资源描述
仪器名称：核酸蛋白测定仪运用方向：快速、牢靠地检测双链/单链DNA，RNA，寡核苷酸，蛋白质和细菌细胞密度/混浊度型号：Biophotometer生产厂家：Eppendorf添置时间：2006主要性能：氙灯光源,寿命长达10年,无需预热可检测吸光度范围：0.000-3.000A波长范围230nm,260nm,280nm,320nm,562nm,595nm1%光度计精确度:1A的误差0.5%光度计精确度：1A约为可测量核酸，蛋白质的紫外测定，lowry,bradford,BAC比色法测定以及OD600 储存和查看最新100个检测结果自我检测功能数据可导入到PC 机自动计算浓度和稀释度，可转换浓度单位运用说明：操作说明：打算：起先测定前只需开启仪器背后的电源开关即可起先测定，无需预热。一、核酸浓度测定（包括dsDNA、ssDNA、RNA、Oligo）1. 例如待测定样品为dsDNA（eg：PCR产物），按下键“7 / dsDNA”（若待测样品为ssDNA，eg：反转录合成的第一链cDNA产物，则相应按下键“8 / ssDNA”；若待测样品为RNA，则按下键“9 / RNA”；若待测样品为Oligo（寡聚核苷酸），eg：PCR引物，则相应按下键“6 / Oligo”。）2. 将空白比照置入样品孔。留意：空白比照是空白液，并非全部状况都是水。（例如用Tris溶液溶解DNA制品，则要用Tris液做空白比照。）3. 按下键“Blank”；4. 仪器记录空白比照，设置为0.000A；5. 将第一个样品置入样品孔；6. 按下“Sample”；7. 仪器显示第一个样品的吸光度值和浓度值，以及其他相关参考比值；8. 干脆放入其次个样品；9. 按下“Sample”；10. 仪器显示其次个样品的吸光度值和浓度值，以及其他相关参考比值；11. 依次测定，每个样品的测定值将自动存储在机器中，查看测定结果的方法如下：（1）按下键“./ Function”（2）选择“DISPLAY-RESULT”,按Enter键，查看每个样品的测定值记录（本机可存储100个样品的测定值）。设定样品的稀释度（1）按下键“Dilution”；（2）输入样品体积和稀释液体积，按Enter键确认。二、蛋白质浓度的干脆测定（280nm测定）1. 按下键“4 / Protein”；2. 将空白比照置入样品孔；3. 按下键“Blank”；4. 仪器记录空白比照，设置为0.000A；5. 将第一个样品置入样品孔；6. 按下“Sample”；7. 仪器显示第一个样品的吸光度值和浓度值，以及其他相关参考比值；8. 依次测定，每个样品的测定值将自动存储在机器中，可查看测定结果。三、蛋白质浓度显色法的间接测定（Bradford，Lowry， BCA）1. 按下键“1 / Bradbord”or “2 / Lowry”or“BCA”选择蛋白质显色反应的方法；注：Bradford键按两次，每次显示不同的测定范围。2. 设置标准曲线的标准样品数量、测定次数和浓度范围。按下键“Parameter”用上下键 进行选择和参数调整。3. 将空白比照置入样品孔；4. 按下键“Blank”；5. 仪器记录空白比照，设置为0.000A；6. 将第一个标准品或样品（如需沿用已存储的标准曲线，可干脆测样品）置入样品孔；7. 按下“Sample”或“Standard”；8. 依次测定标准品或样品，每个样品的测定值将自动存储在机器中，查看测定结果。四、OD600 细菌生长密度测定1. 按下键“5 /OD 600”；2. 将空白比照置入样品孔；3. 按下键“Blank”；4. 仪器记录空白比照，设置为0.000A；5. 将第一个样品置入样品孔；6. 按下“Sample”；7. 仪器显示第一个样品的吸光度值和浓度值；8. 依次测定，每个样品的测定值将自动存储在机器中，查看测定结果。留意事项：1 为了尽量削减颗粒对测试结果的影响，要求核酸吸光值至少大于0.1A，吸光值最好在0.11.5A。在此范围内颗粒的干扰相对较小，结果稳定。样品的浓度不能过低或者过高。2 混合要充分，否则吸光值太低，甚至出现负值；3 混合液中不能有气泡，空白液无悬浮物，否则读数漂移猛烈；4 必需运用相同的比色杯测试空白液和样品，否则测定浓度结果差异太大；5 换算系数和样品浓度单位选择要一样；6 不能采纳窗口磨损的比色杯；7 样品的体积必需达到比色杯要求的最小体积（50ul）；8 通常浓度的样品可以用10 mm光程长度进行检测。对于高浓度的样品，只需将比色皿旋转90，运用稍短的2 mm光径进行检测。重要的比值表示样品的纯度：1 A 260 / A 280，用于评估样品的纯度。纯净的样品，比值大于1.8（DNA）或者2.0（RNA）。假如比值低于1.8 或者2.0，表示存在蛋白质或者酚类物质的影响。2 A230 表示样品中存在一些污染物，如碳水化合物、多肽、苯酚等，较纯净的核酸A260 / A230的比值大于2.0。3 A320 检测溶液的混浊度和其他干扰因子，纯样品A320一般是0。FAQ:1.问：仪器读数漂移答：全部的分光光度计测定的都是吸光值或者透光值，Biophotometer以吸光值表示。然后通过系列计算因子换算成浓度。所以反映数据是否精确和仪器性能的关键指标是吸光值。当同一样品的全部吸光值在均数的正负0.5%左右浮动，属于正常。假如读数位于一个标准品的1%的误差范围内，说明测试精确。2.问：读数出现负值，或者几次读数相差特别大答： 在测试之前，须要做空白测试。空白液必需与溶解和稀释样品的液体性质一样。 测试之前必需充分混匀，并确保无气泡产生。 测试种留意比色杯方向一样，光径精确。3.问：上述全部问题我都是正确处理，照旧出现读数不稳的现象。答： 样品浓度太低，A260nm的吸光值必需0.1 ,读数才有意义。 考虑样品是否刚从冰箱取出，样品在室温条件下有升温现象，会导致读数不稳定现象。 另外，大多数客户采纳水作空白，应在测试前保证水簇新和纯净。假如水中有漂移物，会导致读数严峻漂移。4.问:A280,A230,A260,A320各个指标的意义是什么?以及A260/230,A260/A280比值范围在多少范围内正常.答： 260nm波长一般是核酸的汲取峰,A260 一般表示核酸的吸光度 280nm波长一般是蛋白质的汲取峰,A280 一般表示蛋白质的吸光度 当样品中出现悬浮物,微生物等大颗粒物质,A320的读数相对增大。纯净的样品中，320nm的吸光值是0，一般假如A320大于0.01，应当设定A320correct 功能为 “ON” 230nm的吸光值表示样品中苯酚，芳香族化合物，肽，碳水化合物等杂质的含量 A260/A280的比值表示DNA或者RNA 样品纯度，前者一般1,8-2.0,后者一般在2.0-2.2 的范围内，表示核酸样品比较纯。假如蛋白质污染会降低这些笔直。 A260/A230 的比值一般大于2.0名称 正常值范围A320 A260/A230 2.05. 核酸可测定的最小值是多少？蛋白质可测定的最小值是多少？答：仪器的吸光值范围0.000-3.000之间。DNA 样品测试中，检测的最低吸光值0.05,相当于125ngDsDNA/50ul样品，浓度2.5 ug/mlRNA样品测试中，检测的最低吸光值0.05,对应的浓度2ug/ml,100ngRNA/50ul样品。.但实际操作中，要求A260nm的吸光值0.1的吸光值才是值得信任的。蛋白质的比色法由于所用试剂不同，所以无法确定一个精确地范围。干脆法测试蛋白质，其浓度值受消光系数的影响，浓度=吸光值*消光系数*稀释倍数。蛋白质能检测的最大范围约为4mg/ml.1OD 的吸光值分别相当于50g/ml的dsDNA,37g/ml的ssDNA,40g/ml的RNA,30g/ml的Olig
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