临床常见苛养菌的培养与鉴定课件

临床常见苛养菌的鉴定与药敏无锡市第二人民医院第第1页页临床常见苛养菌的鉴定与药敏无锡市第二人民医院第1页苛养菌概述1.1.苛养菌的基本特征：苛养菌的基本特征：u对营养要求较高，在普通培养基上不生长或难以生长的一类细对营养要求较高，在普通培养基上不生长或难以生长的一类细菌菌u体外培养需添加体外培养需添加特殊因子特殊因子或或其他营养成分其他营养成分2.2.苛养菌分离和鉴定的基本要求：苛养菌分离和鉴定的基本要求：u 采用采用 高营养高营养 的培养基，的培养基，延长延长培养时间培养时间u 置于置于 COCO2 2 或或 微需氧微需氧 的环境，保持一定湿度的环境，保持一定湿度u 不能随意丢弃无法鉴定的细菌，极有可能是苛养菌及少见菌不能随意丢弃无法鉴定的细菌，极有可能是苛养菌及少见菌第第2页页苛养菌概述苛养菌的基本特征：第2页目录1.肺炎链球菌肺炎链球菌2.流感嗜血杆菌流感嗜血杆菌3.脑膜炎奈瑟氏菌脑膜炎奈瑟氏菌4.淋病奈瑟氏菌淋病奈瑟氏菌5.布鲁氏菌属布鲁氏菌属6.放线菌属放线菌属第第3页页7.星形诺卡菌星形诺卡菌苛养菌苛养菌8.溶血隐秘杆菌溶血隐秘杆菌目录1.肺炎链球菌2.流感嗜血杆菌3.脑膜炎奈瑟氏菌4.1.肺炎链球菌 1.1 概述概述 1.2 生物学性状生物学性状 1.3 检测方法检测方法 1.4 药敏分析药敏分析第第4页页 1.5 案例分析案例分析1.肺炎链球菌 1.1 概述 1.2 生1.1 肺炎链球菌-概述第5页1.1.肺炎链球菌肺炎链球菌社区感染社区感染常见病原菌之一，定植在正常人常见病原菌之一，定植在正常人的鼻咽部。的鼻咽部。2.2.以肺部感染为主，以肺部感染为主，大叶性肺炎大叶性肺炎多见多见。同时会导致耳部。同时会导致耳部及鼻咽部的感染。严重时可继发及鼻咽部的感染。严重时可继发胸膜炎、脓胸、脑膜胸膜炎、脓胸、脑膜炎和败血症炎和败血症。3.3.常见送检标本类型有常见送检标本类型有痰、咽拭子、尿液、脑脊液、血痰、咽拭子、尿液、脑脊液、血液、穿刺液液、穿刺液。4.4.肺炎球菌离开人体后很易死亡，痰培养分离率很低。肺炎球菌离开人体后很易死亡，痰培养分离率很低。易感人群：易感人群：小于小于5岁及大于岁及大于65岁岁肺炎链球菌疫苗肺炎链球菌疫苗1.1 肺炎链球菌-概述第5页肺炎链球菌社区感染常见病原菌之1.2 肺炎链球菌-生物学性状1.1.培养条件：培养条件：COCO2 2环境，哥伦比亚血平板。环境，哥伦比亚血平板。2.2.菌落形态：菌落形态：18-24h18-24h后血平板上形成草绿后血平板上形成草绿色溶血、灰色、半透明、圆形、针尖样、色溶血、灰色、半透明、圆形、针尖样、表面光滑（有些菌株可表现为粘液状）表面光滑（有些菌株可表现为粘液状）的菌落的菌落;培养培养48h48h后，脐凹状菌落。后，脐凹状菌落。3.3.涂片染色：涂片染色：G G+球菌球菌,矛头状矛头状 ,成双或链状成双或链状排列，尖端向外。排列，尖端向外。第第6页页用放大镜观察用放大镜观察1.2 肺炎链球菌-生物学性状第6页用放大镜观察1.2 肺炎链球菌-生物学性状1.1.荚膜是荚膜是肺炎链球菌肺炎链球菌的的主要毒力主要毒力因子因子之一之一。2.2.根据荚膜特异性多糖抗原性，分为近根据荚膜特异性多糖抗原性，分为近9090个血清型个血清型，成人致病以成人致病以1-91-9型及型及1212型最多，其中型最多，其中3 3型型毒力最强，毒力最强，常致严重肺炎。常致严重肺炎。3.3.肺炎链球菌感染后，机体可建立较牢固的型特异性肺炎链球菌感染后，机体可建立较牢固的型特异性免疫，免疫，同型病菌的再次感染少见同型病菌的再次感染少见。第7页1.2 肺炎链球菌-生物学性状荚膜是肺炎链球菌的主要毒力因子1.3 肺炎链球菌-检测方法OPOptochinOptochin试验试验:敏感敏感胆汁溶菌试验胆汁溶菌试验:阳性阳性菊糖发酵试验菊糖发酵试验:阳性阳性荚膜肿胀试验：荚膜肿胀试验：阳性阳性触酶触酶 ：阴性：阴性胆汁七叶甘胆汁七叶甘 ：阴性：阴性甲型溶血链球甲型溶血链球菌菌(R)肺炎链球菌肺炎链球菌(S)第8页传统手工法传统手工法1 干扰肺炎链球菌叶酸的合成干扰肺炎链球菌叶酸的合成抑菌环直径14mm为敏感抑菌环直径18mm 确认Optochin试验试验1.3 肺炎链球菌-检测方法OPOptochin试验:敏1.3 肺炎链球菌-检测方法第9页乳胶凝集法乳胶凝集法2免疫学方法免疫学方法3基因检测法基因检测法4质谱检测法质谱检测法5标本类型：菌液标本类型：菌液标本类型：尿液标本类型：尿液、脑脊液脑脊液科研科研热点热点1.3 肺炎链球菌-检测方法第9页乳胶凝集法2免疫学方法3基1.4 肺炎链球菌-药敏分析第10页试验条件试验条件培养基培养基：纸片扩散法：含5%绵羊血的MHA接种物接种物：直接菌落悬滴法，相当于0.5麦氏标准孵育孵育：352，5%CO2；20-24h纸片扩散法检测药敏建议报告抗生素种类：l青霉素类：苯唑西林青霉素类：苯唑西林l大环内酯类：红霉素大环内酯类：红霉素l磺胺类：复方新诺明磺胺类：复方新诺明l喹诺酮类：左氧喹诺酮类：左氧l四环素类：四环素四环素类：四环素l糖肽类：万古霉素糖肽类：万古霉素l增加使用增加使用D-D-抑菌圈试验或肉汤微量稀释抑菌圈试验或肉汤微量稀释法检测诱导型克林霉素耐药的信息。法检测诱导型克林霉素耐药的信息。肺炎链球菌A A组组 首选试验首选试验 并常规报并常规报告告红霉素红霉素C C组组 补充试验补充试验 选择性报选择性报告告 *阿莫西林阿莫西林青霉素青霉素（苯唑西林纸片）（苯唑西林纸片）*阿莫西林阿莫西林-复方新诺明复方新诺明克拉维酸克拉维酸B B组组 首选试验首选试验 选择性报选择性报告告 *头孢吡肟头孢吡肟*头孢噻肟头孢噻肟*头孢呋辛头孢呋辛*头孢曲松头孢曲松头孢洛林头孢洛林(非脑非脑膜炎膜炎)克林霉素克林霉素多西环素多西环素吉米沙星吉米沙星氯霉素氯霉素左氧氟沙星左氧氟沙星莫西沙星莫西沙星*厄他培南厄他培南氧氟沙星氧氟沙星*亚胺培南亚胺培南*美罗培南美罗培南泰利霉素泰利霉素利奈唑胺利奈唑胺四环素四环素万古霉素万古霉素利福平利福平诱导实验新增修订纸片扩散法1.4 肺炎链球菌-药敏分析第10页试验条件纸片扩散法检测药1.4 肺炎链球菌-药敏分析第11页用苯唑西林代替青霉素来进行纸片扩散法检测1.4 肺炎链球菌-药敏分析第11页用苯唑西林代替青霉素来进1.4 肺炎链球菌-药敏分析第12页PRSP的筛选的筛选常规工作中可以用苯唑西林的纸片扩散法来检测青霉素的敏感性。苯唑西林抑菌圈直径20mm19mm判定青霉素为敏感可能是青霉素结果不可靠必须测定青霉素的MIC此法仅适用于此法仅适用于无生命危险感无生命危险感染的患者。染的患者。预测-内酰胺类抗生素敏感1.4 肺炎链球菌-药敏分析第12页PRSP的筛选苯唑西林抑1.4 肺炎链球菌-药敏分析第13页-内内酰胺胺类抗生素抗生素K-BK-B法未法未给出出标准准,推荐用推荐用MICMIC法法1.4 肺炎链球菌-药敏分析第13页-内酰胺类抗生素1.4 肺炎链球菌-药敏分析第14页MIC法试验条件法试验条件方法方法 ：微量稀释法直接上机(GP-68）及E-test法接种物接种物：0.5麦氏标准孵育孵育 ：352，5%CO2；20-24h 细菌生长区E test 塑料条椭圆形细菌生长抑制区256128 8016判读抑菌浓度（MIC ug/ml)E-test法1.4 肺炎链球菌-药敏分析第14页MIC法试验条件 细菌1.4 肺炎链球菌-药敏分析第15页药物药物敏感敏感中介中介耐药耐药青霉素注射（非脑膜炎）248青霉素注射（脑膜炎）0.06-0.12口服青霉素0.060.12-121.脑膜炎分离株，需尽快用可靠方法检测和报告青霉素和头孢曲松(或头孢噻肟或美罗培南)的MIC值2.对于非脑脊液标本中分离出的肺炎链球菌，需同时使用脑膜炎和非脑膜炎的折点来报告青霉素的敏感性1.4 肺炎链球菌-药敏分析第15页药物敏感中介耐药青霉素1.5 肺炎链球菌-案例分析第16页患者患者：男60岁，因“突发高热，颈强直，脑膜刺激征，意 识不清住院”。既往史：既往史：2008年脑科手术史，术后肺炎链球菌导致化脓性脑膜炎。入院后：入院后：脑脊液常规：白色，混，WBC:3.08*106脑脊液涂片:革兰阳性球菌脑脊液培养：草绿色溶血、灰色、圆形、针尖样、脐凹状菌落。Optochin试验:敏感,胆汁溶菌试验:阳性。治疗过程治疗过程：入院后经验用药：头孢曲松（广谱三代，容易透过血脑屏障）获知涂片报告后，加万古霉素。两周后，预后较好。231451.5 肺炎链球菌-案例分析第16页患者：男60岁，因“突发2.流感嗜血杆菌 2.1 概述概述 2.2 生物学性状生物学性状 2.3 检测方法检测方法 2.4 药敏分析药敏分析第17页2.流感嗜血杆菌 2.1 概述 2.2 嗜血杆菌属（Haemophilus）副流感嗜血杆菌H.parainfluenzae溶血性嗜血杆菌H.paraphrophilus副嗜沫嗜血杆菌H.paraegyptius嗜沫嗜血杆菌H.aphrophilus 杜克嗜血杆菌H.ducreyi流感嗜血杆菌H.influenzae 第第18页页牙龈部定植牙龈部定植性病软下疳性病软下疳呼吸道及全呼吸道及全身感染身感染心内膜炎心内膜炎亚急性心内膜炎亚急性心内膜炎口咽部定植口咽部定植嗜血杆菌属（Haemophilus）副流感溶血性副嗜沫嗜沫嗜2.1 流感嗜血杆菌-概述第第19页页呼呼吸吸道道继继发发感感染染原原发发感感染染鼻咽炎鼻咽炎喉头炎喉头炎急性气管炎急性气管炎 肺炎、中耳炎、肺炎、中耳炎、脑膜炎（脑膜炎（2个月个月3岁）岁）心包炎、化脓性关节炎心包炎、化脓性关节炎菌血症菌血症败血症败血症1.流感嗜血杆菌社区感染常见病原菌之一，常引起急性化脓性感染，有荚膜的b型强毒株可以通过呼吸道飞沫传播。2.流感嗜血杆菌感染可分为原发性感染和继发感染。原发感染以小儿多见。继发感染：多是内源性感染，以成人多见。3.常见送检标本类型有痰、咽拭子、肺泡灌痰、咽拭子、肺泡灌洗液、脑脊液、血液、穿刺液洗液、脑脊液、血液、穿刺液。2.1 流感嗜血杆菌-概述第19页呼吸道继发感染原发感染鼻咽2.2 流感嗜血杆菌-生物学性状1.1.培养条件：需氧，培养条件：需氧，COCO2 2环境中，最适环境中，最适宜的培养基是宜的培养基是巧克力平板巧克力平板（加入万加入万古霉素和制霉菌素古霉素和制霉菌素），不同嗜血杆），不同嗜血杆菌对因子的需求不同。血平板上有菌对因子的需求不同。血平板上有卫星现象。卫星现象。2.2.菌落形态：菌落形态：3535，181824h24h培养形成培养形成微小、无色透明、不溶血，呈露滴微小、无色透明、不溶血，呈露滴样小菌落。样小菌落。3.3.涂片染色：涂片染色：革兰阴性小杆菌，革兰阴性小杆菌，无芽无芽胞。粘液型菌株有荚膜。胞。粘液型菌株有荚膜。第20页X X因子因子 血红素血红素X X X X因子为存在于血红蛋白因子为存在于血红蛋白因子为存在于血红蛋白因子为存在于血红蛋白中的一种血红素，为含铁中的一种血红素，为含铁中的一种血红素，为含铁中的一种血红素，为含铁的卟啉，耐高温，的卟啉，耐高温，的卟啉，耐高温，的卟啉，耐高温，V V因子因子 辅酶辅酶或辅酶或辅酶血液中所含的血液中所含的V V因子通常处因子通常处于被抑制状态，经于被抑制状态，经80809090加热加热10min10min后可使后可使V V因子释放因子释放2.2 流感嗜血杆菌-生物学性状第20页X因子 血红素2.3 流感嗜血杆菌-检测方法第21页传统手工法传统手工法1自动化方法自动化方法2乳胶凝集法乳胶凝集法3免疫学方法免疫学方法4基因检测法基因检测法5质谱检测法质谱检测法6卫星试验卟啉试验糖发酵试验吲哚快速法试验尿素酶试验2.3 流感嗜血杆菌-检测方法第21页传统手工法1自动化方法2.3 流感嗜血杆菌-检测方法金黄色葡萄球菌 卫星试验卫星试验X X因子因子 V V因子因子V V因子因子血平板 MH平板 流感嗜血杆菌与金黄色流感嗜血杆菌与金黄色流感嗜血杆菌与金黄色流感嗜血杆菌与金黄色葡萄球菌在血琼脂培养基葡萄球菌在血琼脂培养基葡萄球菌在血琼脂培养基葡萄球菌在血琼脂培养基上共同培养时可见卫星现上共同培养时可见卫星现上共同培养时可见卫星现上共同培养时可见卫星现象，因葡萄球菌能合成象，因葡萄球菌能合成象，因葡萄球菌能合成象，因葡萄球菌能合成V V因子，使其菌落周围生长因子，使其菌落周围生长因子，使其菌落周围生长因子，使其菌落周围生长的流感嗜血杆菌菌落较大，的流感嗜血杆菌菌落较大，的流感嗜血杆菌菌落较大，的流感嗜血杆菌菌落较大，远离者则较小。远离者则较小。远离者则较小。远离者则较小。细菌种类细菌种类血平板血平板MHMH平板平板需要因子需要因子流感嗜血杆菌流感嗜血杆菌+-X+VX+V副流感嗜血杆菌副流感嗜血杆菌+V V2.3 流感嗜血杆菌-检测方法金黄色葡萄球菌 2.3 流感嗜血杆菌-检测方法第23页 MH平板因子实验因子实验流感嗜血杆菌V VX XX+VX+V副流感嗜血杆菌X XX+VX+VV V黄色区域表示细菌生长2.3 流感嗜血杆菌-检测方法第23页 细菌细菌生长因子生长因子荚膜荚膜溶血溶血吲哚吲哚脲酶脲酶触酶触酶鸟鸟AAXV流感嗜血杆菌：流感嗜血杆菌：af型型未定型未定型+DDDD+DD副流感嗜血杆菌：三个型副流感嗜血杆菌：三个型未定型未定型DDDD溶血嗜血杆菌溶血嗜血杆菌+D副溶血嗜血杆菌副溶血嗜血杆菌+DD杜克氏嗜血杆菌杜克氏嗜血杆菌D埃及嗜血杆菌埃及嗜血杆菌+嗜沬嗜血杆菌嗜沬嗜血杆菌+副嗜沬嗜血杆菌副嗜沬嗜血杆菌嗜血杆菌属根据吲哚、脲酶和鸟氨酸脱羧酶可分为8个生物型。2.3 流感嗜血杆菌-检测方法未定型为无荚膜株B定型为有毒株荚膜溶血吲哚脲酶触酶鸟AAXV流感嗜血杆菌：2.4 流感嗜血杆菌-药敏分析第25页仅用于流感流感嗜血杆菌和副流感嗜血杆菌流感嗜血杆菌和副流感嗜血杆菌A A组组 首选首选试验试验 并常并常规报规报告告氨苄西林氨苄西林C C组组 补充试补充试验验 选选择性报择性报告告 阿奇霉素阿奇霉素克拉霉素克拉霉素阿莫西林阿莫西林氨曲南氨曲南阿莫西林阿莫西林-克拉维酸克拉维酸复方新诺明复方新诺明头孢克罗头孢克罗2 2头孢丙烯头孢丙烯2 2头孢克肟头孢克肟3 3头孢泊肟头孢泊肟3 3B B组组 首选首选试验试验 选择选择性报性报告告氨苄西林氨苄西林-舒巴坦舒巴坦头孢洛林头孢洛林头孢呋辛（口服）头孢呋辛（口服）头孢呋辛头孢呋辛2 2环丙沙星环丙沙星左氧氟沙星左氧氟沙星头孢噻肟头孢噻肟头孢他啶头孢他啶头孢曲松头孢曲松莫西沙星莫西沙星氧氟沙星氧氟沙星厄他培南厄他培南亚胺培南亚胺培南氯霉素氯霉素利福平利福平泰利霉素泰利霉素美罗培南美罗培南四环素四环素试验条件试验条件培养基培养基：纸片扩散法：嗜血杆菌试验培养基（嗜血杆菌试验培养基（HTM）肉汤稀释法：HTM肉汤接种物接种物：直接菌落悬滴法，相当于0.5麦氏标准孵育孵育：352，5%CO2；20-24h1.氨苄西林和阿莫西林氨苄西林和阿莫西林是治疗流感嗜血杆菌的首选药物。2.-内酰胺酶的检测可作为一种快速试验方内酰胺酶的检测可作为一种快速试验方便地检出流感嗜血杆菌对氨苄西林和阿莫便地检出流感嗜血杆菌对氨苄西林和阿莫西林的耐药性西林的耐药性,常用的检测方法为显色头孢菌素法-头孢硝噻吩法，我院目前阳性率在20%左右。3.从脑脊液中分离的流感嗜血杆菌，常规中只报告氨苄西林、一种三代头孢菌素、氯氨苄西林、一种三代头孢菌素、氯霉素和美罗培南的霉素和美罗培南的试验结果。2.4 流感嗜血杆菌-药敏分析第25页仅用于流感流感嗜血杆菌3.脑膜炎奈瑟氏菌第26页 3.1 概述概述 3.2 生物学性状生物学性状 3.3 鉴别要点鉴别要点 3.4 药敏分析药敏分析 3.5 案例分析案例分析3.脑膜炎奈瑟氏菌第26页 3.1 概述 3.1 脑膜炎奈瑟氏菌-概述第27页1.1.脑膜炎奈瑟菌存在于携带者和脑膜炎患者的鼻咽部。脑膜炎奈瑟菌存在于携带者和脑膜炎患者的鼻咽部。2.2.通过通过飞沫经空气传播飞沫经空气传播，冬末春初为流行高峰。感染后多数患，冬末春初为流行高峰。感染后多数患者呈携带状态或隐性感染。者呈携带状态或隐性感染。3.3.少数出现呼吸道感染症状，仅极少数发展成败血症，累及脑少数出现呼吸道感染症状，仅极少数发展成败血症，累及脑膜，形成膜，形成化脓性脑脊髓膜炎。化脓性脑脊髓膜炎。4.4.人工培养物如不及时转种，超过人工培养物如不及时转种，超过48h48h常死亡。该菌能产生常死亡。该菌能产生自自溶酶溶酶，故采集时标本不宜放冰箱，应保温立即送检。，故采集时标本不宜放冰箱，应保温立即送检。5.5.根据脑膜炎奈瑟菌夹膜多糖抗原的不同，根据脑膜炎奈瑟菌夹膜多糖抗原的不同，可分为可分为A A、B B、C C等等1313 个血清群，我国主要是由个血清群，我国主要是由A A群和群和C C群群引起。引起。3.1 脑膜炎奈瑟氏菌-概述第27页脑膜炎奈瑟菌存在于携带者3.2 脑膜炎奈瑟氏菌-生物学性状1.1.培养条件：培养条件：5%-10%5%-10%的的COCO2 2 ,培养基：血平板和巧克力。培养基：血平板和巧克力。2.2.菌落形态：光滑、凸起、半透明、湿润。菌落形态：光滑、凸起、半透明、湿润。3.3.涂片染色：革兰阴性球菌，肾形或咖啡豆状，凹面相涂片染色：革兰阴性球菌，肾形或咖啡豆状，凹面相对、成对排列位。脑脊液涂片时，对、成对排列位。脑脊液涂片时，常位于中性粒细胞常位于中性粒细胞内外内外。第28页3.2 脑膜炎奈瑟氏菌-生物学性状第28页3.4 脑膜炎奈瑟氏菌-药敏分析第30页不必进行常规的药敏试验不必进行常规的药敏试验，临床耐药率不高。，临床耐药率不高。临床经验性用药通常有：青霉素是首选，对氯霉素，广谱的头孢菌素敏感。临床经验性用药通常有：青霉素是首选，对氯霉素，广谱的头孢菌素敏感。对临床细菌性脑膜炎经验治疗失败的细菌，都应该进行对临床细菌性脑膜炎经验治疗失败的细菌，都应该进行-内酰胺酶过筛和内酰胺酶过筛和MICMIC试验试验试验条件试验条件培养基培养基：微量肉汤法：补充离子的MH肉汤，加 2%-5%的冻融马血。琼脂稀释法：MH琼脂加5%的羊血。接种物接种物：直接菌落悬滴法，相当于0.5麦氏标准。孵育孵育：352，5%CO2；20-24h3.4 脑膜炎奈瑟氏菌-药敏分析第30页不必进行常规的药敏试3.5 脑膜炎奈瑟氏菌-药敏分析应该在生物安全柜中进行脑膜炎奈应该在生物安全柜中进行脑膜炎奈瑟菌的瑟菌的相关操作相关操作3.5 脑膜炎奈瑟氏菌-药敏分析应该在生物安全柜中进行脑膜炎3.5 脑膜炎奈瑟氏菌-案例分析患者患者：男，足月出生九天，因无明显诱因出现发热,拟“新生儿感染”收住入院儿科NICU。入院后入院后：1.血常规：WBC10.01*09/L。脑脊液常规:无色透明，潘氏(+)，细胞计数0.316109/L。2.血培养及脑脊液:血培养阳性，脑脊液培养阴性。送至CDC确认为B群脑膜炎奈瑟菌。3.咽拭子培养:3名密切接触者检出一株B群脑膜炎奈瑟菌株（系患者的外祖母）。4.药敏试验：对头孢三嗪、头孢噻肟、利福平、氨苄西林、四环素、米诺霉素、环丙沙星均敏感；而对磺胺甲基异噁唑、复方新诺明均耐药。治疗过程治疗过程：予以独立病房隔离治疗，头孢曲松、青霉素抗感染及物理降温后，病情平稳。32143.5 脑膜炎奈瑟氏菌-案例分析患者：男，足月出生九天，因无4.淋病奈瑟氏菌第第33页页 4.1 概述概述 4.2 生物学性状生物学性状 4.3 鉴别要点鉴别要点 4.4 药敏分析药敏分析4.淋病奈瑟氏菌第33页 4.1 概述 4.1 淋病奈瑟氏菌-概述第第34页页1.淋病奈瑟菌侵入淋病奈瑟菌侵入泌尿生殖系统泌尿生殖系统繁殖，引起化繁殖，引起化脓性感染。胎儿可经产道感染造成新生儿淋脓性感染。胎儿可经产道感染造成新生儿淋病性急性结膜炎。病性急性结膜炎。2.实验室在运送淋球菌培养及涂片标本时要注实验室在运送淋球菌培养及涂片标本时要注意意保温保温。3.出现出现耐头孢菌素耐头孢菌素的淋病奈瑟菌是一个重大的的淋病奈瑟菌是一个重大的公共卫生问题。公共卫生问题。4.人是淋病奈瑟菌的唯一天然宿主。人是淋病奈瑟菌的唯一天然宿主。4.1 淋病奈瑟氏菌-概述第34页淋病奈瑟菌侵入泌尿生殖系统4.2 淋病奈瑟氏菌-生物学性状1.1.培养条件：培养条件：5%-10%5%-10%的的COCO2 2 ,培养基：培养基：改良改良Thayer-Thayer-Martin(MTM)Martin(MTM)培养基培养基（加入万古霉素（加入万古霉素、多粘菌素多粘菌素、制霉菌制霉菌素素、三甲氧苄二氨嘧啶三甲氧苄二氨嘧啶TMPTMP）。）。2.2.菌落形态：灰白色、光滑、凸起、半透明。菌落形态：灰白色、光滑、凸起、半透明。3.3.涂片染色：革兰阴性球菌，肾形或咖啡豆状，凹面相对、涂片染色：革兰阴性球菌，肾形或咖啡豆状，凹面相对、成对排列位。涂片操作时成对排列位。涂片操作时不要用力涂擦不要用力涂擦，应该在玻片上，应该在玻片上滚动。滚动。第第35页页直接涂片报告方式为：找到革直接涂片报告方式为：找到革兰阴性双球菌（细胞内）兰阴性双球菌（细胞内）4.2 淋病奈瑟氏菌-生物学性状培养条件：5%-10%的CO4.3 淋病奈瑟氏菌-鉴别要点第第36页页氧化酶实验：氧化酶实验：阳性阳性触酶试验：触酶试验：阳性阳性吲哚实验：吲哚实验：阴性阴性DNADNA酶：酶：阴性阴性硝酸盐还原实验：阴性硝酸盐还原实验：阴性麦芽糖：麦芽糖：不分解不分解 与不动杆菌的鉴别 葡萄糖：葡萄糖：分解分解脑膜炎奈瑟菌的鉴别莫拉菌的鉴别4.3 淋病奈瑟氏菌-鉴别要点第36页氧化酶实验：阳4.4 淋病奈瑟氏菌药敏分析第第37页页A A组组 首选试验首选试验并常规报告并常规报告淋病奈瑟菌淋病奈瑟菌i i头孢曲松头孢曲松头孢克肟头孢克肟环丙沙星环丙沙星四环素四环素C C组组 补充试验补充试验选择性报告选择性报告 大观霉素大观霉素试验条件试验条件培养基培养基：纸片扩散法：GC琼脂基础+1%特定的生长添加剂 接种物接种物：直接菌落悬滴法，相当于0.5麦氏标准孵育孵育：352，5%CO2；20-24h1.2013年CLSI将头孢曲松、头孢克肟、环丙沙头孢曲松、头孢克肟、环丙沙星和四环素星和四环素从试验报告C组移到试验报告A组，并注明不需要进行常规试验不需要进行常规试验，2.根据疾病预防控制中心(CDC)指南推荐仅考虑用作治疗失败的备选。不需要常规试验。4.4 淋病奈瑟氏菌药敏分析第37页A组 淋病4.4 淋病奈瑟氏菌药敏分析第第38页页纸片扩散法测试淋病奈瑟菌，某种抗菌药物试验结果是纸片扩散法测试淋病奈瑟菌，某种抗菌药物试验结果是“中介中介”，提示，提示结果不可靠结果不可靠，需要重复试验，需要重复试验4.4 淋病奈瑟氏菌药敏分析第38页纸片扩散法测试淋病奈瑟菌5.布鲁氏菌 5.1 概述概述 5.2 生物学性状生物学性状 5.3 检测方法检测方法 5.4 药敏分析药敏分析第第39页页 5.3 案例分析案例分析5.布鲁氏菌 5.1 概述 5.2 生物5.1 布鲁氏菌-概述1.1.布鲁菌是布鲁菌是国家乙类传染病国家乙类传染病，动物源性疾病，引起变态反应性人畜共患病，动物源性疾病，引起变态反应性人畜共患病，实验室注意生物防护。实验室注意生物防护。所有操作在生物安全柜，废弃物高压灭菌；所有操作在生物安全柜，废弃物高压灭菌；结果结果上报疾控中心；上报疾控中心；2.2.人感染后，主要表现为发热、发冷、全身痛和多汗，肝肿大，外周非侵人感染后，主要表现为发热、发冷、全身痛和多汗，肝肿大，外周非侵蚀性关节炎等蚀性关节炎等,反复发烧呈反复发烧呈“波浪热波浪热”。先侵入淋巴再入血，。先侵入淋巴再入血，症状极不症状极不典型容易误诊典型容易误诊。3.3.易感人群：易感人群：畜牧业及皮革加工行业畜牧业及皮革加工行业。4.4.国内以羊型布鲁菌病最为多见，未经治疗者的国内以羊型布鲁菌病最为多见，未经治疗者的自然病程为自然病程为3 36 6个月个月。细细胞内寄生菌胞内寄生菌。布鲁菌含有两种抗原物质：布鲁菌含有两种抗原物质：A A抗原和抗原和M M抗原。抗原。第第40页页5.1 布鲁氏菌-概述布鲁菌是国家乙类传染病，动物源性疾病，5.2 布鲁氏菌-生物学性状 1.1.培养条件：培养条件：COCO2 2环境环境，哥伦比亚血平板专性需氧。，哥伦比亚血平板专性需氧。2.2.菌落形态：菌落形态：3737培养在血琼脂平板培养培养在血琼脂平板培养5-75-7天天可形成灰色不溶血菌落。在固体培养基上菌落可形成灰色不溶血菌落。在固体培养基上菌落为无色、半透明、圆形、表明光滑、边缘整齐。为无色、半透明、圆形、表明光滑、边缘整齐。3.3.涂片染色：涂片染色：革兰氏阴性短小球杆菌，革兰氏阴性短小球杆菌，革兰染色革兰染色经常着色不佳，经常着色不佳，易堆积易堆积，吉姆染色呈紫色。，吉姆染色呈紫色。第第41页页5.2 布鲁氏菌-生物学性状 培养条件：CO2环境，哥5.3 布鲁氏菌-检测方法第42页传统手工法传统手工法1自动化方法自动化方法2免疫学方法免疫学方法3血血清清学学试试验验在在国国内内外外用用于于布布鲁鲁菌菌的的诊诊断断-疾疾控控中中心心 感染病原菌后，2周后会产生抗体。常见的血清试验有虎红试验（虎红试验（RBRB）,血清凝集试验。氧化酶阳性（+）、触酶阳性（+）、H2S阳性（+）血培养报阳时间3-5天。直接上机鉴定转种延长时间涂片5.3 布鲁氏菌-检测方法第42页传统手工法1自动化方法2免5.3 布鲁氏菌-检测方法第43页杨铭，汪定成杨铭，汪定成,邵海连等，全自动血培养仪中布鲁菌阳性报警时间及其他病原菌的比较邵海连等，全自动血培养仪中布鲁菌阳性报警时间及其他病原菌的比较J.中国中国感染控制杂志感染控制杂志2013,12（6）:451-4535.3 布鲁氏菌-检测方法第43页杨铭，汪定成,邵海连等，全5.4 布鲁氏菌-药敏分析不推荐布鲁氏菌进行体外药敏试验。不推荐布鲁氏菌进行体外药敏试验。利福平对本病有效，利福平对本病有效，利福平加四环素（多西环素），疗程利福平加四环素（多西环素），疗程6 6周周，为世界卫生组织推荐的治疗方案。，为世界卫生组织推荐的治疗方案。利福平是具有较强的胞内渗透作用。利福平是具有较强的胞内渗透作用。羊、猪型感染者以四环素与链霉素合用为宜。羊、猪型感染者以四环素与链霉素合用为宜。第第44页页5.4 布鲁氏菌-药敏分析第44页5.5 布鲁氏菌-药敏分析患者患者：男，男，1212岁，因岁，因“间断右髋关节痛月余间断右髋关节痛月余”就诊。就诊。病史：病史：4月前开始发热，关节痛间断。患儿父亲为野味加工者，患儿有羊接触史。入院后：入院后：1.进行血和骨髓培养，48h后血培养仪报警阳性，涂片革兰染色镜检为阴性短小球杆菌呈细沙样堆积。阳性瓶转种至血平板及巧克力平板，继续培养至，巧克力平板上可见无色、透明、湿润、细小菌落生长，血平板菌落更小。2.初步生化反应氧化酶阳性，触酶阳性。3.使用法国生物梅里埃VITEK-2 COMPACT鉴定系统，结果为羊布鲁菌。4.血清凝集试验滴度1：800（1:100为阳性）治疗过程：治疗过程：1.1.间断用头孢噻肟、头孢哌酮-舒巴坦治疗，未出现明显缓解。2.利福平加四环素，疗程6周，体温下降，预后较好。第45页1234565.5 布鲁氏菌-药敏分析患者：男，12岁，因“间断右髋关节6.放线菌属 6.1概述概述 6.2 生物学形状生物学形状 6.3 检测方法检测方法 6.4 药敏分析药敏分析第第46页页6.放线菌属 6.1概述 6.2 生物学6.1 放线菌属-概述1.放线菌属，介于细菌与丝状真菌之间又接近细菌的一放线菌属，介于细菌与丝状真菌之间又接近细菌的一类丝状原核生物。类丝状原核生物。2.放线菌放线菌属属正常寄居在口腔、上呼吸道、胃肠道和泌尿正常寄居在口腔、上呼吸道、胃肠道和泌尿生殖道，为人体的正常菌群生殖道，为人体的正常菌群，内源性感染。内源性感染。3.当机体抵抗力下降，口腔卫生不良、拔牙或口腔粘膜当机体抵抗力下降，口腔卫生不良、拔牙或口腔粘膜受损时，引起放线菌病。受损时，引起放线菌病。4.肺部感染：症状和体征酷似肺结核。肺部感染：症状和体征酷似肺结核。第第47页页病灶组织和瘘管的脓汁中，病灶组织和瘘管的脓汁中，肉眼可见硫磺样颗粒肉眼可见硫磺样颗粒6.1 放线菌属-概述放线菌属，介于细菌与丝状真菌之间又接近6.2 放线菌属-生物学性状1.1.培养条件：培养条件：5%-10%5%-10%的的COCO2 2 ,微需氧环境，厌氧培养可微需氧环境，厌氧培养可生长生长。培养基：培养基：血平板，沙保罗琼脂血平板，沙保罗琼脂可生长。可生长。2.2.菌落形态：在血平板上形成菌落形态：在血平板上形成灰白色或淡黄色粗糙而不灰白色或淡黄色粗糙而不规则的菌落规则的菌落，不溶血。，不溶血。3.3.涂片染色：革兰阳性，丝状或发丝状，常形成分枝状涂片染色：革兰阳性，丝状或发丝状，常形成分枝状无隔菌丝无隔菌丝 。4.4.硫磺样颗粒压片，在镜下可见放射状排列的菌丝，形硫磺样颗粒压片，在镜下可见放射状排列的菌丝，形似菊花状。似菊花状。第第48页页6.2 放线菌属-生物学性状第48页6.3 放线菌属-检测方法第49页 溶血溶血(-)(-)葡萄糖葡萄糖(+)(+)甘露醇甘露醇(+)(+)吲哚吲哚(-)(-)过氧化氢酶试验过氧化氢酶试验(-(-)传统手工法传统手工法1自动化方法自动化方法2乳胶凝集法乳胶凝集法3免疫学方法免疫学方法4基因检测法基因检测法56.3 放线菌属-检测方法第49页 溶血(-6.4 放线菌属-药敏分析临床常规不做药敏临床常规不做药敏羧苄西林，氯霉素，克林霉素和红霉素敏感羧苄西林，氯霉素，克林霉素和红霉素敏感羧苄西林为首选药物羧苄西林为首选药物第50页6.4 放线菌属-药敏分析第50页7.星型诺卡菌 7.1 概述概述 7.2 生物学性状生物学性状 7.3 检测方法检测方法 7.4 药敏分析药敏分析第第51页页 7.5 案例分析案例分析7.星型诺卡菌 7.1 概述 7.2 生7.1 星型诺卡菌-概述诺卡菌属是广泛分布与土壤中的一群需氧性放线菌。易感人群：免疫力低下者第第52页页血行播散，引起脑膜炎与脑脓肿 侵入皮下组织引起慢性化脓性肉芽肿与瘘管形成星形诺卡菌（常见）肺部感染肺炎、肺脓肿，慢性者类似肺结核或肺真菌病脑脊液，脓液，血脑脊液，脓液，血痰，肺泡灌洗液，穿刺液脓液，组织巴西诺卡菌外源性感染足分枝菌病足分枝菌病7.1 星型诺卡菌-概述诺卡菌属是广泛分布与土壤中的一群需氧7.2 星型诺卡菌-生物学性状1.1.培养条件：培养条件：5%-10%5%-10%的的COCO2 2，专性需氧菌专性需氧菌 。2.2.培养基：血平板及培养基：血平板及沙保培养基沙保培养基（一周）。（一周）。3.3.菌落形态：菌落形态：菌落大小不等，颗粒状。不同种类可产生不同菌落大小不等，颗粒状。不同种类可产生不同色素，色素，星形诺卡菌菌落呈黄色或深橙色星形诺卡菌菌落呈黄色或深橙色，表面无白色菌丝；，表面无白色菌丝；巴西诺卡菌菌落表面有白色菌丝生长；巴西诺卡菌菌落表面有白色菌丝生长；4.4.涂片染色：涂片染色：G+G+杆菌，有细长的分支菌丝，亦或有杆状或球杆菌，有细长的分支菌丝，亦或有杆状或球状存在。状存在。诺卡菌具有诺卡菌具有弱抗酸性弱抗酸性，脱色剂必须用，脱色剂必须用 2 2%硫酸溶硫酸溶液。液。第53页1%盐酸乙醇 7.2 星型诺卡菌-生物学性状培养条件：5%-10%的CO27.3 星型诺卡菌-鉴别要点第54页菌种菌种抗酸染色抗酸染色尿酶尿酶肌醇肌醇半乳糖半乳糖葡萄糖产葡萄糖产酸酸肌醇产酸肌醇产酸4545生长生长明胶液化明胶液化星形诺卡菌星形诺卡菌D D+-D D+-+-巴西诺卡菌巴西诺卡菌D D+-+7.3 星型诺卡菌-鉴别要点第54页菌种抗酸染色尿酶肌醇半乳7.4 星型诺卡菌-药敏分析1.1.CLSICLSI推荐药敏为微量稀释法。培养基：含阳离子的推荐药敏为微量稀释法。培养基：含阳离子的MHMH肉汤。肉汤。2.2.磺胺类抗生素磺胺类抗生素是治疗诺卡菌属感染的首选药是治疗诺卡菌属感染的首选药3.3.对青霉素耐药对青霉素耐药第55页7.4 星型诺卡菌-药敏分析第55页7.5 星型诺卡菌-案例分析2005200520052005卫生部室间质评卫生部室间质评卫生部室间质评卫生部室间质评0511051105110511号：脓液号：脓液号：脓液号：脓液 48484848小时血平板：菌落呈黄色小时血平板：菌落呈黄色小时血平板：菌落呈黄色小时血平板：菌落呈黄色、圆圆圆圆、凸凸凸凸、干颗粒状，革兰染色阳性，纤细，干颗粒状，革兰染色阳性，纤细，干颗粒状，革兰染色阳性，纤细，干颗粒状，革兰染色阳性，纤细，长杆菌，抗酸染色呈一定酸性。长杆菌，抗酸染色呈一定酸性。长杆菌，抗酸染色呈一定酸性。长杆菌，抗酸染色呈一定酸性。5 5 5 5天后：沙保弱培养基：天后：沙保弱培养基：天后：沙保弱培养基：天后：沙保弱培养基：2-42-42-42-4天后呈色素的湿润菌落，触酶（天后呈色素的湿润菌落，触酶（天后呈色素的湿润菌落，触酶（天后呈色素的湿润菌落，触酶（+），七叶甘），七叶甘），七叶甘），七叶甘（+）硝还（）硝还（）硝还（）硝还（+），分解各种糖类。），分解各种糖类。），分解各种糖类。），分解各种糖类。第56页星型诺卡菌星型诺卡菌7.5 星型诺卡菌-案例分析2005卫生部室间质评第56页星8.溶血隐秘杆菌 8.1 概述概述 8.2 生物学性状生物学性状 8.3 检测方法检测方法第57页8.溶血隐秘杆菌 8.1 概述 8.2 8.1 溶血隐秘杆菌-概述1.隐秘杆菌属目前有隐秘杆菌属目前有8种，与人类感染相关的有溶血隐秘杆菌，化脓隐秘杆菌种，与人类感染相关的有溶血隐秘杆菌，化脓隐秘杆菌及伯尔德隐秘杆菌。及伯尔德隐秘杆菌。2.溶血隐秘杆菌可引起溶血隐秘杆菌可引起大龄儿童咽炎大龄儿童咽炎、伤口及软组织的感染伤口及软组织的感染、骨髓炎骨髓炎、心内膜心内膜炎。炎。3.实验室检出率比较低，生长缓慢。实验室检出率比较低，生长缓慢。4.选用红霉素、青霉素、一代头孢、万古霉素选用红霉素、青霉素、一代头孢、万古霉素第58页8.1 溶血隐秘杆菌-概述隐秘杆菌属目前有8种，与人类感染相8.2 溶血隐秘杆菌-生物学性状1.1.培养条件：培养条件：5%-10%5%-10%的的COCO2 2 ,厌氧或微需氧菌。厌氧或微需氧菌。培培养基：血平板。养基：血平板。2.2.菌落形态：在血平板上形成白色小菌落，菌落形态：在血平板上形成白色小菌落，48h48h后后会形成有狭窄的会形成有狭窄的溶血环的菌落。溶血环的菌落。3.3.涂片染色：革兰阳性，呈多形性棒形，有时呈涂片染色：革兰阳性，呈多形性棒形，有时呈颗粒状和念珠状，颗粒状和念珠状，类似小链球菌类似小链球菌。第59页8.2 溶血隐秘杆菌-生物学性状第59页8.1 溶血隐秘杆菌-鉴别要点第60页 菌名菌名触酶触酶硝还硝还乳糖乳糖葡萄糖葡萄糖麦芽糖麦芽糖碱性磷酸酶碱性磷酸酶木糖木糖明胶明胶溶血隐秘杆菌溶血隐秘杆菌-+-化脓隐秘杆菌化脓隐秘杆菌-+V V-+伯尔德隐秘杆菌伯尔德隐秘杆菌-+-V V注：注：V:11%-89%V:11%-89%菌株阳性菌株阳性8.1 溶血隐秘杆菌-鉴别要点第60页 菌名Thank you!Thank you!