蛋白质凝胶渗透层析

美国红鱼免疫球蛋白的分离纯化美国红鱼免疫球蛋白的分离纯化 蛋白质的凝胶层析分离纯化蛋白质的凝胶层析分离纯化 尹建伟2013282030153分离体系以灭活以灭活的灿烂弧菌的灿烂弧菌接种于美国接种于美国红鱼后，喂养两周后尾红鱼后，喂养两周后尾静脉采静脉采血血，高速离心得，高速离心得上层血清上层血清分离条件/过程血清体系血清体系缓慢加入硫酸铵至缓慢加入硫酸铵至50%体积比体积比10000r/min离心离心10min弃上清，得到弃上清，得到沉淀沉淀沉淀用沉淀用pH=7.4的的PBS溶解，透析溶解，透析48 h粗提的血清粗提的血清蛋白液蛋白液葡聚糖凝胶葡聚糖凝胶SephadexG-200凝胶柱层析凝胶柱层析SephadexG-200凝胶凝胶按说明方法装柱按说明方法装柱处理后的凝处理后的凝胶柱胶柱处理后的凝处理后的凝胶柱胶柱0.02 M，pH 7.4的的PBS平衡上样平衡上样流速流速0.5mL/min，收集每管收集每管10 mL同时测同时测OD280值值并绘制曲线并绘制曲线收集含抗体收集含抗体的洗脱液的洗脱液分离效果表征手段：表征手段：1 1、SephadexG-200SephadexG-200凝胶凝胶过滤层析过滤层析纯化美国纯化美国红红鱼血清鱼血清IgMIgM（OD280OD280）2 2、美国红鱼血清免疫球蛋白、美国红鱼血清免疫球蛋白电泳电泳图谱图谱结论：经过经过SephadexG-200SephadexG-200凝胶柱层析方凝胶柱层析方法分离，获得法分离，获得纯度较高纯度较高的免疫球蛋的免疫球蛋白，经白，经B B-巯基乙醇处理后解离形成巯基乙醇处理后解离形成重链和轻链两个亚单位，分子量分重链和轻链两个亚单位，分子量分别为别为6969.2 kDa2 kDa，2929.5 kDa5 kDa，表明美，表明美国红鱼血清国红鱼血清IgMIgM的分子量与硬骨鱼的分子量与硬骨鱼IgMIgM的分子量范围的分子量范围(H(H链链6060-81kDa81kDa,L L链链2020-30kDa)30kDa)是一致是一致的的。