓度。活性浓度。双双试剂法试剂法 :首先使血清与缺少首先使血清与缺少-酮戊二酸的底物溶液混合，酮戊二酸的底物溶液混合，3737保温保温5 5分钟，将分钟，将标本中所含的标本中所含的-酮酸酮酸(如丙酮酸如丙酮酸)消耗完消耗完，然后，加入，然后，加入-酮戊二酸酮戊二酸启动启动ALTALT催化的反应，在波长催化的反应，在波长340nm340nm处连续监测吸光度下降速率。根据线性反处连续监测吸光度下降速率。根据线性反应期吸光度下降速率应期吸光度下降速率(-A/min)(-A/min)，来计算，来计算ALTALT的活性。的活性。2.连续监测法测定ALT（）原理：18（）（）方法评价：方法评价：存在着两个副反应，会使测定结果偏高；存在着两个副反应，会使测定结果偏高；A A、血清中存在的、血清中存在的-酮酸酮酸(如丙酮酸如丙酮酸)能消耗能消耗NADHNADH。B B、血清中谷氨酸脱氢酶、血清中谷氨酸脱氢酶(GLDH)(GLDH)增高时，在有氨存在条件下，亦能消耗增高时，在有氨存在条件下，亦能消耗NADHNADH。双试剂法，因温育期长，能有效地消除干扰反应，测定准确性双试剂法，因温育期长，能有效地消除干扰反应，测定准确性高，是高，是ALTALT测定的首选方法；测定的首选方法；血清不宜反复冰冻保存，以免影响酶活性；避免使用溶血标本。血清不宜反复冰冻保存，以免影响酶活性；避免使用溶血标本。（）方法评价：193.3.赖氏法测定赖氏法测定ASTAST（）原理：（）原理：血清中的血清中的ASTAST可催化可催化门冬氨酸门冬氨酸(aspartate)(aspartate)与与-酮戊二酸间的氨基移换，酮戊二酸间的氨基移换，生成生成草酸乙酸草酸乙酸(oxaloacetate)(oxaloacetate)和和L-L-谷氨酸谷氨酸。草酸乙酸自行脱羧转变成为丙酮酸草酸乙酸自行脱羧转变成为丙酮酸。反应。反应6060分钟后，加入分钟后，加入2 2，4-4-二硝基苯肼终止反应二硝基苯肼终止反应，并与，并与酮酸生反应生成两种酮酸生反应生成两种2 2，4-4-二硝基苯二硝基苯腙腙。在碱性条件下。在碱性条件下,两种苯腙的吸收光谱曲线有差别，在两种苯腙的吸收光谱曲线有差别，在505nm505nm处差异最大，由草处差异最大，由草酸乙酸转变成的丙酮酸所生成的苯腙呈色强度显著大于酸乙酸转变成的丙酮酸所生成的苯腙呈色强度显著大于-酮戊二酸苯腙酮戊二酸苯腙。据此可。据此可用比色法测定用比色法测定ASTAST活性。活性。（）方法评价：（）方法评价：赖氏法的实验结果需与赖氏法的实验结果需与卡门分光法的结果卡门分光法的结果对比后求出；对比后求出；该法的重复性差：该法的重复性差：负干扰现象负干扰现象 3.赖氏法测定AST（）原理：（）方法评价：20【参考范围参考范围】828卡门氏单位卡门氏单位 【临床意义临床意义】肌炎、胸膜炎、肾炎及肺炎：血清肌炎、胸膜炎、肾炎及肺炎：血清ASTAST也可轻度增高。也可轻度增高。心肌梗死：血清中心肌梗死：血清中ASTAST活性增高活性增高 各种肝病病人：血清各种肝病病人：血清ASTAST的升高的升高 【参考范围】828卡门氏单位【临床意义】心肌梗死：血清214 4连续监测法测定连续监测法测定AST AST （）原理：（）原理：采用酶偶联反应采用酶偶联反应,即即L-L-门冬氨酸和门冬氨酸和-酮戊二酸酮戊二酸在在ASTAST作用作用下，生成下，生成草酰乙酸和草酰乙酸和L-L-谷氨酸谷氨酸。草酰乙酸在。草酰乙酸在苹果酸脱氢酶苹果酸脱氢酶作用作用下生成下生成L-L-苹果酸，同时伴有苹果酸，同时伴有NADHNADH转化为转化为NAD+NAD+，在在340nm340nm监测监测NADHNADH的转化速率的转化速率，从而计算出，从而计算出ASTAST的活性。的活性。双试剂法双试剂法 :同测定。同测定。4连续监测法测定AST （）原理：双试剂法:同22（）方法评价（）方法评价 误差可来自内源性和误差可来自内源性和(或或)外源性外源性内源性干扰主要来自血清中高浓度丙酮酸和内源性干扰主要来自血清中高浓度丙酮酸和L-L-谷氨酸脱氢酶谷氨酸脱氢酶(GLDH)(GLDH)。外源性干扰来自试剂中污染的外源性干扰来自试剂中污染的GLDHGLDH和和ASTAST。【参考范围参考范围】5 540 IU/L(40 IU/L(连续监测法测定连续监测法测定)【临床意义临床意义】见赖氏法见赖氏法（）方法评价 误差可来自内源性和(或)外源性【参考范围】23(二二)ALP)ALP测定测定 n化学法化学法n连续监测法：连续监测法：鲍氏法鲍氏法金氏法金氏法皮氏法皮氏法(二)ALP测定 化学法连续监测法：鲍氏法金氏法皮氏法24、金氏法测定、金氏法测定ALPALP （）原理（）原理：ALPALP在碱性环境中作用于在碱性环境中作用于磷酸苯二钠磷酸苯二钠，使之水解释放出，使之水解释放出酚酚和磷酸和磷酸。酚在碱性溶液中与酚在碱性溶液中与4 4氨基安替比林作用，经铁氰化氨基安替比林作用，经铁氰化钾氧化形成红色醌类化合物钾氧化形成红色醌类化合物，根据红色深浅确定，根据红色深浅确定ALPALP的活力。的活力。(2)(2)方法评价：方法评价：磷酸苯二钠比色法与更早的磷酸苯二钠比色法与更早的-甘油磷酸钠法甘油磷酸钠法相比具有较大的相比具有较大的优点，如优点，如水解速度快，保温时间较短、灵敏度较高、显色稳定、水解速度快，保温时间较短、灵敏度较高、显色稳定、不需去蛋白、操作简单、快速不需去蛋白、操作简单、快速。但与。但与磷酸对硝基酚连续监测法磷酸对硝基酚连续监测法相比，准确度、精密度较低；操作比较繁琐相比，准确度、精密度较低；操作比较繁琐,，灵敏度低。，灵敏度低。、金氏法测定ALP（）原理：(2)方法评价：磷酸25【参考范围参考范围】成人：成人：3 313 13 单位单位 ，儿童：，儿童：5 52828单位单位 ALPALP金氏单位金氏单位定义是定义是100ml100ml血清，血清，3737与底物保温与底物保温1515分钟，产生分钟，产生1mg1mg酚为酚为1 1个金氏单位。个金氏单位。ALPALP主要用于诊断肝胆和骨骼疾病主要用于诊断肝胆和骨骼疾病 【临床意义临床意义】【参考范围】成人：313 单位，儿童：528单位 262.2.连续监测法测定连续监测法测定ALPALP（）原理：（）原理：以磷酸对硝基酚以磷酸对硝基酚(p-nitrophenyl phosphate,4-NPP)(p-nitrophenyl phosphate,4-NPP)为底物，为底物，2-2-氨氨基基-2-2-甲基甲基-1,3-1,3-丙醇（丙醇（2-amino-2-methyl-1-propanol,AMP2-amino-2-methyl-1-propanol,AMP）或二乙）或二乙醇胺为磷酸基的受体。在碱性环境下，醇胺为磷酸基的受体。在碱性环境下，ALPALP催化催化4-NPP4-NPP水解产生游离水解产生游离的对硝基酚，对硝基酚的对硝基酚，对硝基酚(p-nitrophenol(p-nitrophenol，4-NP)4-NP)在碱性溶液中转变成在碱性溶液中转变成黄色。根据黄色。根据405nm405nm处吸光度增高速率来计算处吸光度增高速率来计算ALPALP活性单位。活性单位。（）方法评价：（）方法评价：线性范围可达线性范围可达500U/L500U/L，批内，批内CVCV为为2.06%2.06%2.36%2.36%，批间，批间CVCV为为2.74%2.74%。2.连续监测法测定ALP（）原理：以磷酸对硝基酚(p-27【参考范围参考范围】男性：男性：1 11212岁岁 500U/L,500U/L,女性：女性：1 11212岁岁 500U/L 500U/L 12121515岁岁 750U/L1515岁岁 40 40 150U/L150U/L，2525岁岁 4040150U/L150U/L。【临床意义临床意义】见金氏法见金氏法【参考范围】【临床意义】见金氏法28(三三)GGT)GGT测定法测定法 化学法（重氮反应比色法）和连续监测法。化学法（重氮反应比色法）和连续监测法。1.1.重氮反应比色法测定重氮反应比色法测定GGTGGT(1)(1)原理：原理：【参考范围参考范围】男性男性 3 3 17 U/L17 U/L；女性女性 2 2 13 U/L13 U/L2.2.连续监测法测定连续监测法测定GGTGGT(1)(1)原理：原理：(2)(2)方法评价：方法评价：(2)(2)方法评价：方法评价：重氮比色法活性单位：100ml血清在37下反应1hr,生成0.5mol的-苯胺为1个GGT活性单位。男性：男性：111150 U/L50 U/L；(以以-谷氨酰谷氨酰-3-3-羧基羧基-4-4-硝基苯胺为底物硝基苯胺为底物)女性：女性：7 732 U/L 32 U/L 男性：男性：40U/L40U/L；女性：；女性：30U/L(30U/L(以以-谷氨酰谷氨酰-4-4-硝基苯胺为底物硝基苯胺为底物)【参考范围参考范围】(三)GGT测定法 1.重氮反应比色法测定GGT原理：【29(四四)MAO)MAO测定测定 (1)(1)原理原理:MAOMAO主要作用于主要作用于CH2-NH2CH2-NH2基团，在氧参与下，氧化脱氨生成基团，在氧参与下，氧化脱氨生成相应的卞醛、氨及过氧化氢。以苄氨偶氮相应的卞醛、氨及过氧化氢。以苄氨偶氮-萘酚为底物萘酚为底物,在在O2O2和和H20H20参与下，参与下，MAOMAO催化生成苄醛偶氮催化生成苄醛偶氮-萘酚、氨及过氧化氢，萘酚、氨及过氧化氢，用环己烷抽提后进行比色测定。用环己烷抽提后进行比色测定。(2)(2)方法评价：方法评价：【单位定义单位定义】：1ml1ml血清与底物在血清与底物在3737孵育孵育6060分钟，催化单胺氧化产生分钟，催化单胺氧化产生1nmol1nmol苄醛偶氮苄醛偶氮-萘酚萘酚为为1 1 个个MAOMAO单位。单位。【参考范围参考范围】12 1240 U/ml (1210340 U/ml (1210340103 U/L)40103 U/L)。【临床意义临床意义】：肝硬化时，肝纤维化现象十分活跃，肝硬化时，肝纤维化现象十分活跃，MAOMAO活性明显升高。活性明显升高。(四)MAO测定 原理:MAO主要作用于CH2-NH30血清胆红素测定血清胆红素测定重氮盐法重氮盐法胆红素氧化酶胆红素氧化酶(bilirubin oxidase,BOD)(bilirubin oxidase,BOD)法法高效液相色谱法高效液相色谱法(high performance liquid chromatography,HPLC)(high performance liquid chromatography,HPLC)、导数分光光度法导数分光光度法直接分光光度计法直接分光光度计法 测测定定方方法法血清胆红素测定重氮盐法胆红素氧化酶(bilirubin ox311 1重氮盐改良重氮盐改良J-G(Jendrassik and Grof method,J-G)J-G(Jendrassik and Grof method,J-G)法法(1)(1)原理原理:血清中血清中结合胆红素与重氮盐反应生成偶氮胆红素结合胆红素与重氮盐反应生成偶氮胆红素；同样条件下，；同样条件下，游离胆红素游离胆红素需要在加速剂作用下需要在加速剂作用下，使游离胆红素分子内的，使游离胆红素分子内的次级键断裂次级键断裂，极性上升并与重氮试，极性上升并与重氮试剂反应。反应完成后加入剂反应。反应完成后加入终止试剂终止试剂，继而加入，继而加入碱性酒石酸钾钠碱性酒石酸钾钠使紫色偶氮试剂转使紫色偶氮试剂转变为蓝色，波长变为蓝色，波长600nm600nm下比色分析，求出血样中总胆红素的含量。下比色分析，求出血样中总胆红素的含量。(2)(2)方法评价：方法评价：推荐的常规方法，其方法的线性范围较宽，在推荐的常规方法，其方法的线性范围较宽，在 342mol/L(200mg/L)342mol/L(200mg/L)浓度浓度下有较好的准确性和精确性，下有较好的准确性和精确性，高浓度时准确性和精确性降低高浓度时准确性和精确性降低。因此，建议浓度过。因此，建议浓度过高时减少血样用量测定。高时减少血样用量测定。1重氮盐改良J-G(Jendrassik and Grof32【临床意义临床意义】【参考范围参考范围】黄疸的鉴别诊断黄疸的鉴别诊断 总胆红素总胆红素:5.1:5.119.0mol/L(0.319.0mol/L(0.31.1mg/dL)1.1mg/dL)直接胆红素直接胆红素:1.71:1.716.8mol/L(0.16.8mol/L(0.10.4mg/dL)0.4mg/dL)【临床意义】【参考范围】黄疸的鉴别诊断 总胆红332 2胆红素胆红素BODBOD测定法测定法(1)(1)原理原理:BOD BOD在不同在不同pHpH条件下催化不同组份的条件下催化不同组份的胆红素氧化生成胆绿素胆红素氧化生成胆绿素，胆绿素与氧进胆绿素与氧进行非酶促反应转变为淡紫色化合物行非酶促反应转变为淡紫色化合物，胆红素的最大吸收峰在，胆红素的最大吸收峰在450nm450nm 附近。随着附近。随着胆红素被氧化胆红素被氧化,450nm,450nm下降，下降程度与胆红素浓度成正比下降，下降程度与胆红素浓度成正比。；在。；在pH8.0pH8.0条件下条件下,未未结合胆红素及结合胆红素均被氧化，用于测定结合胆红素及结合胆红素均被氧化，用于测定总胆红素总胆红素,在在pH=4.5pH=4.5的酸性条件的酸性条件下，下，BODBOD仅能催化结合胆红素和大部分仅能催化结合胆红素和大部分胆红素，而游离胆红素不被氧化，测定胆红素，而游离胆红素不被氧化，测定其含量代表其含量代表结合胆红素结合胆红素。(2)(2)方法评价：方法评价：BODBOD法测定总胆红素的准确性、精密度比改良法测定总胆红素的准确性、精密度比改良J-GJ-G法好法好 2胆红素BOD测定法(1)原理:BOD在不同p34【参考范围参考范围】血清总胆红素：血清总胆红素：10.264.10mol/L 10.264.10mol/L 血清结合胆红素：血清结合胆红素：2.572.56 mol/L 2.572.56 mol/L 胆红素胆红素mol/L=mol/L=胆红素胆红素mg/L X 17.1mg/L X 17.1【临床意义临床意义】见重氮比色法见重氮比色法【参考范围】血清总胆红素：10.264.10mol35四、血清胆汁酸测定四、血清胆汁酸测定高效液相色谱法高效液相色谱法放射免疫分析法放射免疫分析法酶免疫分析法酶免疫分析法比色分析测定法比色分析测定法 测测定定方方法法四、血清胆汁酸测定高效液相色谱法放射免疫分析法酶免疫分析法比36(1)(1)酶比色法测定原理酶比色法测定原理 3-HSD3-HSD胆汁酸胆汁酸 +NAD+NAD+3-3-氧氧-5-5类固醇类固醇+NADH +NADH （1 1）NADH+NBT NADH+NBT 甲甲jiejie（蓝色化合物（蓝色化合物 =540nm=540nm）（2 2）3-3-氧氧-5-5类固醇类固醇 +NAD+NAD+3-3-氧氧-5-5类固醇类固醇 +NADH +NADH （3 3）黄递酶黄递酶4 4-DH-DHu酶比色法酶比色法(1)酶比色法测定原理 3-HSD胆汁酸+NAD+37 由于胆汁酸在血中含量低，方法检测的灵敏度达不到要求，通过由于胆汁酸在血中含量低，方法检测的灵敏度达不到要求，通过增加增加3-3-氧氧-5-5-类固醇脱氢酶类固醇脱氢酶(4-DH)(4-DH)，胆汁酸经，胆汁酸经3-HSD3-HSD催化的产物催化的产物3-3-氧代胆酸在氧代胆酸在4-DH4-DH作用下再作用下再次脱氢，加大了次脱氢，加大了NADHNADH的生成量，提高了反应的检测能力（见反应式的生成量，提高了反应的检测能力（见反应式1 1、2 2、3 3）。但。但以上两种方法都存在一个缺点：生成的蓝色产物是一种染料，易于附着管壁，难于清以上两种方法都存在一个缺点：生成的蓝色产物是一种染料，易于附着管壁，难于清洗或堵塞管道。洗或堵塞管道。酶循环法测定原理为：酶循环法测定原理为：NADNAD+Thio-NAD Thio-NAD Thio-NADH Thio-NADH 胆汁酸胆汁酸3-3-氧代胆汁酸氧代胆汁酸NADHNADH3-HSD 由于胆汁酸在血中含量低，方法检测的灵敏度达不到要求，38(2)(2)酶比色测定法评价：酶比色测定法评价：快速、简便、准确、可靠和适用的优点。它即可以手工操作快速、简便、准确、可靠和适用的优点。它即可以手工操作、也可以在自动化仪器上进行。但试剂价贵、不易保持。对酶量、也可以在自动化仪器上进行。但试剂价贵、不易保持。对酶量的要求严格，以保证酶促反应在零级反应下进行，酶量不足易产的要求严格，以保证酶促反应在零级反应下进行，酶量不足易产生误差。生误差。此外，标准品的制备非常重要。常采用甘氨胆酸溶入小此外，标准品的制备非常重要。常采用甘氨胆酸溶入小牛血清中制成冻干品牛血清中制成冻干品。(2)酶比色测定法评价：快速、简便、准确、可靠和39【参考范围参考范围】1 1 7 mol/L7 mol/L(成人空腹血清总胆汁酸成人空腹血清总胆汁酸)【临床意义临床意义】任何引起肝细胞损伤的病理过程都可能引起血中胆汁酸升高可任何引起肝细胞损伤的病理过程都可能引起血中胆汁酸升高可见于各种类型的肝病、肝硬化、脂肪肝，也见于急慢性胆道阻塞。见于各种类型的肝病、肝硬化、脂肪肝，也见于急慢性胆道阻塞。其中空腹胆汁酸测定是一种敏感、特异性强并相对简单的肝功能试其中空腹胆汁酸测定是一种敏感、特异性强并相对简单的肝功能试验，是目前公认最敏感的肝功能试验之一。特别适用于可疑有肝病验，是目前公认最敏感的肝功能试验之一。特别适用于可疑有肝病但其它生化试验正常或轻度异常的病人诊断。但其它生化试验正常或轻度异常的病人诊断。【参考范围】1 7 mol/L(成人空腹血清总胆40血氨测定血氨测定n为一步法，也叫直接测定即不需从全血中分离出氨即可直接测定为一步法，也叫直接测定即不需从全血中分离出氨即可直接测定 n两步法，即先从全血中分离出氨两步法，即先从全血中分离出氨,而后再进行测定；而后再进行测定；微量扩散法、离子交换法微量扩散法、离子交换法 酶法和氨电极法酶法和氨电极法 血氨测定为一步法，也叫直接测定即不需从全血中分离出氨即可直接41(1)(1)原理：原理：(2)(2)血浆中的氨在足量血浆中的氨在足量-酮戊二酸和酮戊二酸和NADPHNADPH存在时，经谷氨酸存在时，经谷氨酸(3)(3)脱氢酶作用生成谷氨酸脱氢酶作用生成谷氨酸,并消耗并消耗NADPHNADPH，NADPHNADPH的下降速率与血浆的下降速率与血浆氨浓度成正比。氨浓度成正比。NHNH3 3-酮戊二酸酮戊二酸NADPH NADPH 谷氨酸谷氨酸NADPNADP+H H2 2O O谷氨酸脱氢酶速率法：谷氨酸脱氢酶速率法：谷氨酸脱氢酶谷氨酸脱氢酶(2)(2)方法评价：方法评价：本法特异性强、分析时间短，是较为理想的氨分析方法。在本法特异性强、分析时间短，是较为理想的氨分析方法。在200200mol/Lmol/L范围内、线性良好。精密度：批内范围内、线性良好。精密度：批内CV=3.9%CV=3.9%；批间；批间CV=4.5%CV=4.5%。回。回收率为收率为97.9%97.9%102.7%102.7%。原理：NH3-酮戊二酸NADPH 42【参考范围参考范围】血氨测定在诊断治疗肝性脑病中占有重要作用。血氨测定在诊断治疗肝性脑病中占有重要作用。【临床意义临床意义】1872mol/L(酶法酶法)【参考范围】血氨测定在诊断治疗肝性脑病中占有重要作用。【临床43