鼠伤寒沙门氏菌回复突变试验ppt课件

Ames试 验 ， 即 污 染 物 致 突 变 性 检 测 ，也 称 为 鼠 伤 寒 沙 门 氏 菌 回 复 突 变 试 验 污 染 物 对 人 体 的 潜 在 危 害 ， 引 起 人 们的 普 遍 关 注 。 世 界 上 已 发 展 了 百 余 种短 期 快 速 测 试 法 ， 检 测 污 染 物 的 遗 传毒 性 效 应 。 B.N.Ames等 经 十 余 年 努 力 ，于 1975年 建 立 并 不 断 发 展 完 善 的 沙 门氏 菌 回 复 突 变 试 验 （ 亦 称 Ames试 验 ）已 被 世 界 各 国 广 为 采 用 。 原理：检测受试物诱发鼠伤寒沙门氏菌组氨酸营养缺陷型突变株(his-)回复突变成野生型(his+)的能力。即组氨酸突变菌(his-) 在不含组氨酸的最低营养平皿上不能生长；回复突变成野生型(his+)，可在不含组氨酸的最低营养平皿上生长。 是应用最广泛的检测基因突变的体外试验。 Ames试 验 u标 准 试 验 菌 株 (配 套 菌 株 )： 有 四 种 TA98、 TA97 ： 检 测 移 码 突 变 TA100： 检 测 碱 基 置 换 突 变 TA102： 对 醛 、 过 氧 化 物 及 DNA交 联 剂 较 敏 感 u这 四 个 试 验 菌 株 除 了 含 有 his-突 变 ， 还 有 一 些 附 加 突变 ， 以 提 高 敏 感 性 Ames试 验 不 加 S9 混 合 液 得 到 阳 性 结 果 ， 说 明 受 试 物 是直 接 致 突 变 物 加 S9 混 合 液 才 得 到 阳 性 结 果 ， 说 明 该 受 试 物是 间 接 致 突 变 物 Ames试 验 常规方法： 斑点试验 平板掺入试验 斑点试验：1、吸取测试菌增菌培养后的菌液0.1ml，注入融化并保温45左右的上层软琼脂中，需S9活化的再加0.3ml0.4mlS9混合液，立即混匀，倾于底平板上，铺平冷凝。2、用灭菌尖头镊夹灭菌圆滤纸片边缘，纸片浸湿受试物溶液，或直接取固态受试物，贴放于上层培养基的表面。同时做溶剂对照和阳性对照，分别贴放于平板上相应位置。3、平皿倒置于37温箱培养48h。在纸片外围长出密集菌落圈，为阳性；菌落散布，密度与自发回变相似，为阴性。 平板掺入试验：1、将一定量样液和0.1ml测试菌液均加入上层软琼脂中，需代谢活化的再加0.3ml0.4ml S9混合液，混匀后迅速倾于底平板上铺平冷凝。2、同时做阴性和阳性对照，每种处理做3个平行。试样通常设4个5个剂量。选择剂量范围开始应大些，有阳性或可疑阳性结果时，再在较窄的剂量范围内确定剂量反应关系。培养同上。3、同一剂量各皿回变菌落均数与各阴性对照皿自发回变菌落均数之比，为致变比（MR）。MR值2，且有剂量-反应关系，背景正常，则判为致突变阳性。 鼠 伤 寒 沙 门 氏 菌野 生 型 （ his ） 鼠 伤 寒 沙 门 氏 菌 突 变 型 （ his ） 正 向 突 变回 复 突 变受 试 物试 验 菌 种(his-)S9 试 验 菌 种(his-)S9 Ames试 验 原 理 结 果 判 断 : 只 要 在 一 种 试 验 菌 株 得 到 阳 性 结 果 ， 即 认 为受 试 物 是 致 突 变 物 仅 当 四 种 试 验 菌 株 均 得 到 阴 性 结 果 ， 才 认 为受 试 物 是 非 致 突 变 物 Ames试 验 应用1斑点试验只局限于能在琼脂上扩散的化学物质，大多数多环芳烃和难溶于水的化学物质均不适宜用此法。此法敏感性较差，主要是一种定性试验，适用于快速筛选大量受试化合物。2平板掺入试验可定量测试样品致突变性的强弱。此法较斑点试验敏感，获阳性结果所需的剂量较低。点试获阳性结果的浓度用于掺入试验（每皿0.1ml），往往出现抑（杀）菌作用。3致变作用迟缓或有抑菌作用的试样，培养时间延长至72h。 应用4挥发性的液体和气体试样，可用干燥器内试验法进行测试。5目前，Ames试验作为检测环境诱变剂的一组试验中的首选试验，广泛应用于致突变化学物的初筛。但是，与今天快信息、高效率的社会要求相比，该试验程序还嫌繁琐，方法不够简便，有待于创建新的更为快速灵敏、简单易行的环境诱变剂短期生物测试法。