蛋白电泳轻链病课件

免疫球蛋白免疫球蛋白电泳及泳及轻链沉沉积病病20152015年年2024/5/251免疫球蛋白电泳及轻链沉积病2015年2023/8/412024/5/2522023/8/422024/5/2532023/8/43首先澄清“蛋白蛋白及及电泳泳”几个概念血清蛋白：白蛋白（血清蛋白：白蛋白（A A）+球蛋白（球蛋白（G G）血清球蛋白定量：分血清球蛋白定量：分为IgGIgG、A A、D D、E E、M M五五带。血清蛋白血清蛋白电泳：分泳：分为A A、1 1、2 2、五五带。如果出如果出现单克克龙蛋白蛋白(M(M带-姚明），姚明），则需做免疫固相蛋需做免疫固相蛋白白电泳泳(见下文下文)。-否否则不做！不做！免疫球蛋白由免疫球蛋白由4 4个个肽链组成：成：2 2个个轻链、2 2个重个重链（M M带5 5个）。个）。免疫球蛋白包括免疫球蛋白包括重重链包括：包括：、链 和和 免免疫球蛋白疫球蛋白轻链包括：包括：、链2024/5/254首先澄清“蛋白及电泳”几个概念血清蛋白：白蛋白（A）+球 2 2球蛋白：球蛋白：肾肾上腺不上腺不上腺不上腺不足、足、足、足、肾肾上腺皮上腺皮上腺皮上腺皮质类质类固固固固醇治醇治醇治醇治疗疗、糖尿病、糖尿病、糖尿病、糖尿病 、肾肾病病病病综综合征合征合征合征 球蛋白：球蛋白：转铁蛋白蛋白(Tf)(Tf)C-C-反反应蛋白蛋白营营养不良养不良养不良养不良 球蛋白：球蛋白：补体体C3C3、C4C4IgGIgG、A A、M M、D D、E E 深深蓝色柱色柱为典型典型肾病病电泳泳图，方，方块内文字是与内文字是与肾病相关病相关电泳增高的意泳增高的意义2024/5/255正常血清蛋白正常血清蛋白电泳泳图形状及其意形状及其意义正常血清蛋白正常血清蛋白电泳泳图形及意形及意义2球蛋白：肾上腺不足、肾上腺皮质类固醇治疗、糖尿病、肾病2024/5/256 1.50m正常正常 球蛋白球蛋白高度高度2023/8/461.50m正常球蛋白高度【醋酸醋酸纤维素膜法素膜法】参考参考值范范围 A A 白蛋白白蛋白 0.620.71(62%71%)0.620.71(62%71%)1 1球蛋白球蛋白 0.030.04(3%4%)0.030.04(3%4%)2 2球蛋白球蛋白 0.060.10(6%10%)0.060.10(6%10%)球蛋白球蛋白 0.070.11(7%11%)0.070.11(7%11%)球蛋白球蛋白 0.090.18(9%180.090.18(9%18%)%)60-5-9-12-2060-5-9-12-202024/5/257【醋酸纤维素膜法】参考值范围2023/8/47哪些病多克隆哪些病多克隆（GammaGamma）增高：）增高：1 1、风湿、免疫性湿、免疫性疾病疾病2 2、慢性肝病、慢性肝病3 3、慢性、慢性感染、炎症感染、炎症多克隆典型多克隆典型电泳泳图2024/5/258哪些病多克隆（Gamma）增高：多克隆典型电泳图2023/82024/5/2591.85m1.85m多克隆多克隆 球蛋白球蛋白2023/8/491.85m多克隆球蛋白单珠峰珠峰电泳泳图（M M带）哪些病哪些病M M带增高：增高：1 1、骨髓瘤、骨髓瘤2 2、轻链病、重病、重链病、病、淋巴瘤、某些白血病。淋巴瘤、某些白血病。3 3、原、原发巨球蛋白血症巨球蛋白血症2024/5/2510单珠峰电泳图（M带）哪些病M带增高：2023/8/4102024/5/25112.06m2.06m多克隆多克隆 球蛋白（球蛋白（M M带）2023/8/4112.06m多克隆球蛋白（M带）如果出如果出现单克隆克隆 球蛋白（球蛋白（M M带）必必须做免疫固相蛋白做免疫固相蛋白电泳泳为了精确了精确识别单克隆区克隆区带，样品同品同时在六条泳道在六条泳道上上进行行测试。经电泳后泳后，ELPELP作作为参考泳道以参考泳道以显示示电泳后的蛋白泳后的蛋白质。其余其余五条泳道用于五条泳道用于鉴定定单克隆克隆成分，通成分，通过它与抗它与抗血清，血清，(IgG)(IgG)、(IgA)(IgA)、(IgM)(IgM)、重重链和和、轻链（游离和非游离（游离和非游离）反）反应与否与否进行行鉴别。2024/5/2512如果出现单克隆球蛋白（M带）必须做免疫固相蛋白电泳为了精免疫固相免疫固相电泳泳2024/5/2513免疫固相电泳2023/8/413THANKYOUSUCCESS2024/5/2514.THANKYOUSUCCESS2023/8/4142024/5/25152023/8/415免疫球蛋白重免疫球蛋白重链、轻链及其及其结构域构域IgIg轻链的分子质量约25kD，轻链有两种：链和链，链：链比值约为 2：1。IgIg重重链的分子质量为50-75 kD，重链有5种，分别是 、链，这五种重链决 定了Ig的类别，即 IgMIgM、IgDIgD、IgGIgG、IgAIgA和和IgEIgE。2024/5/2516免疫球蛋白重链、轻链及其结构域Ig轻链的分子质量约25kD，轻链病与病与轻链沉沉积病病轻链病(LCD)与轻链沉积病(LCDD)是一种浆细胞异常增生性疾病。本病多发于中、老年人(45岁)。本病起病多缓慢。一旦免疫球蛋白轻链在全身组织中沉积，引起相应的临床表现即为轻链沉积病。约2/3的LCDD患者合并MM。2024/5/2517轻链病与轻链沉积病轻链病(LCD)与轻链沉积病(LCDD)是轻链病与病与轻链沉沉积病病-发病机制病机制类似于原发性淀粉样变，只是沉积的轻链片段主要是链，而且以轻链的恒区为主，并不具有形成淀粉样变纤维所必备的生化特性。LCDD引起肾小球硬化的机制亦未完全清楚，有研究发现LCDD病人的肾小球系膜细胞通过自分泌机制产生TGF-，反过来又促进系膜细胞过度产生基质蛋白，如胶原、层黏蛋白和纤维连接蛋白 2024/5/2518轻链病与轻链沉积病-发病机制类似于原发性淀粉样变，只是沉积的轻链病与病与轻链沉沉积病病-临床表床表现轻链病与轻链沉积病起病多缓慢，临床可表现贫血、发热、周身无力、出血倾向，浅表淋巴结及肝、脾大，继而出现局限性或多发性骨痛，病理性骨折或局部肿瘤。X线检查有局限性骨质破坏或缺损。部分LCDD发展为骨髓瘤，有的存在淋巴浆细胞性B细胞病变，如淋巴瘤或原发性巨球蛋白血症。2024/5/2519轻链病与轻链沉积病-临床表现轻链病与轻链沉积病起病多缓慢，临二、二、鉴别诊断断1 1、LCDDLCDD与原与原发性淀粉性淀粉样变（AD）鉴别要点要点：(1)LCDD1)LCDD其沉其沉积轻链中中约80%80%为链，而，而ADAD沉沉积轻链中中约75%75%为轻链。(2)典型LCDD中轻链片段是免疫球蛋白的恒区，其典型的单克隆轻链免疫荧光呈强阳性；而AD沉积的轻链片段是免疫球蛋白的可变区所以其抗和轻链抗体免疫荧光只呈现弱阳性。(3)LCDD的轻链沉积呈颗粒状而非纤维样或片层结构，不能结合刚果红和硫黄素；而AD的轻链沉积在电镜下呈纤维样或片层结构，能与刚果红结合在偏光显微镜下呈现绿色双折光与硫黄素结合产生黄绿色荧光。(4)LCDD常并发于多发性骨髓瘤或其他疾病如淋巴瘤或原发性巨球蛋白血症等导致单克隆轻链过度产生。2 2、LCDDLCDD与糖尿病与糖尿病肾病病鉴别，根据糖尿病肾病典型的病史及上述肾活检病理特点不难鉴别。2024/5/2521二、鉴别诊断1、LCDD与原发性淀粉样变（AD）鉴别要点：轻链病与病与轻链沉沉积病病-实验室室检查一、实验室检查：1、血液检查：常见严重贫血血、白细胞计数可以正常、增多或减少。血小板血小板计数大多减低数大多减低并发骨髓瘤的患者可出现少数骨髓瘤细胞。患者可出现巨球蛋白血症，多数骨髓瘤患者本-周蛋白可阳性。2、其他检查：高高钙血症血症，晚期尤其是肾功能不全的患者血磷可血磷可显著升高，著升高，由于骨髓瘤主要是骨质破坏，而无新骨形成，血清碱性磷酸酶大多正常或轻度增高此与骨转移癌有显著区别。3、慢性慢性肾功能不全功能不全时可出可出现肾功能异常功能异常，BUN10.71mmol/L(30mg/dl)，血清Cr176.8mol/L(2mg/dl)。4、尿液检查：伴或不伴有镜下血尿但尿蛋白较少，但病人尿中可排出单克隆克隆轻链蛋白尿蛋白尿蛋白电泳上白蛋白较少，而球蛋白显著增多。2024/5/2522轻链病与轻链沉积病-实验室检查一、实验室检查：2023/8/二、二、辅助助检查肾活检病理改变可有以下三个特点。1 1、光、光镜检查：肾小球可有多种表现，从正常从正常肾小球到不同程度系膜小球到不同程度系膜增增宽硬化以及系膜硬化以及系膜结节状改状改变等等都可在LCDD患者中见到，其中系膜结节状改变较为特异，与糖尿病肾病患者典型的Kimmelstiel-Wilson系膜结节硬化类似，不同在于LCDD的系膜结节PAS染色更强而银染较弱刚果红染色阴性，后者结节不均一，有糖尿病史及与抗轻链/抗血清反应阴性，以及有入球微动脉管壁透明变性等。另外与糖尿病肾病不同之处还表现在于光镜下LCDD的肾小球基底膜无增厚，其他肾小球可以完全正常或只有轻度系膜硬化。肾小球尚可有毛细血管微血管瘤改变。有些肾小球可有膜增生性特征肾小管表现基膜增厚，值得注意的是MM合并LCDD时骨髓瘤管型很少见到。2024/5/2523二、辅助检查肾活检病理改变可有以下三个特点。2023/8/42、免疫荧光检查：免疫免疫组化化单克隆克隆轻链抗体染色可抗体染色可见/轻链(80%(80%为轻链)沉沉积于于肾小球系膜区小球系膜区(结节内内)肾小管基底小管基底膜膜和血管壁补体成分染色常阴性/轻链弥漫性地沿肾小管基底膜呈点状或颗粒状沉积是LCDD)的特点3、电镜检查：肾小球基底膜内稀疏小球基底膜内稀疏层和系膜区有和系膜区有颗粒状物粒状物质沉沉积系膜基系膜基质增增宽和和肾小球基底膜增厚；小球基底膜增厚；肾小管基底膜和肾间质血管基底膜可见密集颗粒电子致密物。4、X线检查：常常见骨骼局限性骨骨骼局限性骨质疏松，溶骨破坏和病理性疏松，溶骨破坏和病理性骨折。5、相关检查：尿凝溶蛋白尿氮巨球蛋白、白细胞计数白蛋白碱性磷酸酶肌氨酸酐蛋白定量（尿）血小板2024/5/25242、免疫荧光检查：免疫组化单克隆轻链抗体染色可见/轻链(并并发症症约2/3 LCDD2/3 LCDD患者合并多患者合并多发性骨髓瘤性骨髓瘤，在组织中沉积的轻链类型与骨髓中异常浆细胞产生相一致，肾脏损害并发症主要有肾病综合征、慢性间质性肾炎和急慢性肾功能不全。LCDD病人预后一般较差，死亡原因主要是心脏病、心力衰竭、身功能衰竭或并发感染，一般其1年和5年生存率分别为90%和70%；而1年和5年的肾存活率分别为67%和37%。2024/5/2525并发症约2/3LCDD患者合并多发性骨髓瘤，在组织中沉积的轻链病与病与轻链沉沉积病病-疾病治疾病治疗LCDD与多发性骨髓瘤相似，一般对化疗较敏感，使用泼尼松加氧芬胂(马法兰)联合化疗可使LCDD所致肾功能不全得以稳定或得到改善，但已有明显肾功能不全(血清Cr4mg/dl)时才开始治疗是无效的。另外患者应摄入充足水分防止脱水，以减少游离轻链在肾内沉积而引起肾小管损害。2024/5/2526轻链病与轻链沉积病-疾病治疗LCDD与多发性骨髓瘤相似，一般THANKYOUSUCCESS2024/5/2527.THANKYOUSUCCESS2023/8/427