洁净区微生物基础知识培训

洁 净 区 微 生 物基 础 知 识 培 训 2011年 赵 灵 芝 医 药 工 业 洁 净 室 必 须 以 尘 粒 和 微 生 物 为 环境 控 制 对 象 二 者 相 比 ， 微 生 物 更 难 以 控 制 。 1、 存 在 范 围 广 2、 生 长 速 度 快 3、 生 存 能 力 强 什 么 是 微 生 物 ？ 微 生 物（ Microorganism） 通常 是 描 述 一 切 不 借 助显 微 镜 用 肉 眼 看 不 见的 微 小 生 物 ， 包 括 病毒 、 细 菌 、 真 菌 、 原生 动 物 、 和 某 些 藻 类 。 微生物的种类 具 有 细 胞 结构 的 微 生 物没 有 细 胞 结 构 的微 生 物 ： 病 毒 原 核 生 物 ：（ 由 原 核 细 胞 构 成 的 ）真 核 微 生 物（ 由 真 核 细 胞 构 成 的 ） 真 菌显 微 藻 类原 生 动 物细 菌 草 履 虫水 绵放 线 菌 （ 1） 体 积 小 ， 面 积 大 （ 细 胞 以 微 米 、 纳 米 来 计 算 ） （ 2） 吸 收 多 ， 转 化 快 （ 3） 生 长 旺 ， 繁 殖 快 如 大 肠 杆 菌 （ 4） 适 应 强 ， 易 变 异 如 感 冒 病 毒 （ 5） 分 布 广 ， 种 类 多 分 解 者微 生 物 消 费 者动 物环 境土 壤 、 空 气 、 水 生 产 者植 物 （ 包 括 部 分微 生 物 ）微 生 物 在 生 态 系 统 中 的 地 位 ： 消 费 者 ， 部 分 生 产 者 v植 物 病 原 菌 ： 稻 瘟 病 烟 草 花 叶 病 烟 草 野 火 病v动 物 病 原 菌 ： 鸡 霍 乱 猪 瘟 (口 涕 疫 )v人 类 的 疾 病 ： 非 典 型 肺 炎 (SARS） 爱 滋 病 流 感 伤 寒 1、 葡 萄 球 菌 可 引 起 局 部 感 染 2、 大 肠 杆 菌 胆 道 和 尿 道 感 染 3、 绿 脓 杆 菌 化 脓 性 感 染 、 中 耳 炎 、 肺 炎 4、 枯 草 杆 菌 结 膜 炎 5、 酵 母 菌 使 糖 分 解 ， 药 液 产 生 有 机 酸 6、 霉 菌 使 制 剂 霉 坏 ， 酸 败 变 质 空 气 水 人 员 器 具 灰 尘 微 生 物 的 飞 行 器 微 生 物 不 是 凭 空 存 在 ， 99%的 微 生 物 都 附在 颗 粒 上 。 控 制 空 气 中 的 微 粒 数 ， 就 是 控制 了 微 生 物 数 量 。 灰 尘 、 微 粒 具 有 沉 降 和 粘 附 在 趋 势 ， 所 以同 一 区 域 内 ， 地 面 是 微 粒 相 对 集 中 在 地 方 ，也 是 微 生 物 相 对 较 多 的 地 方 ， 墙 壁 也 容 易粘 附 灰 尘 。 Air Lock 仓 库 or外 包 间洁 净 区 走 廊Or DISP 高 效 过 滤 器高 效 过 滤 器 气 流 控 制 空 气 对 流 ， 减 少 外 界 脏 空 气 中 的 微粒 、 灰 尘 进 入 车 间 。 必 须 保 持 缓 冲 间 门 的 关 闭 ， 不 得 同 时 开启 。 空 气 自 净 有 死 角顶 送 顶 回 （ 洁 净 走 廊 ） ， 地 面顶 送 侧 回 （ 清 洗 间 ， 操 作 间 ） ， 对 面 的 墙 角 ，顶 棚 。 微 粒 沉 降 和 粘 附不 能 用 脚 踏 在 垫 仓 板 和 料 桶 上 。不 得 跑 跳 、 大 声 喧 哗 。不 靠 在 墙 上 或 其 他 物 体 上 。 药 品 生 产 质 量 管 理 规 范 第 四 章 设 备 第 三 十 四 条 中 明 确 规 定 ： 纯化 水 、 注 射 用 水 的 制 备 、 储 存 和 分 配应 能 防 止 微 生 物 的 滋 生 和 污 染 。 储 罐和 输 送 管 道 所 用 材 料 应 无 毒 、 耐 腐 蚀 。管 道 的 设 计 和 安 装 应 避 免 死 角 、 盲 管 。储 罐 和 管 道 要 规 定 清 洗 、 灭 菌 周 期 药 厂 的 水 源 ： 城 市 自 来 水 、 井 水 等 达 到 饮用 水 标 准 的 水 源 。 口 服 制 剂 ： 片 剂 、 颗 粒 剂 、 糖 浆 容 器 清 洗 ： 饮 用 水 容 器 最 终 淋 洗 ： 纯 化 水 小 容 量 注 射 剂 ： 1 5ml 配 制 容 器 清 洗 ： 纯 化 水 容 器 最 终 淋 洗 ： 注 射 用 水 1、 人 在 代 谢 过 程 中 会 释 放 和 分 泌 污 染 物 。 2、 人 体 表 面 、 衣 服 能 沾 染 、 携 带 污 染 物 。3、 人 在 洁 净 室 内 的 各 种 动 作 也 会 产 生 微粒 和 微 生 物 。 1、 皮 肤 ： 表 皮 葡 萄 球 菌 、 白 色 葡 萄 球 菌 、 八 叠 球 菌 属 细 菌 、 类 白 喉棒 杆 菌 、 金 黄 色 葡 萄 球 菌 等2、 口 腔 ： 唾 液 链 球 菌 、 溶 血 链 球 菌 、 乳 酸 杆 菌 、 流 感 杆 菌 、 类 白 喉棒 杆 菌 等3、 上 呼 吸 道 ： 包 括 喉 、 鼻 道 和 鼻 咽 。 甲 型 链 球 菌 、 奈 氏 球 菌 、 肺 炎球 菌 、 流 感 杆 菌 、 乙 型 链 球 菌 、 葡 萄 球 菌 、 绿 脓 杆 菌 、 大 肠 杆 菌 、变 形 杆 菌 等 。4、 下 呼 吸 道 ： 包 括 气 管 、 支 气 管 和 肺 。 健 康 人 的 下 呼 吸 道 是 无 菌 的 。 5、 胃 肠 道 ： 大 肠 埃 希 氏 菌 、 产 气 杆 菌 、 变 形 杆 菌 、 粪 产 碱 杆 菌 、 粪链 球 菌 、 梭 杆 菌 属 、 螺 旋 体 属 、 乳 杆 菌 属 、 梭 菌 属 、 拟 杆 菌 属 中的 一 些 种6、 泌 尿 生 殖 道 ： 常 见 的 有 嗜 酸 乳 杆 菌 、 类 白 喉 棒 杆 菌 、 葡 萄 球 菌 、链 球 菌 和 大 肠 杆 菌 药 品 生 产 质 量 管 理 规 范 中 明 确 规 定 ： 进入 洁 净 室 （ 区 ） 的 人 员 不 得 化 妆 和 佩 带 饰物 ， 不 得 裸 手 直 接 接 触 药 品 。 药 品 生 产 质 量 管 理 规 范 中 明 确 规 定 ：无 菌 工 作 服 必 须 包 盖 全 部 头 发 、 胡 须 及 脚部 ， 并 能 阻 留 人 体 脱 落 物 。 国 外 实 验 资 料 ， 可 以 认 为 人 员 的 发 菌 量 有 以 下 数 据 可 供参 考 。 洁 净 室 内 当 工 作 人 员 穿 无 菌 服 时 ， 静 止 时 的 发 菌 量 一般 为 10 300 个 (min人 )， 躯 体 一 般 活 动 时 的 发 菌 量为 150 1000 个 (min人 )， 快 步 行 走 时 的 发 菌 量 为9002500 个 (min人 )。 咳 嗽 一 次 的 发 菌 量 一 般 为 70 700 个 (min人 )， 喷嚏 一 次 的 发 菌 量 一 般 为 4000 60000 个 (min人 )。 穿 平 常 衣 服 时 发 菌 量 为 3300 62000 个 (min人 )。 无 口 罩 发 菌 量 ： 有 口 罩 发 菌 量 为 (1： 7) (1： 14)。 发 菌 量 ： 发 尘 量 为 (1 ： 500) (1： 1000)。 可 知 洁 净 室 内 穿 无 菌 衣 人 员 的 静 态 发 菌 量 一 般 不 超 过300 个 (min人 )， 动 态 发 菌 量 一 般 不 超 过 1000 个 (min人 )。 一 次 更 鞋 ： 阻 断 外 界 粘 在 鞋 底 的 垃 圾 、 颗 粒 及 微 生 物 。 相 对 而 言 ，脚 底 是 最 脏 的 部 分 。 脱 去 外 套 ： 阻 断 外 界 沉 降 在 外 套 上 的 颗 粒 和 微 生 物 。 一 更 洗 手 ： 规 范 的 洗 手 能 消 除 手 部 皮 肤 的 污 垢 和 大 部 分 的 微 生 物 。洗 手 一 定 要 用 洗 手 液 和 充 足 的 流 水 。 二 更 带 口 罩 ： 阻 断 鼻 腔 、 呼 吸 道 的 微 生 物 发 散 ， 洁 净 区 内 不 能 脱 下口 罩 带 发 套 ： 阻 断 头 发 、 头 皮 表 面 的 微 生 物 发 散 。 保 证 发 套 完 整 的包 裹 头 发 。 穿 连 体 服 ： 阻 断 体 表 皮 肤 的 微 生 物 发 散 。 洁 净 区 内 不 能 解 开 连体 服 手 消 毒 ： 再 次 消 除 手 部 的 细 菌 和 微 生 物 。 75%的 酒 精 能 杀 灭99%的 微 生 物 。 二 次 更 鞋 ： 阻 断 一 更 、 二 更 内 沉 降 在 地 板 上 的 颗 粒 和 微 生 物 。洁 净 区 工 作 鞋 不 能 穿 出 二 更 的 鞋 箱 外 。 勤 洗 澡 、 洗 头 ， 勤 换 内 衣 去 除 皮 屑 、 头 屑 等 人 体 脱 落 物 ， 保 持 体 表 洁 净 。 勤 剪 头 发 工 作 时 ， 头 皮 不 容 易 出 汗 ， 易 被 纸 发 套 全 部 包 裹 。 勤 剪 手 指 甲 指 甲 内 能 够 藏 污 纳 垢 ， 有 很 多 的 致 病 微 生 物 。 勤 换 鞋 准 备 两 双 鞋 每 天 交 替 穿 着 ， 保 证 鞋 内 干 燥 无 异 味 。 清 洗 ： 最 后 淋 洗 用 水 :纯 化 水 。 清 洗 后 按 要 求 包 装 并 有 清 洁 标 签 ， 注明 清 洁 日 期 、 有 效 期 至 和 清 洗 人 储 存 有 效 期 ， 混 合 器 ， 7天 ； 部 件 ， 包 括 不 锈 钢 桶 、 Bar、 筛 网等 ， 30天 消 毒 （ disinfection） ： 杀 死 物 体 上 病 原 微 生 物 的方 法 ， 并 不 一 定 杀 死 含 芽 胞 的 细 菌 或 非 病 原 微 生物 。灭 菌 （ sterilization） ： 杀 死 物 体 上 所 有 微 生 物 的方 法 。 包 括 杀 灭 细 菌 芽 胞 在 内 的 全 部 病 原 微 生 物和 非 病 原 微 生 物 。抑 菌 （ bacteriostasis） ： 抑 制 体 内 或 体 外 细 菌的 生 长 繁 殖 。防 腐 （ antisepsis） ： 防 止 或 抑 制 体 外 细 菌 生长 繁 殖 的 方 法 。无 菌 （ asepsis） ： 不 存 在 活 的 细 菌 。 消 毒 剂 浓 度 合 适 ， 针 对 特 定 范 围 内 的 细 菌 选 择 相应 的 消 毒 剂 消 毒 剂 在 一 定 周 期 内 轮 换 使 用 ， 以 防 细 菌 耐 药 。我 公 司 常 用 消 毒 剂 为 ： 0.2%新 洁 尔 灭 、 75%酒 精溶 液 紫 外 灯 消 毒 时 记 录 使 用 时 间 ， 紫 外 灯 的 输 出 功 率随 使 用 时 间 增 加 而 降 低 。 国 产 紫 外 灯 的 平 均 寿 命（ 点 到 70%额 定 功 率 的 时 间 ） 一 般 为 2000h， 超过 平 均 寿 命 时 ， 就 达 不 到 预 期 效 果 ， 必 须 更 换 。我 公 司 规 定 紫 外 灯 使 用 时 间 为 1000h。 许 多 细 菌 、 病 毒 和 真 菌 （ 如 酵 母 菌 ） 都 能 产 生 热原 。 热 原 是 微 量 即 可 引 起 恒 温 动 物 体 温 异 常 升 高的 物 质 的 总 称 。 主 要 物 质 为 细 菌 内 毒 素 、 胞 壁 酰二 肽 及 其 他 抗 原 抗 体 复 合 物 、 半 抗 体 原 物 质 和 某些 药 物 （ 类 固 醇 ） 等 。1、 细 菌 内 毒 素 一 般 指 革 兰 阴 性 细 菌 细 胞 壁 的 结 构 成 分 ， 主要 是 脂 多 糖 。 2、 细 菌 内 毒 素 生 物 学 活 性 可 分 为 两 类 ： 一 是 致 病 作 用 ， 一是 保 护 性 反 应 。3、 其 他 理 化 特 性 耐 热 性 ： 120 加 热 4h， 可 破 坏 98%。180 加 热 2h或 250 加 热 30min， 才 可 彻 底 破 坏 。 滤 过性 ： 其 体 积 小 ， 约 在 15nm之 间 ， 故 能 通 过 滤 器 进 入 滤 液中 。 具 有 水 溶 性 及 不 挥 发 性 。 能 被 强 酸 、 强 碱 和 氧 化剂 破 坏 4、 热 源 引 入 的 途 径 从 溶 剂 中 带 进 从 原 料 中 带 进 从 容 器 、 用 具 、 管 道 和 装 置 等 带 进 制 备 过 程 中 的 污 染 从 输 液 器 带 入 5、 消 除 细 菌 内 毒 素 的 方 法 高 温 破 坏 法 ： 可 用 180 干 烤 34h或 250 干 烤30min。 吸 附 法 ： 一 般 选 用 活 性 炭 。 蒸 馏 法 ： 此 法 仅 限 于 制 备 蒸 馏 水 。 化 学 酸 碱 和 氧 化 法 。 离 子 交 换 法 。 反 渗 透 法 。 凝 胶 过 滤 法 。 超 滤 法 药 品 微 生 物 污 染 ： 微 生 物 的 产 生 、 附 着 而给 药 品 及 生 产 环 境 带 来 不 良 影 响 。 药 品 的微 生 物 污 染 也 称 染 菌 。污 染 药 品 的 细 菌 ： 常 见 污 染 药 物 制 剂 的 细菌 是 一 些 生 命 力 较 强 的 细 菌 ， 如 ： 葡 萄 球菌 、 大 肠 杆 菌 、 绿 脓 杆 菌 、 枯 草 杆 菌 及 一些 霉 菌 ， 抵 抗 力 弱 的 细 菌 一 般 不 易 造 成 污染 。药 品 的 微 生 物 污 染 源 ： 空 气 、 水 、 厂 房 与设 备 、 药 品 生 产 用 原 辅 料 、 包 装 材 料 、 昆虫 和 其 它 啮 齿 动 物 、 生 产 操 作 人 员 下 列 术 语 常 用 于 表 示 物 理 或 化 学 方 法 对 微 生 物 的 杀 灭 程 度 消 毒 ： 杀 死 物 体 上 病 源 微 生 物 的 方 法 ,并 不 一 定 能 杀 死 细菌 的 芽 胞 。 消 毒 所 用 的 试 剂 称 为 消 毒 剂 。 灭 菌 ： 杀 灭 物 体 上 所 有 微 生 物 的 方 法 。 灭 菌 比 消 毒 要 求 高 ，包 括 杀 灭 细 菌 芽 孢 在 内 的 全 部 病 原 微 生 物 和 非 病 原 微 生 物 。 抑 菌 ： 抑 制 体 内 或 体 外 细 菌 的 生 长 繁 殖 。 常 用 的 抑 菌 剂 为各 种 抗 生 素 ， 可 抑 制 细 菌 的 繁 殖 。 防 腐 ： 防 止 或 抑 制 体 外 细 菌 生 长 繁 殖 的 方 法 ， 细 菌 一 般 不死 亡 。 同 一 种 化 学 药 品 在 高 浓 度 时 为 消 毒 剂 ， 低 浓 度 时 常为 防 腐 剂 。 无 菌 ： 不 存 在 活 的 细 菌 。 防 止 细 菌 进 入 人 体 或 其 他 物 品 的操 作 技 术 ， 为 无 菌 操 作 。 芽 孢 是 细 菌 的 休 眠 体 ， 在 适 宜 的 条 件 下 可以 重 新 转 变 成 为 营 养 态 细 胞 ； 一 般 的 芽 孢 在 普 通 的 条 件 下 可 保 存 几 年 至几 十 年 的 生 活 力 ； 世 界 上 最 古 老 的 芽 孢 ：2.5亿 年 ；其 对 热 力 、 干 燥 、 辐 射 、 化 学 消 毒 等 理 化因 素 有 强 大 的 抵 抗 力 ；杀 灭 芽 胞 最 可 靠 的 方 法 是 高 压 蒸 汽 灭 菌 。 一 、 物 理 灭 菌 方 法热 力 灭 菌 法辐 射 杀 菌 法滤 过 除 菌 法超 声 波 杀 菌 法干 燥 与 低 温 抑 菌 法 l热 力 灭 菌 法 ： 使 蛋 白 质 、 酶 及 核 酸 永 久 性 破 环 ， 细 胞膜 溶 解 ， 导 致 细 胞 发 生 不 可 逆 转 的 死 亡 。1、 干 热 灭 菌 法 采 用 灼 烧 或 干 热 空 气 灭 菌 ， 使用 方 便 ， 适 用 于 玻 璃 器 皿 和 瓷 器 等 耐 高 温 的 固 体物 的 灭 菌 。2、 湿 热 灭 菌 法 利 用 热 蒸 汽 杀 死 微 生 物 。 高 压 蒸 汽 灭 菌 ： 利 用 高 温 高 压 蒸 汽 进 行 灭 菌 的 方法 ， 蒸 汽 的 穿 透 力 较 热 空 气 强 可 以 杀 死 一 切 微 生物 ， 包 括 细 菌 的 芽 孢 ， 真 菌 的 孢 子 或 休 眠 体 等 耐高 温 的 个 体 。 最 可 靠 最 适 用 最 广 泛 的 灭 菌 方 法 。 l辐 射 灭 菌 法 1、 紫 外 线 ： 波 长 200-300nm的 紫 外 线 具 有 杀 菌 作 用 。 穿 透 物 质 的 能 力 很 差 ， 一 般 要 求 紫 外 灯距 离 照 射 物 不 超 过 1.0米 为 宜 2、 电 离 辐 射 高 速 电 子 、 X射 线 、 射 线 3、 微 波 波 长 1mm1m l滤 过 除 菌 法用 物 理 阻 留 的 方 法 将 液 体 或 空 气 中 的 细 菌 除 去 ,以达 到 除 菌 目 的 。滤 菌 器 含 有 微 细 小 孔 0.22微 米 ,只 允 许 液 体 或 气体 通 过 ,而 大 于 孔 径 的 细 菌 等 颗 粒 不 能 通 过 。适 用 范 围 ： 血 清 、 毒 素 、 抗 生 素 以 及 空 气 等 的 除菌 。 二 、 化 学 灭 菌 方 法许 多 化 学 药 物 能 影 响 微 生 物 的 化 学 组 成 、物 理 结 构 和 生 理 活 性 ， 从 而 发 挥 防 腐 、 消毒 及 灭 菌 的 作 用 。洁 净 室 (区 )应 定 期 消 毒 ， 使 用 的 消 毒 剂 不 得对 设 备 、 物 料 和 成 品 产 生 污 染 。 消 毒 剂 品种 应 定 期 更 换 ， 防 止 产 生 耐 药 菌 株 。 1.了 解 污 染 源 对 药 品 生 产 全 过 程 可 能 造 成 污 染 的 来 源 ， 进 行 深 入 的 了 解研 究 ， 从 而 设 计 一 个 完 好 的 生 产 工 艺 ， 制 定 规 章 制 度 和 标准 操 作 规 程 ， 从 各 个 环 节 采 取 消 毒 和 卫 生 措 施 来 防 止 微 生物 污 染 ， 使 产 品 达 到 所 要 求 的 卫 生 学 质 量 ， 包 括 稳 定 性 及各 种 微 生 物 参 数 。2.进 行 微 生 物 监 测 在 药 品 生 产 过 程 中 ， 应 按 GMP要 求 不 断 进 行 各 项 微 生 物 卫 生学 监 测 。 例 如 ： 对 洁 净 室 空 气 中 的 浮 游 菌 、 沉 降 菌 的 监 测 ；对 无 菌 设 备 清 洁 灭 菌 的 验 证 ； 对 非 无 菌 药 品 进 行 细 菌 和 活菌 数 测 定 和 病 原 菌 的 限 制 性 检 查 等 。 3.定 期 进 行 环 境 卫 生 清 洁 严 格 按 照 “ 管 理 规 程 （ 生 ） 管 -3生 产 科 环 境 卫 生 管 理 的 有 关 规 定 ” 对 生 产 科 各个 区 域 进 行 清 洁 卫 生 ， 确 保 生 产 区 域 符 合 GMP卫 生 管 理 要 求 。4.做 好 生 产 人 员 卫 生 管 理 新 进 人 员 的 健 康 检 查 ： 药 品 生 产 企 业 在 招 收 新 职 工 时 ， 一 定 要 对 新 职工 进 行 全 面 的 健 康 检 查 ， 要 确 保 新 员 工 不 患 有 急 性 或 慢 性 传 染 病 。 建 立 生 产 人 员 健 康 档 案 ： 药 品 生 产 企 业 应 对 职 工 建 立 个 人 健 康 档 案 ，直 接 接 触 药 品 的 生 产 人 员 至 少 每 年 体 检 一 次 ； 患 有 传 染 病 或 体 表 有 伤口 者 不 得 进 入 洁 净 室 。 培 养 药 品 生 产 人 员 良 好 的 个 人 卫 生 习 惯 洁 净 区 生 产 人 员 要 求 ： 进 入 洁 净 室 必 须 更 换 洁 净 服 ； 并 按 照 规 定 程 序进 出 洁 净 室 ； 在 洁 净 区 生 产 操 作 动 作 要 准 、 稳 、 轻 、 少 ， 减 少 不 必 要的 谈 话 和 活 动 ； 生 产 人 员 应 定 期 进 行 微 生 物 基 础 知 识 培 训 和 卫 生 教 育 。 谢 谢 大 家 ！