埃博拉出血热采样及标本运送

埃博拉出血热的采样与防护 一、基本情况 潜伏期 2-21天 ,一般为 5-12天。 传播途径：接触传播、 气溶胶传播 。 临床表现：突然发病，各器官出血，肌肉疼 痛， DIC（弥散性血管内凝血）等 90%的死亡患者在发病后 12天内死亡 (7-14天 )。 病死率高， 可达 50%-90%。 尚无特效药和疫苗。 埃博拉出血热是最严重的出血热 一、基本情况 型别 扎伊尔型 （ Ebola-Zare）： 毒力强 ， 人感染后病死率 高 。 苏丹型 （ Ebola-Sudan）： 科特迪瓦 （ Ebola-Cte d Ivoire） ： 对黑猩猩有致死性 , 对人的毒力较弱。 雷斯顿型 （ Ebola-Reston）： 在非人灵长类中有致死性 , 人感染不发病。 抵抗力 埃博拉 病毒在室温下稳定， 60 1小时大部分病毒被灭 活 , 对紫外线、 射线、甲醛、次氯酸、酚类等消毒剂和 脂溶剂均敏感 。 二、临床表现及诊断 1、 流行病学：来自疫区，或 3周内有疫区旅行史，或与患者、 感染动物接触。 2、临床表现：急性起病，发热伴极度乏力、牙龈出血、鼻出 血、黏膜出血、瘀点和紫斑、血便等及其他症状（头痛、肌痛、咽痛、恶心、呕吐 )。 3、实验室检测： （ 1）病毒抗原阳性 （ 2）血清特异性 IgM抗体阳性 （ 3）恢复期血清 IgG比急性期有 4倍升高 （ 4）核酸阳性 （ 5）分离到埃博拉病毒 疑似病例： 1+2 确诊病例：疑似病例 +3中任一检测阳性 三、标本采集 -生物安全防护 1、所有样本的采集或处理应遵守 医院感染管理 规范 和 病原微生物实验室生物安全管理条例 等相关生物安全规定，在标准预防的基础上 采用飞 沫和接触隔离 的预防措施。 2、样本采集时，应严格按照 BSL-3级 实验室规定做 好个人防护。应穿戴医用防护服、可遮盖口鼻的医 用防护口罩 (N95)、双层乳胶手套、护目镜、头部面 部保护罩、专用橡胶靴等。 三、标本采集 -生物安全防护 3、采血场所应在相对独立的场所，应符合 负压 要求。 如果不具备上述条件，可用相邻的房间提供足够的安全 空间，备有除了病人常规护理的材料外应具备手套、防 护服和防护面具等，同时要装备有洗手的设施和装有消 毒液的桶。 4、采样人员应由经过 生物安全防护培训 的人员执行， 采血时应 2人 在场。 四、标本采集与保存 1、标本采集时间 初次送检：目前检测方法中主要是核酸检测，埃博拉出血 热患者发病后 3天内的血标本，病毒核酸阳性的可能性很 小，因此 建议采集发病 72小时后的血标本 送检。 再次送检：如果留观 /疑似病例发病 72小时后血标本实验 室检测阴性，但临床表现比较典型的患者，可在 初次检测 24-48小时后 再次采集血标本送检。 解除隔离治疗送检：确诊病例解除隔离治疗前采集血标本 进行复检。 四、标本采集与保存 2、标本采集方法 . 用 分离胶无菌真空促凝管 采集静脉血，每管 3mL， 标记后 4 保存 。并 填写标本采集登记表（ 附表 1） . 标本采集数量 留观病例、疑似病例 采集 4管，其中 2管送省疾控中心 进行埃博拉病毒检测， 2管保存于本单位，待排除埃 博拉病毒感染后用于其他病原体的筛查； 确诊病例 采集恢复期血标本，送国家疾控中心病毒病 所进行检测。 四、标本采集与保存 3、标本保存方法 . 未分离血清的全血标本应 4 保存，并尽快分离血清； . 血清标本长期保存应置于 -70 以下 ； . 标本保存不超过 1周可置 -20 。 4、标本信息收集（填写埃博拉出血热 流行病学个案调查表 ） 病例一般信息：姓名、性别、年龄、国籍 来自疫区国名、入境时间，发病日期，发病前 21天的疫区居住史，旅行史、 类似病例接触史等。 主要临床症状：发热、严重乏力、头痛、肌痛、呕吐、腹泻、出血表现等 标本详细信息：采样时间、种类、标本量等。 送样信息：负责送检的联系人姓名、联系电话、送检时间等 标本容器 第一层 2mL,可离心有垫圈 第二层 15mL,封口膜封口 易标记 五、标本包装与运输 1、包装方式： A类包装（ UN2814要求）按照三重包装系统包装： 第一层包装（可密封样本袋、 50mL离心管）； 第二层安全壳容器（防水、防漏）； 第三层外层运输包装。 样本袋放入防水防漏的第二层安全壳容器中，为降 低破碎或泄漏的风险，用吸水纸等填充物固定标本袋。 安全壳容器和外包装放冰袋。 五、标本包装与运输 2、运输方式： 全血采用冷藏运输，血清可采用冷冻运输 不要打开采集管或分装样本。 专人专车。 六、实验室检测 凡涉及埃博拉病毒的分离、培养和动物实验，需在生物安全 4 级（ BSL-4/ABSL-4）实验室内进行。 涉及未经培养有感染性材料的实验活动，需在 BSL-3实验室内进 行。 血清学检测应在 BSL-3实验室内，且标本需先 60 1小时灭活后， 再进行后续实验操作。 核酸检测时 ,需在 BSL-3实验室内加入核酸提取裂解液 ,完成病毒 RNA提取，并对装有病毒 RNA样品管的外表面进行彻底消毒后， 可在 BSL-3实验室以外进行扩增检测。 六、实验室检测 1、病原学检测： 核酸检测：主要检测方法。发病后 3天内，血标本中埃 博拉病毒核酸检出率低，检测阴性不能排除埃博拉病毒 感染。发病后 3 10天血标本病毒核酸检出率高，检测 阴性可排除埃博拉病毒感染。 病毒抗原检测：用酶联免疫法检测埃博拉病毒核蛋白 抗原。病毒抗原检测阳性可确诊。发病后 3天内，血标 本中埃博拉病毒抗原检出率低，检测阴性不能排除埃博 拉病毒感染，发病后 3 10天血标本病毒抗原检出率高。 六、实验室检测 2.血清学检测： 血清特异性 IgM抗体：采用捕获法 ELISA方法检测。 IgM抗体阳性可确诊。 血清特异性 IgG抗体：目前采用间接法 ELISA检测 IgG抗 体。单份血清埃博拉病毒 IgG抗体阳性提示曾感染埃 博拉病毒，双份血清埃博拉病毒 IgG抗体阳转或恢复 期滴度较急性期 4倍或者以上增高者可确诊。 七、样本保存和销毁 实验室检测埃博拉病毒阳性血标本，应根据相关生物安全规定保存在 -70 以下，实行“双人双锁”管理和取样“审批”制度。 实验室检测埃博拉病毒阴性血标本，应所采集疑似患者或密切接触者 完全排除埃博拉病毒感染后，转入其他血清库保存或销毁。 所有血清销毁时，均应在冰箱内取出后，在生物安全柜内，待其自然 融化后，置于含有效消毒剂（ 0.5%有效氯）内浸泡，然后高压灭活。 所有销毁样本均应在相应数据库清单内标明，销毁的时间和操作人， 阴性样本销毁记录保存 1年以后可以清除，阳性样本的销毁记录应保 存 5年以上。 八、注意事项 1、标本采集时要加强个人面部防护 2、标本标记清晰，并完整收集标本信息 3、标本采集后不要在 P3实验室外打开标本分 装或灭活 4、标本运输时低温冷藏，避免反复冻融，专 人专车 Thank you !