诊断学——临床常见病原体检测课件

第九章第九章 临床常床常见病原体病原体检测Detection of clinical pathogenDetection of clinical pathogen 1 1、临床各类标本的采集、运送和检查的方法；、临床各类标本的采集、运送和检查的方法；2 2、临床常见病原体的种类分布及变迁情况、临床常见病原体的种类分布及变迁情况 ；3 3、耐药病原体检测的意义。、耐药病原体检测的意义。医院感染常见病原体的检查。医院感染常见病原体的检查。掌握 1 1、药敏敏试验的原理和方法的原理和方法 2 2、性传播疾病病原体检查的内容性传播疾病病原体检查的内容了解熟悉一、临床各类标本的采集运送和检查方法一、临床各类标本的采集运送和检查方法二、病原体耐药性检测二、病原体耐药性检测三、临床常见病原体检测三、临床常见病原体检测四、病毒性肝炎检测四、病毒性肝炎检测五、性传播疾病病原体检测五、性传播疾病病原体检测六、医院感染常见病原体检测六、医院感染常见病原体检测 一、临床各类标本的采集运送和检查方法一、临床各类标本的采集运送和检查方法标本采集的基本原则根据病史与临床表现确定标本采集的类型与部位，尽量采根据病史与临床表现确定标本采集的类型与部位，尽量采集病变明显部位标本。集病变明显部位标本。在发病的早期或急性期采集标本，最好在抗生素使用前在发病的早期或急性期采集标本，最好在抗生素使用前（如使用过抗生素应在申请单上注明）。（如使用过抗生素应在申请单上注明）。采集标本防止污染，并置于无菌容器，加盖密封、立即送采集标本防止污染，并置于无菌容器，加盖密封、立即送检。检。标本必须贴上标签，与检验申请单同时送检。标本必须贴上标签，与检验申请单同时送检。所有的标本都视为感染性标本，做好安全防护。所有的标本都视为感染性标本，做好安全防护。（一）血液标本的采集血血液液菌血症、败血症或菌血症、败血症或脓毒血症脓毒血症发热初期发热初期发热前发热前2小时小时发热高峰期发热高峰期成人：成人：10-20婴儿、儿童：婴儿、儿童：524小时内小时内采血采血23次次采集频率采集频率采血量（采血量（ml）采集时间采集时间需厌氧同时采集可增加阳性率需厌氧同时采集可增加阳性率（二）尿液标本的采集采集量：采集量：10-20ml中段尿中段尿晨尿晨尿注意清洁注意清洁外生殖器外生殖器导尿导尿更换新的导更换新的导尿管尿管穿刺尿穿刺尿考虑厌氧菌考虑厌氧菌感染感染（四）呼吸道标本（四）呼吸道标本类型：类型：鼻咽拭子、痰鼻咽拭子、痰经气管采集的标本。经气管采集的标本。合格痰标本合格痰标本鳞状上皮鳞状上皮10/LP。上呼吸道存在正常菌群，上呼吸道存在正常菌群，在采集标本与结果分析在采集标本与结果分析时应予考虑！时应予考虑！（五）脑脊液与其它无菌体液采集胸水胸水腹水腹水心包液心包液无菌采集是培养成功无菌采集是培养成功的首要因素的首要因素!脑膜炎奈瑟菌脑膜炎奈瑟菌肺炎链球菌肺炎链球菌流感嗜血杆菌流感嗜血杆菌不耐冷！不耐冷！（六）眼、耳标本采集采样容器：运送拭子眼部标本：亦可在局部麻醉后取角膜刮屑。耳标本：外耳道疖和中耳道炎用拭子采样，鼓膜穿刺亦可用于新生儿和老年人。（七）泌尿生殖道标本采集（七）泌尿生殖道标本采集男性：尿道口分泌物：性传播性疾病前列腺液：前列腺炎尿道拭子：在取材前2小时内不应排尿，用男性采样拭子插入尿道3-4 cm，轻轻转动并停留时10-15秒后取出（八）创伤、组织和脓肿标本不同部位采集多份标本不同部位采集多份标本n采集脓液及病灶深部分泌物采集脓液及病灶深部分泌物无菌干燥注射器抽取无菌干燥注射器抽取取脓液后立即排净注射器内空气，取脓液后立即排净注射器内空气，针头插入无菌橡皮塞送检。针头插入无菌橡皮塞送检。创伤范围大创伤范围大开放性脓肿开放性脓肿封闭性脓肿封闭性脓肿疑为厌氧菌疑为厌氧菌（九）血清用于检测患者特异性抗原抗体 病毒肝炎性抗原抗体检测 梅毒、艾滋病病毒抗原抗体检测血清学试验标本送检一般要求标本采集后2小时内送达实验室。血培养标本、脑脊液标本延迟送检不应放4保存。烈性传染病标本需专人护送。可能贴错条形码这样不对，扭着我腰都酸啦！标本的实验室质量评估标准 1、标本信息要全。2、仔细核对标本采集日期和送检日期。延误的标本，一般情况 下不接收。通常用于细菌学检验的标本的存放不要超过24h。而病毒检测的标本可于4存放23天。3、检查送检容器是否完整，有无破损或渗漏等情况，若有则不予 接收。4、标本储存、运送方式不当，不予接收。标本的实验室质量评估标准5 5、明显被污染的标本不予接收。6、标本量明显不足的标本，不予接收。7、同一天申请做同一实验的重复送检标本(血培养除外)，不予接收 8、对于烈性传染病标本的采集和运送应严格执行相关规定，要有完善的防护措施，按规定包裹及冷藏，附有详细的采样及送检纪录，由专人护送检查方法（一）直接显微镜检查（一）直接显微镜检查（二）病原体特异性抗原检查（二）病原体特异性抗原检查（三）病原体核酸检查（三）病原体核酸检查（四）病原体的分离培养和鉴定（四）病原体的分离培养和鉴定（五）血清学试验（五）血清学试验 （一）直接显微镜检查-不染色标本方法：方法：压滴法、悬滴法、压滴法、悬滴法、湿片法。湿片法。意义：意义：是否有生长、活动方式。部分是否有生长、活动方式。部分病原体可借此初步诊断，如梅毒螺病原体可借此初步诊断，如梅毒螺旋体。旋体。（一）直接显微镜检查-染色标本染色标本目的：了解细菌的形态、染色性或观察宿主细胞内染色标本目的：了解细菌的形态、染色性或观察宿主细胞内 包涵体。包涵体。方法：革兰染色、墨汁染色、抗酸染色、荧光染色方法：革兰染色、墨汁染色、抗酸染色、荧光染色意义：快速诊断的方法之一意义：快速诊断的方法之一革兰染色革兰染色阳性：紫色或紫红色阴性：红色阴性杆菌阴性杆菌真菌孢子真菌孢子阳阳阳阳性性性性球球球球菌菌菌菌墨汁染色 目的：检查新型隐球菌 宽厚荚膜宽厚荚膜脑脊液标本如不能及时送检，是否可冷藏保存？为什么？脑脊液标本如不能及时送检，是否可冷藏保存？为什么？（五）脑脊液与其它无菌体液采集胸水胸水腹水腹水心包液心包液无菌采集是培养成功无菌采集是培养成功的首要因素的首要因素!脑膜炎奈瑟菌脑膜炎奈瑟菌肺炎链球菌肺炎链球菌流感嗜血杆菌流感嗜血杆菌不耐冷！不耐冷！抗酸染色阳性：菌体呈红色阴性：菌体呈蓝色 主要用于分枝杆菌（结核）、奴卡菌鉴别阳性阳性阴性阴性荧光染色用形态学和免疫学相结合的方法可特异性地检测某些病原体的存在用形态学和免疫学相结合的方法可特异性地检测某些病原体的存在 阴道加德纳菌阴道加德纳菌 沙眼衣原体沙眼衣原体SARS（severe acute respiratory syndrome）病原体的确定。电镜检查电镜检查电镜检查不常规用于临床，对某些病毒感染却有确诊的价值电镜检查不常规用于临床，对某些病毒感染却有确诊的价值电镜检查不常规用于临床，对某些病毒感染却有确诊的价值电镜检查不常规用于临床，对某些病毒感染却有确诊的价值(二二)病原体特异性抗原检查病原体特异性抗原检查原理：利用抗原抗体之间的特异性反应，用已知原理：利用抗原抗体之间的特异性反应，用已知抗体检测患者血清及其他体液中的待测抗原。抗体检测患者血清及其他体液中的待测抗原。方法：免疫荧光技术、酶联免疫技术、方法：免疫荧光技术、酶联免疫技术、化学发光化学发光技术、乳凝集试验、对流免疫电泳技术、乳凝集试验、对流免疫电泳不足：标本中如果存在多种正常寄居微生不足：标本中如果存在多种正常寄居微生物，物，可因交叉抗原存在而不能肯定诊断。可因交叉抗原存在而不能肯定诊断。(二)病原体特异性抗原检查 细菌的血清分型：细菌的血清分型：检测细菌不同的抗原构造，还可分析细菌的菌群和血清型，如沙门检测细菌不同的抗原构造，还可分析细菌的菌群和血清型，如沙门菌属、志贺菌属和霍乱菌属等菌属、志贺菌属和霍乱菌属等 （三）病原体核酸的检测意意 义义灵敏度高，是检测病原体微生物最灵敏的方法，但具有一定灵敏度高，是检测病原体微生物最灵敏的方法，但具有一定的假阳性与假阴性。的假阳性与假阴性。特异性强，阳性只表明存在某种病原体的核酸，是否正被感特异性强，阳性只表明存在某种病原体的核酸，是否正被感染应结合临床具体分析。染应结合临床具体分析。特别适用于目前尚不能分离培养或很难分离培养的微生物。特别适用于目前尚不能分离培养或很难分离培养的微生物。适用于核酸变异的病原微生物，如病毒适用于核酸变异的病原微生物，如病毒（三）病原体核酸的检测常用试验方法有：常用试验方法有：1 1、聚合酶链式反应、聚合酶链式反应PCRPCR（polymerase chain reactionpolymerase chain reaction）。）。2 2、核酸探针杂交技术、核酸探针杂交技术3 3、实时荧光定量、实时荧光定量PCR PCR（Realtime PCRRealtime PCR）4 4、基因芯片等、基因芯片等（三）病原体核酸的检测定量定量PCRPCR灵敏度高灵敏度高特异性强特异性强操作简单操作简单肝炎病毒、巨细胞病毒肝炎病毒、巨细胞病毒HIVHIV、轮状病毒、轮状病毒各种病原菌各种病原菌基因芯片基因芯片灵敏度高灵敏度高特异性强特异性强高通量高通量多样本多微生物同时检测多样本多微生物同时检测核酸探针杂交技核酸探针杂交技术术灵敏度不够灵敏度不够细菌和病毒细菌和病毒1 1.细菌 分离培养是微生物学检验中确诊的关键步骤，标本的正确采集尤为重要！（四）病原体的分离培养和鉴定采集合适的标本采集合适的标本合适的培养方法合适的培养方法/培养基、培养条件培养基、培养条件菌落特征、生化反应结果和血清学实验进行鉴菌落特征、生化反应结果和血清学实验进行鉴定定（四）病原体的分离培养和鉴定鉴定的方法：手工法、仪器法（半自动、全自动、快速质谱仪）全自动细菌鉴定仪全自动细菌鉴定仪 质谱仪质谱仪 2.2.不能人工培养的病原体不能人工培养的病原体将标本接种易感动物、鸡胚或行细胞培养将标本接种易感动物、鸡胚或行细胞培养（四）病原体的分离培养和鉴定（五）血清学试验用已知病原体的抗原检测患者血清中相应抗体以诊断感染性疾病。人体感染病原体后经过一定时间人体感染病原体后经过一定时间产生特异性抗体，在体内可维持产生特异性抗体，在体内可维持数月或更长时间。数月或更长时间。（五）血清学试验方法：凝集试验、沉淀试验、补体结合试验、凝集试验、沉淀试验、补体结合试验、间接免疫荧光、放射免疫、酶联免疫吸附间接免疫荧光、放射免疫、酶联免疫吸附 试验。试验。双份血清检查：双份血清检查：病程早期和晚期分别采血清病程早期和晚期分别采血清2-32-3份检查，双份血清份检查，双份血清 的滴度呈的滴度呈4 4倍或倍或4 4倍以上升高，考虑病原体感染。倍以上升高，考虑病原体感染。单份血清检查：单份血清检查：特异性特异性 IgMIgM可作为感染性疾病的早期诊断指标，且可作为感染性疾病的早期诊断指标，且 可区分原发与复发感染。可区分原发与复发感染。（五）血清学试验适用范围适用范围血清学诊断可用于现症诊断，还可以用于疾病追溯调查。血清学诊断可用于现症诊断，还可以用于疾病追溯调查。血清学诊断对于某些病原体不能培养或难以培养的疾病，可以提供血清学诊断对于某些病原体不能培养或难以培养的疾病，可以提供诊断的依据。诊断的依据。不适于疾病的早期诊断，因为抗体检出最早也需在感染不适于疾病的早期诊断，因为抗体检出最早也需在感染4-54-5天以后，天以后，2 2周后效价才逐渐增高周后效价才逐渐增高（六）细菌毒素检测内毒素：革兰阴性杆菌死亡或自溶后释放。内毒素：革兰阴性杆菌死亡或自溶后释放。外毒素：葡萄球菌肠毒素、肉毒毒素、霍乱肠毒素。外毒素：葡萄球菌肠毒素、肉毒毒素、霍乱肠毒素。方法有生物学法、基因探针技术、免疫血清法、仪器法方法有生物学法、基因探针技术、免疫血清法、仪器法二、病原菌耐药性检测二、病原菌耐药性检测概念及方法概念及方法药物敏感性试验药物敏感性试验:测定抗感染药物在体外对病原微生物有无测定抗感染药物在体外对病原微生物有无 抑菌或杀菌作用的方法称为简称药敏试验。抑菌或杀菌作用的方法称为简称药敏试验。方法：方法：1 1、K-BK-B纸片琼脂扩散法纸片琼脂扩散法 2 2、稀释法、稀释法 3 3、浓度梯度纸条扩散法、浓度梯度纸条扩散法 4 4、耐药筛选试验、耐药筛选试验 5 5、折点敏感试验、折点敏感试验药物敏感试验药物敏感试验待检菌待检菌生理盐水生理盐水MH平板药敏试片药敏试片K-BK-B纸片片琼脂脂扩散法散法(Kirby-Bauer disc agar(Kirby-Bauer disc agar diffusion methoddiffusion method）18-24 18-24小时培养小时培养药物敏感试验药物敏感试验稀释法（dilution test）琼脂稀释法 肉汤稀释法 药物敏感试验药物敏感试验浓度梯度纸条扩散法浓度梯度纸条扩散法(gradient diffusion method)(gradient diffusion method)药物敏感试验药物敏感试验耐药筛选试验：以单一药物、单一浓度检测细菌耐药性。折点敏感试验：是仅用特定抗生素检测细菌耐药性。药物敏感试验药物敏感试验报告方法：敏感(susceptible，S)S：测试菌能被测定药物常规剂量给药后在体内达到的血药浓度所抑制或杀灭。耐药(resistant，R)R：测试菌不能被在体内感染部位可能达到的抗菌药物浓度所抑制。药物敏感试验中度敏感(intermediate，I)I：测试菌能被测定药物大剂量给药后在体 内达到的血药浓度所抑制或在测定药物浓集部位的体液(如尿 )中被抑制。最低抑菌浓度（最低抑菌浓度（Minimal inhibitory ncentration MIC)MIC Minimal inhibitory ncentration MIC)MIC：够抑制 检测菌肉眼可见生长的最低药物浓度称为最低抑菌浓度。执行标准均来自临床实验室标准协会（临床实验室标准协会（CLSICLSI）（一）（一）概概 念念耐药性（耐药性（drug resistancedrug resistance）：）：是指细菌对药物所具有的相是指细菌对药物所具有的相 对抵抗性。对抵抗性。固有耐药性（固有耐药性（intrinsic resistanceintrinsic resistance）：）：是由细菌染色体基是由细菌染色体基 因决定而代代相传的耐药，如肠道杆菌对青霉素的耐药。因决定而代代相传的耐药，如肠道杆菌对青霉素的耐药。获得耐药性（获得耐药性（acquired resistanceacquired resistance）：）：是细菌与药物反复接是细菌与药物反复接触后对药物的敏感性降低或消失，大多由质粒介导其耐药性，触后对药物的敏感性降低或消失，大多由质粒介导其耐药性，但亦可由染色体介导。但亦可由染色体介导。（二）耐药性病原体（二）耐药性病原体1、耐甲氧西林葡萄球菌（MRS）2.氨基糖苷类抗生素高耐药和耐万古的肠球菌（VRE）3.耐青霉素肺炎链球菌（PRSP）4、超广谱-内酰胺酶的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌（ESBL）5、多重耐药或泛耐药的铜绿假单胞菌和鲍曼不动相菌6、耐拉米夫定和泛昔洛韦的乙肝病毒。（三）耐药机制1 1、细菌水平和垂直传播耐药基因的整合子系统；2、产生抗生素灭活酶或钝化酶；3、改变药物的作用靶位；4、外膜通透性下降；5、主动外排系统过度表达；6、形成生物膜及外源耐药基因的获得。细菌的多种耐药基因可协同作用，导致多耐药菌株的出现。（三）耐药机制（四）耐药菌检测的意义（四）耐药菌检测的意义 耐药菌检测耐药菌检测 意意 义义耐甲氧西林金黄色葡萄球菌耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSAMRSA）耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌（MRSEMRSE）对全部对全部一内酰胺类抗菌药物，包括青霉素族和头孢菌一内酰胺类抗菌药物，包括青霉素族和头孢菌素族素族对氨基糖甙类、大环内脂类、克林霉素和四环对氨基糖甙类、大环内脂类、克林霉素和四环素等抗生素多重耐药。素等抗生素多重耐药。治疗首选药物为万古霉素治疗首选药物为万古霉素氨基糖苷类抗生素高耐药肠球菌氨基糖苷类抗生素高耐药肠球菌提示提示氨基糖苷类细胞壁的抗菌药物如青霉素类合用氨基糖苷类细胞壁的抗菌药物如青霉素类合用治疗无效，有助于临床调整和重新确定治疗方案。治疗无效，有助于临床调整和重新确定治疗方案。（四）耐药菌检测的意义（四）耐药菌检测的意义 耐药菌检测 意 义耐青霉素的肺炎链球菌肺炎链球菌对氨苄西林、氨苄西林/舒巴坦、头孢克肟、头孢唑啉的临床治疗疗效很差，治疗时参考药敏结果选择药物，经验治疗重症感染时，可用头孢曲松或头孢噻肟联合万古霉素用药。超广谱-内酰胺酶（大肠、肺克）2010更改部分头孢菌素的折点后，病人的结果不需修改。院内感染控制仍需报告ESBL（四）耐药菌检测的意义（四）耐药菌检测的意义 耐药菌检测 意 义-内酰胺酶1、流感嗜血杆菌、淋病奈瑟菌以及卡拉莫拉汉菌等阳性，表示对青霉素、氨卞西林以及阿莫西林耐药。2、葡萄球菌属以及肠球菌属等，阳性表示对青霉素、氨基组青霉素、羧基组青霉素以及脲基组青霉素耐药（四）耐药菌检测的意义（四）耐药菌检测的意义检出耐药菌需采取的重要措施：接触隔离！（五）病原体耐药基因检测耐药基因的产生：1、获得外源性基因 2、细菌自身基因突变细菌耐药基因检测方法：PCR法、生物芯片、PCR-RFLP分析、动测序、PCR-SSCP分析 三、临床常见病原体检测三、临床常见病原体检测 细菌、病毒、真菌、寄生虫、支原体、衣原体以及细菌、病毒、真菌、寄生虫、支原体、衣原体以及立克次体等。立克次体等。（一）细菌感染检查项目的选择（一）细菌感染检查项目的选择细菌感染细菌感染抗原抗体检测抗原抗体检测PCRPCR技术技术基因探针技术基因探针技术 培养培养 涂片镜检涂片镜检（二）病毒感染检查项目的选择（二）病毒感染检查项目的选择电镜检查电镜检查核酸检测（核酸检测（PCRPCR）细胞培养细胞培养特异性抗体检测特异性抗体检测（三）真菌感染检查项目的选择（三）真菌感染检查项目的选择 真 菌 培养培养 涂片镜检涂片镜检抗原检测抗原检测灾光定量灾光定量PCRPCR核酸杂交技术核酸杂交技术rDNArDNA序列测序序列测序基因组核酸电泳基因组核酸电泳核型分析核型分析G G试验试验GMGM试验试验（四）寄生虫病（四）寄生虫病 病原学诊断病原学诊断 免疫学诊断免疫学诊断 寄生虫寄生虫 DNADNA探针技术探针技术 PCRPCR（四）支原体检测（四）支原体检测 支支 原原 体体肺炎支原体：肺炎肺炎支原体：肺炎解脲支原体、人型支原体：解脲支原体、人型支原体：泌尿生殖道感染泌尿生殖道感染培养法 免疫荧光法免疫荧光法光定量光定量PCRPCR和和DNADNA探针技术探针技术（六）螺旋体检测（六）螺旋体检测暗视野显微镜检查：暗视野显微镜检查：n梅毒血清学试验梅毒血清学试验（1 1）过筛试验：）过筛试验：RPRRPR、VDRLVDRL、TRUSTTRUST（2 2）确诊试验：）确诊试验：FTA-ABSFTA-ABS、MHA-TPMHA-TP、TPPATPPAnTP-PCRTP-PCR：TPPCRTPPCR检测梅毒螺旋体检测梅毒螺旋体DNADNA，特异性很强，敏，特异性很强，敏感性很高，是目前诊断梅毒螺旋体的先进方法。感性很高，是目前诊断梅毒螺旋体的先进方法。PCRPCR检检测梅毒螺旋体的测梅毒螺旋体的DNADNA，其敏感性、特异性均优于血清学，其敏感性、特异性均优于血清学方法方法 （六）螺旋体检测（六）螺旋体检测（七）立克次体检测验（七）立克次体检测验 专性细胞内生长的原核细胞性微生物专性细胞内生长的原核细胞性微生物 对多种抗生素敏感对多种抗生素敏感 引起自然疫源性疾病，且为人畜共患引起自然疫源性疾病，且为人畜共患 斑疹伤寒斑疹伤寒（流行性斑疹伤寒、地方性斑疹伤寒、（流行性斑疹伤寒、地方性斑疹伤寒、加拿大斑疹伤寒）加拿大斑疹伤寒）立克次体属立克次体属 斑点热斑点热（洛矶山斑点热、纽扣热、昆士兰热、（洛矶山斑点热、纽扣热、昆士兰热、立克次体痘、北亚蜱传斑疹伤寒立克次体痘、北亚蜱传斑疹伤寒）（七）立克次体检测（七）立克次体检测外斐试验：为非特异性血清学诊断试验，用于外斐试验：为非特异性血清学诊断试验，用于 斑疹伤寒、斑点热和恙虫病的确诊斑疹伤寒、斑点热和恙虫病的确诊特异性血清学试验：免疫荧光试验、酶联特异性血清学试验：免疫荧光试验、酶联 吸附试验和补体结合试验等吸附试验和补体结合试验等 （八）衣原体感染检测（八）衣原体感染检测直接显微镜检查：检查衣原直接显微镜检查：检查衣原体包涵体体包涵体细胞培养：阳性可明确诊断。细胞培养：阳性可明确诊断。直接荧光抗体检测直接荧光抗体检测定量定量PCRPCRDNADNA探针探针（九）流感病毒的检测（九）流感病毒的检测病毒核酸检测病毒核酸检测病毒分离培养病毒分离培养病毒抗原检测病毒抗原检测血清学诊断血清学诊断（十）严重急性呼吸道综合征（十）严重急性呼吸道综合征（SARSSARS）病毒的检测）病毒的检测免病学方法：免疫荧光试验（免病学方法：免疫荧光试验（IAFIAF）酶联免疫吸咐试验（酶联免疫吸咐试验（ELISAELISA）基因检测方法基因检测方法细胞培养细胞培养实验结果分析和临床应用注意点实验结果分析和临床应用注意点1 1、分离培养的阴性结果不能完全排除感染的可能、分离培养的阴性结果不能完全排除感染的可能;2 2、抗原检测需考虑共同抗原引起的交叉反应；、抗原检测需考虑共同抗原引起的交叉反应；3 3、核酸检测由于灵敏度高，影响因素多，容易出现假阳性或、核酸检测由于灵敏度高，影响因素多，容易出现假阳性或假阴性假阴性;4 4、血清学试验：、血清学试验：IgMIgM现期感染现期感染,IgG,IgG既往感染。既往感染。四、四、病毒性肝炎检测病毒性肝炎检测病毒性肝炎主要有病毒性肝炎主要有7 7型，型，甲型甲型(HA)-(HA)-甲型肝炎病毒甲型肝炎病毒 (HAV)(HAV)乙型乙型(HB)-(HB)-乙型肝炎病毒乙型肝炎病毒 (HBV)(HBV)丙型丙型(HC)-(HC)-丙型肝炎病毒丙型肝炎病毒 (HCV)(HCV)丁型丁型(HD)-(HD)-丁型丁型(HDV)(HDV)和戊型肝炎病毒和戊型肝炎病毒 (HEV)(HEV)戊型戊型(HE)-(HE)-戊型肝炎病毒戊型肝炎病毒 (HEV)(HEV)庚型庚型(HG)-(HG)-庚型肝炎病毒庚型肝炎病毒 (HGV)(HGV)、输血传播病毒肝炎输血传播病毒肝炎-输血传播病毒输血传播病毒(TTV)(TTV)目前常用的检测方法目前常用的检测方法酶联免疫吸咐试验（酶联免疫吸咐试验（ELISAELISA）实时荧光实时荧光PCRPCR聚合酶联反应（聚合酶联反应（PCRPCR）放射免疫法（放射免疫法（RIARIA）血细胞凝集法血细胞凝集法斑点杂交法斑点杂交法（一）甲型肝炎病毒标志物检测（一）甲型肝炎病毒标志物检测核酸类型传播途径途径临床表现检测标本外周血粪便水源食物微小微小RNA粪口途径粪口途径急性黄疸肝炎急性黄疸肝炎（一（一)甲型肝炎病毒标志物检测甲型肝炎病毒标志物检测标志物名称标志物名称 检测方法检测方法 参考值参考值抗抗HAV-IgM ELISA HAV-IgM ELISA 阴性阴性抗抗HAV-IgG ELISA HAV-IgG ELISA 阴性阴性抗抗HAV-IgA ELISA HAV-IgA ELISA 阴性阴性HAVAg ELISA HAVAg ELISA 阴性阴性HAV-RNA RT-PCR HAV-RNA RT-PCR 阴性阴性(二二)乙型肝炎病毒标志物检测乙型肝炎病毒标志物检测核酸类型传播途径途径临床表现检测标本外周血唾液尿液DNA血液血液乙型肝炎乙型肝炎(二二)乙型肝炎病毒标志物检测乙型肝炎病毒标志物检测HBV标志物标志物临床意义临床意义HBsAg阳性阳性被用来作为传染性标志之一被用来作为传染性标志之一;阳性常见于急性、慢性乙型肝炎，慢活肝阳性常见于急性、慢性乙型肝炎，慢活肝;乙肝携带者。乙肝携带者。HBsAb阳性阳性保护性抗体；保护性抗体；接种乙肝疫苗后；接种乙肝疫苗后；既往感染。既往感染。(二二)乙型肝炎病毒标志物检测乙型肝炎病毒标志物检测HBV标志物标志物临床意义临床意义HBeAg阳性阳性是病毒复制活跃，传染性强的指标。是病毒复制活跃，传染性强的指标。HBeAg(+),HBsAg(+)的孕妇所生的新生儿，母婴垂直传播的孕妇所生的新生儿，母婴垂直传播的机会很高，达的机会很高，达90%。HBeAb阳性阳性意味着大部分意味着大部分HBV被清除，复制减少，传染性降低，但并被清除，复制减少，传染性降低，但并非无传染性。非无传染性。急性期即易发展为慢性乙型肝炎。急性期即易发展为慢性乙型肝炎。HBcAb阳性阳性抗抗-HBcIgG：对机体无保护作用，其阳性可持续数十：对机体无保护作用，其阳性可持续数十年甚至终身。年甚至终身。(二二)乙型肝炎病毒标志物检测乙型肝炎病毒标志物检测HBV标志物标志物临床意义临床意义Pre-S1阳性阳性是乙肝病毒复制和活动的标志物。是乙肝病毒复制和活动的标志物。对对“二对半二对半”检测起重要的补充作用。检测起重要的补充作用。前前s1抗原转阴越早、前抗原转阴越早、前s1抗体转阳越早，患者病程越短、抗体转阳越早，患者病程越短、预后越好。预后越好。Pre-S2阳性阳性有传染性有传染性抗抗Pre-S2提示提示HBV已被清除，预后较好。已被清除，预后较好。1 13 34 45 52 2大三阳大三阳小三阳小三阳(二二)乙型肝炎病毒标志物检测乙型肝炎病毒标志物检测HBV DNAHBV DNA：是是HBVHBV感染感染最直接，最灵敏和最特异的检测指标最直接，最灵敏和最特异的检测指标，且血清，且血清中中HBV DNAHBV DNA的水平可作为的水平可作为治疗方案与疗效观察的指标。治疗方案与疗效观察的指标。是诊断乙型的佐证，表明是诊断乙型的佐证，表明HBVHBV复制及有传染性。也用于复制及有传染性。也用于HBsAgHBsAg疫苗后垂直传播的阻断效果评价疫苗后垂直传播的阻断效果评价(三三)丙型肝炎病毒标志物丙型肝炎病毒标志物丙丙型型肝肝炎炎病病毒毒（hepatitis hepatitis C C virusvirus，HCVHCV）为为黄黄病病毒毒属属、单链正股单链正股RNARNA病毒。病毒。血液为其主要传播途径。血液为其主要传播途径。病情虽较乙型肝炎轻，但更易转为慢性。病情虽较乙型肝炎轻，但更易转为慢性。(三三)丙型肝炎病毒标志物丙型肝炎病毒标志物检测方法与参考值检测方法与参考值 标志物标志物 检测方法检测方法 参考值参考值 HCV-RNA RT-PCR HCV-RNA RT-PCR 阴性阴性 抗抗-HCV IgM ELISA -HCV IgM ELISA 阴性阴性 抗抗-HCV IgG ELISA -HCV IgG ELISA 阴性阴性 (三三)丙型肝炎病毒标志物丙型肝炎病毒标志物HCV临床意义临床意义HCV-RNA有助于有助于HCV感染的早期诊断。感染的早期诊断。阳性提示阳性提示HCV复制活跃，传染性强。复制活跃，传染性强。HCVRNA转阴提示转阴提示HCV复制受抑，预后较好。复制受抑，预后较好。连续观察连续观察HCVRNA，结合抗一，结合抗一HCV的动态变化，的动态变化，可作为丙肝的预后判断和干扰素等药物疗效的评价可作为丙肝的预后判断和干扰素等药物疗效的评价指标指标(三三)丙型肝炎病毒标志物丙型肝炎病毒标志物HCV临床意义临床意义抗抗-HCVIgM是丙型肝炎是丙型肝炎活动和具有传染性的指标，常见于急性活动和具有传染性的指标，常见于急性HCV感染感染。持续阳性可作为转为慢性肝炎的指标，或提示病毒持持续阳性可作为转为慢性肝炎的指标，或提示病毒持续存在并有复制续存在并有复制抗抗-HCVIgG表明体内已有表明体内已有HCV感染，但不能作为感染的早期指标。感染，但不能作为感染的早期指标。五、性传播疾病病原体检测五、性传播疾病病原体检测传播途径：传播途径：性行为传播性行为传播 间接接触传染间接接触传染 血液与血制品传播血液与血制品传播 对胎儿与新生儿的传播对胎儿与新生儿的传播 职业性传播职业性传播常见的性病有哪些？常见的性病有哪些？疾病种类：疾病种类：2020余种余种 1 1、艾滋病、艾滋病 2 2、梅毒、梅毒-螺旋体螺旋体 3 3、淋病、淋病 4 4、软下疳、软下疳 5 5、生殖器疱疹生殖器疱疹 尖锐湿疣尖锐湿疣 6 6、非淋病性尿道炎、非淋病性尿道炎支原体、衣原体支原体、衣原体（一）流行病学（一）流行病学 病毒病毒细菌细菌国家乙类传染病国家乙类传染病中中国国爱爱滋滋病病村村里里的的病病人人爱滋病家庭遗孤爱滋病家庭遗孤正规医疗机构是性病患者的正确选择（六（六)医院感染常见病原体检查医院感染常见病原体检查医院感染：医院感染：又称院内感染或医院获得性感染。是指住院患又称院内感染或医院获得性感染。是指住院患者在医院内获得的感染，包括住院期间发生的感染和医院者在医院内获得的感染，包括住院期间发生的感染和医院内获得出院后发生的感染。内获得出院后发生的感染。医务工作人员在医院内获得的感染也属医院感染医务工作人员在医院内获得的感染也属医院感染(一一)医院感染的判断标准医院感染的判断标准1 1、无明确潜伏期的感染，规定入院、无明确潜伏期的感染，规定入院4848小时后发生的感染为医院感染；小时后发生的感染为医院感染；有明确潜伏期的感染，自入院时起超过平无潜伏期后发生的感染。有明确潜伏期的感染，自入院时起超过平无潜伏期后发生的感染。2 2、本次感染直接与上次住院有关。、本次感染直接与上次住院有关。3 3、在原有感染基础上出现其他部位的感染（除外脓毒血症迁徙灶），、在原有感染基础上出现其他部位的感染（除外脓毒血症迁徙灶），或在原感染已知病原体基础上又分离出新的病原体（排除污染和原或在原感染已知病原体基础上又分离出新的病原体（排除污染和原来的混合感染）的感染。来的混合感染）的感染。(一一)医院感染的判断标准医院感染的判断标准4 4、新生儿在分娩过程中产生获得的感染。、新生儿在分娩过程中产生获得的感染。5 5、由于诊疗措施激活的潜在性感染，如疱疹、由于诊疗措施激活的潜在性感染，如疱疹 病毒、结核杆菌的感染。病毒、结核杆菌的感染。6 6、医务人员在医院工作期间获得的感染。、医务人员在医院工作期间获得的感染。(二二)病原学病原学某年我分离院菌属分布图(二二)病原学病原学 肝炎病毒、流感病毒、疱疹病毒水痘病素、轮状病毒、巨细胞病毒、肠道病毒、柯萨奇病毒病毒真菌类、弓形虫、肺孢子虫真菌类、弓形虫、肺孢子虫(三三)常见临床类型常见临床类型1 1、下呼吸道感染、下呼吸道感染2 2、尿路感染、尿路感染3 3、手术切口感染、手术切口感染4 4、胃肠道感染、胃肠道感染5 5、血液感染、血液感染6 6、皮肤和软组织感染、皮肤和软组织感染(四四)医院环境中细菌污染监测和灭医院环境中细菌污染监测和灭 菌效果的监测菌效果的监测空气（空气（CFU/m3CFU/m3）物体表面（物体表面（CFU/m2CFU/m2）医务人员（医务人员（CFU/m2CFU/m2）细菌、真菌细菌、真菌病毒病毒寄生虫寄生虫螺旋体螺旋体支原体支原体衣原体衣原体立克次体立克次体血液、尿液、粪便血液、尿液、粪便无菌体液、各种拭子无菌体液、各种拭子组织、脓液组织、脓液血清血清显微镜检查显微镜检查培养培养抗原抗体检测抗原抗体检测分子生物学技术分子生物学技术G试验、试验、GM试验试验电镜检查电镜检查细胞培养细胞培养抗原抗体检测抗原抗体检测核酸检测核酸检测病原学检查病原学检查免疫学检查免疫学检查DNADNA探针探针PCRPCR耐甲氧西林葡萄球菌（MRSA、MRSE）大肠、肺克（ESBL）耐青霉素的肺链（PRSP）耐万古肠球菌（VRE）泛耐的铜绿泛耐的鲍曼 小小 结结思考题思考题1 1、临床标本采集的基本原则是什么？、临床标本采集的基本原则是什么？2 2、临床感染常见的病原体类型有哪些？、临床感染常见的病原体类型有哪些？谢谢！谢谢！电话：电话：电话：电话：邮箱：邮箱：邮箱：邮箱：