生物：11《DNA重组技术的基本工具》课件.ppt

基 因 工 程 每100kg 猪或牛的胰腺中仅可提取45g。 1979年 ， 美 国 将 人 的 胰 岛 素 基 因 重 组 到 大 肠 杆 菌内 ， 实 现 了 细 菌 生 产 胰 岛 素 ， 大 大 降 低 了 生 产 成 本 。治疗糖尿病特效药 据WTO调查： 2005年全世界约有糖尿病患者1.8亿人，我国约6000万。 问题探讨：苏云金芽孢杆菌含有一种可以合成毒蛋白的基因。让细菌的毒蛋白基因在棉花细胞中表达，可培育出抵抗棉铃虫害的抗虫棉。想一想需要做哪些关键工作？苏 云 金 芽 孢 杆 菌 普 通 棉 花 抗 虫 棉 一 、 限 制 性 核 酸 内 切 酶 “ 分 子 手 术 刀 ”v 1.主要来源：v种类与命名：v作用特点：v 4.限制酶识别序列 v 5.作用结果： 种 类 与 命 名 ： 现在已经从约300种微生物中分离出了约4000种限制性内切酶(限制酶)。粘 质 沙 雷 氏 杆 菌（ Serratia marcesens练 习 ： 流 感 嗜 血 杆 菌 的 d菌 株( Haemophilus influenzae d )中 先 后 分 离 到 3种 限 制 酶 ， 则 分别 命 名 为 :Hind、 Hind和 Hind T12345 A1234 5HHHH H O T12345 A1234 5HHHH OH 2O + O 限 制 酶 DNA解 旋 酶区 别 切 割 特 定 的 核 苷 酸 序 列的 磷 酸 二 酯 键 将 DNA两 条 链 的 氢 键打 开 形 成 两 条 单 链限 制 酶 DNA水 解 酶区 别 切 割 特 定 的 核 苷 酸 序 列的 磷 酸 二 酯 键 ， 形 成 片段 的 DNA. 切 割 磷 酸 二 酯 键 ， 形 成单 个 的 脱 氧 核 苷 酸 。 能 被 限 制 性 内 切 酶 特异 性 识 别 的 切 割 部 位都 具 有 回 文 序 列 ：在 切 割 部 位 ， 一 条 链正 向 读 的 碱 基 顺 序 与另 一 条 链 反 向 读 的 顺序 完 全 一 致 。 黏 性 末 端 黏 性 末 端 黏 性 末 端 黏 性 末 端 平 末 端 平 末 端 同 一 种 DNA聚 合 酶 DNA连 接 酶区 别 1区 别 2相 同 点 1)只 能 将 单 个 核 苷 酸 连接 到 已 有 的 核 酸 片 段 上 ，形 成 磷 酸 二 酯 键形 成 磷 酸 二 酯 键 1)在 两 个 DNA片 段 之间 形 成 磷 酸 二 酯 键2)以 一 条 DNA链 为 模 板 ，连 接 成 一 条 互 补的 DNA链 2)将 DNA双 链 上 的 两个 缺 口 同 时 连 接 起 来 ，不 需 要 模 板 二 、 “ 分 子 缝 合 针 ” DNA连 接 酶催 化 磷 酸 二 酯 键 形 成 类 型 三 、 “ 分 子 运 输 车 ” 基 因 进 入 受 体 细 胞 的 载体 载 体 需 要 的 条 件 ： 有 1多 个 限 制 酶 切 点 对 受 体 细 胞 无 害 导 入 基 因 能 在 受 体 细 胞 中 复 制 、 表 达 有 某 些 标 记 基 因 ， 便 于 筛 选 常 用 运 载 体 ： 细 菌 的 质 粒 噬 菌 体 衍 生 物 或 某 些 动 植 物 病 毒假如目的基因导入受体细胞后不能复制或不能转录，转基因生物能有预想的效果吗？作为分子运输车载体，如果没有切割位点将会怎样？霍乱菌的质粒多个限制酶切点，你会用它来做分子运输车吗？目的基因有没有进入受体细胞，如何去发现？ 1.在基因工程中，切割运载体和含有目的基因的DNA片段，需使用（ ）A.同种限制酶 B. 两种限制酶C.同种连接酶 D. 两种连接酶A课 堂 练 习 课 堂 练 习 课 堂 练 习 下 课 了 !