血糖(Glu)的测定—干扰预试验及实验课件

干扰试验干扰试验-血糖（血糖（Glu）的测定）的测定（葡萄糖氧化酶法）（葡萄糖氧化酶法）一、实验目的v1.熟悉干扰试验的实验原理。v2.熟悉掌握该实验的操作过程，并能对实验数据进行处理分析。干扰试验干扰试验 该实验是分析误差类型的实验。干扰试验是测定实验方法特异性差和干扰二者引起的误差。在具体方法学评价中，首先要确定被试物质是否引起误差；若能引起误差，再进一步探讨其误差的来源是因为方法的特异性还是干扰，若加入的物质本身和试剂反应并产生读数，这是特异性差；若加入物质本身不与分析试剂反应，但它改变了分析物和分析试剂间的反应，这就是干扰。二、实验原理v干扰试验用来衡分析误差类型的实验，用于测定某物质加到样品中产生的系统误差。在加入一定浓度干扰物的条件下，形成恒定系统误差，恒定系统误差，误差的实际大小随干扰物的浓度而变化。干扰物浓度不同，误差的大小也不同。干扰物浓度不同，误差的大小也不同。v采用维生素采用维生素C C作为作为GOD-POPGOD-POP法测定血糖的干扰物质，法测定血糖的干扰物质，当干扰物的浓度达到一定量时，将对相应的实验产生干扰。实验原理 选用维生素C做GOD-POD法测血糖的干扰试验，维生素C可和GOD反应生成的H2O2发生反应，使部分H2O2不能参与第二步POD催化的偶联反应，从而降低显色强度，产生负的测定误差。器材与试剂v1、主要器具、主要器具v微量移液微量移液v紫外分光光度计紫外分光光度计v水浴箱水浴箱主要试剂1血清标本 含血糖6.7mmol/L的血清2葡萄糖标准液（5.55mol/L）3GOD-POD法测定葡萄糖试剂盒4.1g/L、2g/L、3g/L维生素C溶液三、实验步骤v1.样品的制备v每五人一组，准备一套干扰血清样品。基础样品：血清0.9ml+蒸馏水0.1ml。干扰样品：血清0.9ml+1g/L维生素C溶液0.1ml 干扰样品：血清0.9ml+2g/L维生素C溶液0.1ml 干扰样品III：血清0.9ml+3g/L维生素C溶0.1ml 2、按下表操作 试剂 B S 基础管 U2 U3 U4 DDW 1oul5.55mol/l糖标 10ul基础样品 10ul干扰样品1 10ul干扰样品2 10ul干扰样品3 10ul工作试剂 1.5ml 1.5ml 1.5ml 1.5ml 1.5ml 1.5ml 各管充分混匀置37水浴10分钟后室温冷却。在500nm处比色四、计算与数据处理四、计算与数据处理计算公式：样品血糖浓度（mmol/L）=Cs 其中：Cs=5.55 mmol/L v干扰物加入值=干扰物溶液浓度 干扰值（mmol/L）=干扰样品测定值-基础样品测定值 干扰率（%）=干扰值/基础值 100 干扰试验的数据处理：样品（ml）GLU测得值(mmol/L)干扰物值加入量(mmol/L)干扰值(mmol/L)干扰率(%)基础样品 干扰样品1 干扰样品2干扰样品3 五、结果判断 干扰值即偏差，对于血糖测定来说，当干干扰值即偏差，对于血糖测定来说，当干扰物引起的偏差在总允许误差的扰物引起的偏差在总允许误差的1/41/4范围内，范围内，则不会影响测定结果的临床应用价值，可以则不会影响测定结果的临床应用价值，可以近似认为当干扰物浓度低于该浓度时不会对近似认为当干扰物浓度低于该浓度时不会对血糖测定产生影响。血糖测定产生影响。六、注意事项1干扰试验的对象有厂商研制的新产品；新建立的方法；新引进的方法或试剂。2应做的主要干扰物：病人标本中常出现的黄疸、脂血和溶血；某些药物如维生素C等；实验常用的抗凝剂，防腐剂和稳定剂。3可疑干扰物浓度 加入可疑干扰物的浓度应明显高于通常所见浓度的上限，有可能时应达到病理标本的最高值。4无论是方法特异性差或是受干扰，都影响到测定结果的正确性，影响的程度与与非分析物的量有关，所以产生的误差都是恒定系统误差，常以偏差Bias作为统计量。5由某些物质引起测定结果的偏差，足以影响临床解释者谓之干扰，但各项测定的临床要求至今仍未确定，建议将该分析方法批内测定值1.96s作为控制限度。评价 干扰试验的方法主要有“配对差异”试验及用病人标本作偏差分析。所谓“配对差异”试验，即将不同浓度的干扰物加入到实验标本中，然后分别测定加与不加干扰物的标本，比较二者有无偏差，并了解干扰物浓度与偏差的关系。所谓用病人标本作偏差分析即选择病人标本，如肝脏、肾脏或心脏疾病患者，用服用了某种可能有干扰的药物的病人标本，以及含有高胆红素，高血脂和血红蛋白的标本，用候选方法和参考方法同时测定，将两方法的测定结果进行比较，以确定某物质对候选方法是否有干扰及干扰程度。本次实验所选用的方法为“配对差异”试验。评价 这两种干扰试验各有优缺点，第一种方法的不足之处是实验标本的介质可能与病理标本的介质不尽致，病理标本中的干扰物可能不是原来的药物，加入的干扰物可能与病理标本中的干扰物不完全相同。第二种方法的不足之处是病人通常用多种药物，难以确定干扰物；不是每种测定项目均有参考方法，而且有的参考方法难以在临床实验室中开展；参考方法亦可能受某些物质的干扰。两种方法同时使用，会起互补作用。