抗狂犬病血清生产简介

抗狂犬病血清 生产简介 2006年 5月 抗狂犬病血清 系由狂犬病固定毒免疫马的血浆，经精制、 胃酶消化、纯化制得的液体或冻干免疫球蛋白 制剂。 用于狂犬病的预防。 一、免疫血浆 为获抗毒效价高的免疫血浆 ，马匹、免 疫原及免疫方法是重要的条件。 （一） 马匹的选择 制造抗毒素所用马匹应健壮 (过幼者免疫器官 发育不健全，过老者免疫机能衰退，最好是 4 8 岁 )。 无传染病 (包括马传染性贫血、马鼻疽、布氏 杆菌病、马副伤寒性流产及其他传染病 )和恶性肿 瘤等。 由液体石蜡与羊毛脂配成 “ 油包水 ” 的 不完全福氏佐剂是马匹免疫最常用、效能 最好的佐剂。 （ 二 ） 免疫原长期反复地给马进行免 疫，在马体内将产生高效价的抗血清。 (三 )免疫方法 基础免疫：从马体初次接受免疫原刺激， 到产生少量特异性抗体的阶段即第一次免 疫应答阶段。 超免疫：基础免疫以后的强化免疫。 有了第一次免疫应答后，再次接触同一免疫原 就会迅速出现第二次免疫应答。抗血清效价将会 急剧上升。 对超免成功的马匹予以采血并开始 再次免疫注射，如此反复的每一循环通称 “ 1 程 ” 、 “ 2程 ” 超免疫。 (四 )采血及血浆的分离 免疫血清效价不低于 100IU/ml时即可采血。 ( 2005年版 药典 三部 ) 采血有 “ 部分采血 ” 与 “ 全采血 ” 两种方式。 前者指每程超免疫后由颈静脉采血 l 3次，每次 5000m1左右；后者指由颈动脉采血直至马匹死 亡。 二、抗血清的精制 抗血清制造方法的改进与制品质量 的提高大体经历了三个历史阶段。 最初的阶段是 “ 原制血清 ” 即不做加工处理， 仅加防腐剂、除菌过滤。 其次是应用适宜的理化方法 (主要是硫酸铵盐析法 ) 去除血浆中的大部分非特异性蛋白 (包括白蛋白、纤维 蛋白等 )，并使抗体蛋白得到一定的浓缩，单位体积所 含抗毒素单位数量显著提高，称为 “ 浓制血清 ” 。 蛋白酶精制法的研究和创建，使得抗血清制造方 法跨入了一个新的历史阶段。 纯净度：含杂蛋白的程度。 提纯系数：通称 R值，即精制品每 g蛋白 所含单位数与原血浆每 g蛋白所含单位数的 比值。 收获率：精制品总单位数与原血浆总单 位数的比值 (%)。 前两指标经常与后者互相矛盾，在工艺 上予以适度调节而兼顾。 衡量精制效果优劣的主要指标 质量的要求及检定 抗毒素除做预防用外还常被用于治疗， 而且治疗剂量往往很大。 制造工艺比较复 杂，生产周期较长，容易被污染。 1安全性 主要指制品污染的杂质引起的副作用。 例如细菌、热原质、类 A血型物质以及其 它毒性物质等， 2005年版 药典 三部 中 都有具体的检定方法并规定有最低要求标 准 (参阅 2005年版 药典 三部 )。 2纯度及比活性 由于马匹免疫方法及抗血清精制方法的 改进，抗血清的纯度 (免疫球蛋白的纯一性 ) 与比活性 (每 g蛋白所含单位数 )均有显著的 提高，这些是代表精制抗毒素质量的主要 指标， 2005年版 药典 三部中均有检查 方法及要求标准的规定。 精制工艺改进 抗血清 制造工艺的改进很大的提高了临 床应用于治病防病的免疫血清 制品 的质量。 蛋白酶精制法 马血清抗体的分子结构与人的 IgG基本相同，分子量 184KD，大小 4 27.7nm。 马血清抗体在马匹免疫初期阶段从属于免疫血清的 球蛋白。 随着免疫程度的逐步加深，抗血清的分布逐渐向 球 蛋白转移，从属于 与 两球蛋白之间新出现的免疫球 蛋白，被称为 T球蛋白或 2球蛋白 (此时原 球蛋白称 作 1球蛋白 )。 抗毒免疫马血清经硫酸铵盐析。 30一 50 饱和沉淀物几乎全是 2 (T)球蛋白部分。此部 分经胃酶处理后，又在 2与 之间出现一个 新峰。进一步用硫酸铵盐析浓缩，此新峰乃被 提纯成精制抗血清。 经胃酶处理， IgG分子在重链间的二硫键的 c 端侧被切断。切下的 Fc片段无抗毒活性，不耐 热，经继续消化与热变性而被除掉。保留下来的 F(ab)2片段具有抗毒活性，即前述的所谓改性球 蛋白抗毒素，分子量 98KD，分子大小 4.1 13.6nm，电泳位置在 2与 两球蛋白之间。 层析技术 抗血清纯度提高 从 50%-60% 提高到 80%以上。 比活性 从 10000 IU/g以上。 抗狂犬病血清工艺流程 免疫血浆 马匹检疫、免疫、基免、超免、 采血、血浆分离 血浆精制 去除杂蛋白 胃酶消化 切去 Fc端 第一次沉淀 硫酸铵沉淀、 去除 Fc端 及加热处理 第二次沉淀 硫酸铵沉淀 明矾沉淀 纯化 浓缩 最后处理 原液检定 半成品配制及除菌 半成品检定 分装 成品检定 入库