艾滋病检测原理和技术规范廖华乐

艾 滋 病 检 测 原 理 和 技 术 规 范2021-4-25 1佛 山 市 艾 滋 病 确 证 实 验 室 廖 华 乐 2008年 佛 山 市 艾 滋 病 检 测 技 术 培 训 班 艾 滋 病 检 测 原 理 和 技 术 规 范2021-4-25 2 艾 滋 病 检 测 原 理 和 技 术 规 范2021-4-25 3 Human immunodeficiency virus HIV 艾 滋 病 检 测 原 理 和 技 术 规 范2021-4-25 4 Cross-species Transmission of SIVcpzSIVcpzHuman in AfricaChimpanzee 黑 猩 猩 SIVcpzSIVcpz 重 组 ？ 重 组 ？ 重 组 ？猴 免 疫 缺 陷 病 毒 M组HIV-1 N组HIV-1 O组HIV-1 艾 滋 病 检 测 原 理 和 技 术 规 范2021-4-25 5 Cross-species Transmission of SIVsmSIVsm HIV-2Human in West Africa猴 免 疫 缺 陷 病 毒 灰 身 白 脸 猴Sooty Mangabeys 重 组 ？ 艾 滋 病 检 测 原 理 和 技 术 规 范2021-4-25 6 Structure of HIV Virion Particle p24 Core Ag p17 Matrix p7-gag p9-gag p31 integrase protease Structure of HIV Virion Particle Organization of the HIV-1 Virion 艾 滋 病 检 测 原 理 和 技 术 规 范2021-4-25 7 艾 滋 病 病 毒 感 染 后 ， 可 严 重 破 坏 人 体 的 免 疫 系 统 ， 使 人 体 丧失 抵 御 各 种 疾 病 的 能 力 ， 有 利 于 各 种 病 原 体 的 侵 入 ， 从 而 导 致 各种 严 重 的 、 难 以 治 愈 的 机 会 性 感 染 或 肿 瘤 ， 最 终 导 致 死 亡 ， 病 死率 可 达 100 。 艾 滋 病 检 测 原 理 和 技 术 规 范2021-4-25 8 艾 滋 病 检 测 原 理 和 技 术 规 范2021-4-25 9 非 洲 中 部 和 东 部美 国 、 欧 洲 、 南 美 洲 、 非 洲 和 亚 洲南 美 洲 、 印 度 、 赞 比 亚 、 中 国非 洲 中 部 和 东 部泰 国 、 中 非 、 印 度巴 西 、 罗 马 尼 亚 、 喀 麦 隆加 蓬 、 苏 联 、 尼 日 利 亚 、 乌 干 达 、 塞 内 加 尔 、 赞 比 亚喀 麦 隆 、 扎 伊 尔 、 中 非塞 浦 路 斯扎 伊 尔 喀 麦 隆 、 加 蓬 HIV型 别 和 亚 型 的分 类 进 化 与 地 区 分 布 ： 西 非 、 印 度 艾 滋 病 检 测 原 理 和 技 术 规 范2021-4-25 10 基 因 亚 型 与 感 染 途 径 的 关 系 艾 滋 病 检 测 原 理 和 技 术 规 范 BE AA B B EEC CBB BBB B B BBBB BB E B B BC BB EEELasa Ha ErbinShen YangChang ChunHuhehaote BeijingTian JingXi Ning Shi JiazhuangTai YuanYin ChuanLan Zhou Xi an He FeiZheng Zhou Ji Nan B Nan Jing Shang HaiNan ChangWu Han Hang ZhouChang Sha Fu Zhou Guang ZhouNan NingGui Yang Hai KouKun Ming Cheng Du Tai BeiIndia Myanmar Thailand LaosViet Nam Urumqi /C B E CB C C/ B CC/ B C/ B A B C HIV Molecular Epidemiology Research in China Supported by MOH, Organized by NARL/NCAIDS, Participated by all provincial HIV labs 7 HIV-1 subtypes with 3 major ones (B,C and E ) were found origin and transmission of the HIV strains were defined providing strong support to Epidemiology, diagnostic reagents and vaccine development 艾 滋 病 检 测 原 理 和 技 术 规 范2021-4-25 12 艾 滋 病 从 感 染 到 发 病 的 一 般 过 程 艾 滋 病 检 测 原 理 和 技 术 规 范2021-4-25 13 HIV病 毒 载 量 和 AIDS进 展 的 关 系 Adapted from D. Ho 艾 滋 病 检 测 原 理 和 技 术 规 范2021-4-25 14 艾 滋 病 检 测 原 理 和 技 术 规 范2021-4-25 15 抗 体 检 测 抗 体 检 测 CD4检 测CD4检 测 各 种 检 测 技 术 为 艾 滋 病 防 治 工 作提 供 广 泛 的 技 术 支 持 平 台 艾 滋 病 检 测 原 理 和 技 术 规 范2021-4-25 16 艾 滋 病 实 验 诊 断 方 法 艾 滋 病 检 测 原 理 和 技 术 规 范2021-4-25 17 各 种 诊 断 试 剂 特 性 艾 滋 病 检 测 原 理 和 技 术 规 范2021-4-25 18硒 标 法 金 标 法HIV抗 体 筛 查 试 验 艾 滋 病 检 测 原 理 和 技 术 规 范2021-4-25 19 明 胶 颗 粒 凝 集 试 验（ Particle agglutination test， PA） 艾 滋 病 检 测 原 理 和 技 术 规 范2021-4-25 20PA的 操 作 和 结 果 判 断 艾 滋 病 检 测 原 理 和 技 术 规 范2021-4-25 215 450/630nm下 测 定 OD值混 匀 ， 加 盖 ， 37 温 育 洗 板3 加 入 底 物第 二 次 特 异 性 结 合 4 加 入 终 止 液 1 加 入 样 品 洗 板2 加 入 酶 标 记 物 加 盖 ， 37 温 育 加 盖 ， 37 温 育第 一 次 特 异 性 结 合 酶 联 免 疫 分 析 ELISA（ 双 抗 原 夹 心 、 两 步 法 ） 艾 滋 病 检 测 原 理 和 技 术 规 范2021-4-25 22 快 速 法 可 否 单 独 使 用 ？n 全 国 艾 滋 病 检 测 技 术 规 范 （ 2004版 ） ： 将 PA、 dot-EIA、 胶 体 硒 法 纳 入 快 速 检 测 规 范 方 法 ， 因 此 可 以 使 用 。n 有 研 究 指 出 ：n 任 何 一 种 快 速 试 剂 可 以 筛 查 出 99%以 上 的 阴 性 样 本 ；n 两 种 快 速 试 剂 均 为 阳 性 时 ， 可 以 筛 查 出 98%以 上 的 阳 性样 本 ；n 两 种 快 速 试 剂 结 果 不 一 致 时 ， 可 用 ELISA复 检 ；n 单 独 使 用 或 两 种 同 时 使 用 时 ， 特 异 性 差 别 无 显 著 意 义 。 艾 滋 病 检 测 原 理 和 技 术 规 范2021-4-25 23 HIV抗 体 确 证 试 验Western Blot 免 疫 印 迹 法 艾 滋 病 检 测 原 理 和 技 术 规 范2021-4-25 24 env 合 成 外 膜 蛋 白gag 合 成 核 蛋 白pol 合 成 逆 转 录 酶HIV的 主 要 基 因 及 其 产 物 艾 滋 病 检 测 原 理 和 技 术 规 范2021-4-25 25ss-RNA 艾 滋 病 检 测 原 理 和 技 术 规 范2021-4-25 26全 自 动 免 疫 印 迹 仪 艾 滋 病 检 测 原 理 和 技 术 规 范2021-4-25 27 HIV抗 体 阳 性 诊 断 标 准 ： 2条 env （ gp160/gp120 + gp41） 1条 env + p24p55p66p31p51gp120gp160gp41 p17p24膜 蛋 白（ env）核 蛋 白（ gag） 逆 转 录 酶（ pol） 艾 滋 病 检 测 原 理 和 技 术 规 范2021-4-25 28 艾 滋 病 检 测 原 理 和 技 术 规 范2021-4-25 29 筛 查 试 验 ：复 检 1（ 试 剂 A） ：复 检 2（ 试 剂 B） ：确 证 试 验 ：筛 查 试 验 和 确 证 试 验 的 作 用 艾 滋 病 检 测 原 理 和 技 术 规 范2021-4-25 30 艾 滋 病 检 测 原 理 和 技 术 规 范2021-4-25 31 （ 美 国 CDC,1993, 抗 -HIV阳 性 及 其 中 一 种 疾 病 即 可 诊 断 ） 艾 滋 病 检 测 原 理 和 技 术 规 范2021-4-25 32 HIV ！HIV ？HIV感 染 母 亲 所 生 婴 儿 ：分 别 于 12个 月 、 18个 月 追 踪 检 测阴 性 者 为 阴 性 ，18个 月 仍 阳 性 者 为 阳 性 。 艾 滋 病 检 测 原 理 和 技 术 规 范2021-4-25 33 艾 滋 病 检 测 原 理 和 技 术 规 范2021-4-25 34 主 要 内 容 ： 艾 滋 病 检 测 原 理 和 技 术 规 范2021-4-25 35 艾 滋 病 检 测 原 理 和 技 术 规 范2021-4-25 36 HIV抗 体 检 测 结 果 处 理 规 范 艾 滋 病 检 测 原 理 和 技 术 规 范2021-4-25 37 艾 滋 病 样 本 确 证 、 报 告 流 程 ： 艾 滋 病 检 测 原 理 和 技 术 规 范2021-4-25 38 受 理送 检 取 报 告 HIV样 本 CD4样 本每 周 一 五 ：上 午 8:30 11:45下 午 2:00 5:15 每 周 一 ：上 午 8:30 11:45下 午 2:00 5:15 接 收 样 本 （ 及 相 关 资 料 ） 预 约 取 报 告 时 间 给 回 样 本 受 理 单 （ 客 户 联 ） HIV检 验 报 告 CD4检 验 报 告 每 周 四 ： 下 午 2:00后 每 周 四 ： 下 午 2:00后凭 样 本 受 理 单 （ 客 户 联 ） 领 取 检 验 报 告 HIV样 本 HIV送 检 单 CD4样 本 CD4送 检 单 传 染 病 报 告 卡（ 二 八 年 七 月 一 日 起 实 施 ） 艾 滋 病 样 本 送 检 、 受 理 、 检 验 流 程 ： 艾 滋 病 检 测 原 理 和 技 术 规 范2021-4-25 39认 真 填 写 各 类 表 格 （ 最 好 能 打 印 ） ， 及 时 上 报 。 艾 滋 病 检 测 原 理 和 技 术 规 范2021-4-25 40 各 筛 查 实 验 室 每 月 10日 前 上 报 上 月 检 测 数 据 ： 艾 滋 病 检 测 原 理 和 技 术 规 范2021-4-25 41 艾 滋 病 检 测 原 理 和 技 术 规 范2021-4-25 42 艾 滋 病 检 测 原 理 和 技 术 规 范2021-4-25 43 对 HIV实 验 室 的 10项 基 本 要 求 艾 滋 病 检 测 原 理 和 技 术 规 范2021-4-25 44 艾 滋 病 检 测 原 理 和 技 术 规 范2021-4-25 45 使 用 诊 断 试 剂 注 意 事 项 艾 滋 病 检 测 原 理 和 技 术 规 范2021-4-25 46 实 验 操 作 注 意 事 项 艾 滋 病 检 测 原 理 和 技 术 规 范2021-4-25 47 室 内 质 控 注 意 事 项 艾 滋 病 检 测 原 理 和 技 术 规 范2021-4-25 48 全 国 HIV抗 体 ： EIA、 WBHIV抗 体 ： 快 速 检 测WB条 带 判 读CD4+T淋 巴 细 胞全 省 HIV抗 体 ： EIA职 能 工 作 考 评全 市 HIV抗 体 ： EIA职 能 工 作 考 评 艾 滋 病 检 测 网 络 实 验 室 质 量 考 评 安 排 艾 滋 病 检 测 原 理 和 技 术 规 范2021-4-25 49 如 果 你 做 到 这 些 你 就 拥 有 一 个 合 格 的 艾 滋 病 实 验 室20081989