农产品中农药残留的测定

农产品中农药残留的测定农业部农产品质量监督检验测试中心（杭州）吴俐勤农药研究分析，高人云集杭州，出自浙江农药研究分析，高人云集杭州，出自浙江国家环保局南京环境科学研究所蔡道基蔡道基院士中国农科院茶叶科学研究所陈宗懋陈宗懋研究员浙江农业大学植保系环境毒理研究所樊德方樊德方、刘乾开刘乾开教授浙江省农科院叶兴祥、于志光叶兴祥、于志光研究员中国农科院水稻研究所梁天锡梁天锡研究员浙江大学环资学院副院长 刘维屏刘维屏教授 副院长 朱利中朱利中教授 副院长 徐建明徐建明教授浙江大学农学院植保系 朱国念朱国念教授中国农科院副院长 王运浩王运浩研究员安徽农业大学副校长岳永德岳永德教授吉林农大食品系分析中心主任范志先范志先教授浙江省现在的几家从事农残检测的部门（杭州市）农业部农产品质量监督检验测试检中心（杭州）农业部农药质量与残留检测中心（杭州）农业部稻米及制品质量监督检验测中心 农业部茶叶质量监督检验测试中心 中国农科院茶叶研究所 浙江省出入境检验检疫局 浙江省技术监督局 中国土畜产浙江茶叶进出口公司农业部农产品质量监督检验测试中心（杭州）简介 是浙江省农业科学院承建、浙江省农科院农产品质量标准研究所负责实施、经农业部批准授权的通过国家计量认证的法定专职农产品质检机构。对外承担农产品质量监督、委托检验和仲裁、优质产品评选、新产品和成果鉴定，农产品质量标准的制修订及其验证、技术咨询和检测人员培训任务 浙江省农产品质量安全监督检验检测协调办公室向社会首批推荐省级农产品质量安全检验检测机构浙江省农业厅指定的我省无公害农产品认定评审检测机构浙江出入境检验检疫局认可的出口农产品检验机构农业部无公害农产品检验检测机构农药残留测定面临的挑战 农药的多残留分析 一个样品中要求检测40-80种不同的农药残留组份 快速 尽量缩短分析时间，快速告知检测结果 灵敏度高 随着国内外“食品安全性”检测标准的提高，要求的 检测限愈来愈低，要求检测仪器及方法有足够高的灵敏度。准确度 要求方法的准确度能符合标准的要求 检测实例 样品名称：乌龙茶，普洱茶 样品编号：2002-F-357-358 背景材料 2002年5月底，广州某单位一批出口茶叶，依 照日本客户要求检测有机氯，有机磷及菊酯类共 33种农残组份，由农业部介绍，承担该项任务。农残检测中的几个基本概念 灵敏度 准确度 精确度最低检测量）最小检出量（ng）样本溶液定容体积（ml）最低的检出浓度（mg/kg）样本溶液进样体积（ul）称 样重量（g）色谱仪最低响应值为S=3N第24届FAO/WHO农药残留法典委员会，对检测方法的实际检测限与最高残留限量的关系要求如下 最高残留限量（MRL）相应的实际检测限（LPL）（mg/kg)(mg/kg)0.05 0.5*MRL 值准确度-回收率 测得的试样中农药残留量与试样中实际含量的符合度 在农药残留量检测工作中待测试样中农药残留量真实值是未知的，因此，无法判断所采用方法的准确度，通常采用模拟的方法，在空白样本中添加一定量的待测农药标准样品，制成已知含量的样本，然后按拟定的方法对样本进行提取、净化和测定，所得到的实测值与已知值比较，实测值对已知值的百分率即为方法添加回收率。它是衡量农药残留量检测方法准确度的重要指标。添加回收率应以接近100为最佳，但是，由于试样种类和农药品种多，以及杂质干扰、操作误差等原因，则要求添加回收率为70110，平均回收率80，即符合要求。精密度变异系数同一种检测方法对同一组试样进行多次重复测定，其测定结果之间的偏差程度即为方法的精确度或精密度。不同添加回收率浓度范围，要求允许变异系数大致如下：添加浓度（mg/kg)变异系数1-10 10-25 0.1-1 25-50 0.01-0.1 50-100 0.001-0.01 100-200浙江省无公害农产品认定产品安全性检测项目、检测方法、限量标准1、茶 叶2、水 果3、甘蓝类蔬菜4、茄果类蔬菜5、白菜类蔬菜6、其它类蔬菜7、稻米浙江省绿色农产品认定产品安全性检测收费标准浙江水产品上海推荐会和绿色产品检测项目农业部农产品监督检验测试中心（杭州）兽药检农业部农产品监督检验测试中心（杭州）兽药检测项目测项目 磺胺甲恶唑、甲氧苄啶、磺胺嘧啶、已烯雌酚、甲睾酮、氯霉素、链霉素、庆大霉素、甲砜霉素、土霉素、盐酸四环素、盐酸金霉素、磺胺嘧啶、诺氟沙星、盐酸克伦特罗、呋喃唑酮、伊维菌素、喹乙醇2002年8-9月农业部“省会城市-杭州市蔬菜定点有机磷农药残留和硝酸盐污染情况监督抽查”总经费：16万 总样品数：约200个 抽样：基地、批发市场、农贸市场 有机磷品种：敌敌畏、甲胺磷、乙酰甲胺磷、甲拌磷、氧化乐果、乐果、毒死蜱、马拉硫磷、对硫磷 本实验室完成情况1、采用方法：美国加州食品农业部农药多残留快速扫描方法（MRSM）2、方法概述：30克样品于250ml锥形瓶中，加入50ml乙腈（视样品量加适量水），匀浆机中高速匀浆2分钟。布氏漏斗抽滤 100ml具塞量筒内放入克NaCl,倒人滤液，盖上塞子，剧烈震荡1分钟，在室温下静置约10分钟，分层。取出25 ml于平底烧瓶中，旋转浓缩蒸发器上浓缩近干，3ml丙酮定容，Varian CP-3800气相色谱 PFPD 测定 30克样品于250ml锥形瓶中，加入50ml乙腈（视样品量加适量水），匀浆机中高速匀浆2分钟。布氏漏斗抽滤。100ml具塞量筒内放入克NaC1，倒入滤液，盖上塞子，剧烈振荡1分钟，在室温下静置约10分钟，分层。取出25ml于平底烧瓶中，旋转浓缩蒸发器上浓缩近干，3ml丙酮定容，Varian CP-3800气相色谱PFPD测定仪器配置 1.瓦里安CP3800全气路电子流量控制独立三通道的气相色谱仪 2.2个1177分流/不分流毛细柱进样口 3.1个1079程序升温PTV进样口 4.脉冲火焰光度检测器PFPD 5.电子捕俘检测器ECD 6.氮磷检测器TSD 7.CP8410 21位自动进样器 8.化学工作站回 收 率 说明：敌敌畏、甲胺磷、乙酰甲胺磷、甲拌磷、氧化乐果、乐果、毒死蜱，马拉硫磷、对硫磷、9个有机磷农残混合标样PFPD测定结果，标样浓度 说明：上述9种有机磷农残标样（），加入黄瓜基质中，PFPD的测定结果。（样品编号：1050-1）说明：浓度为的敌敌畏，甲胺磷、乙酰甲胺磷、甲拌磷、氧化乐果、乐果、毒死蜱，马拉硫磷、对硫磷等9种农残标样加入黄瓜基质中后PFPD测定结果。样品编号：1111-1色谱柱型号 Varian CP-SIL-24CB（MS）SPB-608:30 m x 0.25 mm ID x 0.25 um SPB-50:30 m x 0.32 mm ID x 0.25 um程序升温 T Rate Hold Total (C0)(ml/min)(min)(min)80 1.00 1.00 130 50.0 2.00 4.00 260 20.0 4.00 30.00 国家标准与国际组织和部分国家、地区标准比较2003年蔬菜农药残留定点监测 1.抽检时间：1、4、7、9、11月 2.抽检项目：甲胺磷、乙酰甲胺磷、甲拌磷、氧化乐果、毒死蜱、对硫磷、甲基对硫磷、克百威、抗蚜威、氯氰菊酯、氰戊菊酯、甲氰菊酯、三氟氯氰酯 3.抽检地点：杭州市集贸市场及主要蔬菜生产基地采用方法 1。NY/T 448-2001“蔬菜上有机磷和氨基甲酸酯类农药残毒快速检测方法”2。有机磷、氨基甲酸酯农药残留按GB/T5009.20 方法规定的程序进行操作。3。拟除虫菊酯类农药残留按方法规定的程序进行操作。用农残快速测定仪进行快速筛选，再用气相色谱方法进行分析有机磷、氨基甲酸酯农药快速检测原理有机磷和氨基甲酸酯类农药能抑制昆虫中枢和周围神经系统中乙酰胆碱酶的活性，造成神经传导介质乙酰胆碱的积累，影响正常传导，使昆虫中毒致死，根据这一昆虫毒理学原理，用在对农药残留的检测中。加入反应试剂后，用分光光度计测定吸光值随时间的变化值，计算出抑制率，判断蔬菜中含有机磷或氨基甲酸酯类农药的残毒情况。即乙酰胆碱酯酶+有机磷或氨基甲酸酯类农药酶活性被抑制 活性被抑制样本中含有机磷或氨基甲酸酯类农药，乙酰胆碱酯酶+样本提取液 活性正常，中不含有机磷或氨基甲酸酯类农药如以乙酰硫代胆碱（AsCh)为底物，在乙酰胆碱酯酶（AChE)的作用下乙酰硫代胆碱（AsCh)水解成硫代胆碱和乙酸，硫代胆碱和二硫双对硝基苯甲酸（DTNB）产生显色反应，使反应液呈黄色，在分光光度计410nm处有最大吸收峰，用分光光度计可测得酶活性被抑制程度。（用抑制率表示）优点：快速缺点：不够灵敏农药残留快速检测最低检出浓度国家标准与国际组织和部分国家标准比较表注：如果没有限量值，参见CAC标准。其它蔬菜按最低限量值判定。检测条件Varian CP-SIL-24CB（MS）30m x 0.25 mm ID x 0.5um TSDSPB-50:30 m x 0.32 mm ID x 0.25 um PFPD 自动进样器 ：8410 甲胺磷检出样品的确证 TSD：11 只 TSD-MSD 2/11=18.2%TSD-PFPD 3 只 TSD-PFPD-MSD 2/3 =66.7%IGNITORCOILLUMNFLUEN+AIR+HCOLUMNEFFLUENT+AIR+H2AIR+H2COLUMNEFFLUENT+AIR+H2AIR+H2COLUMNEFFLUENT+AIR+H2AIR+H2VENTVENTIGNITORCOILVENTIGNITORCOILVENTCOMBUSTIONCHAMBERFILLIGNITEPROPAGATEMITCOMBUSTIONCHAMBERIGNITORCOILCOMBUSTIONCHAMBERIGNITIONCHAMBERIGNITIONCHAMBERIGNITIONCHAMBERIGNITIONCHAMBERCOMBUSTIONCHAMBER Fill Ignite Propagate Emit Fill Ignite Propagate Emit 400 ms 1-2 ms 1-30 ms 400 ms 1-2 ms 1-30 mscolumneffluent+gasesgasesPFPD Emission Reactions:S and P vs.Hydrocarbons HC emission(gated at 1-3 ms)OH*+C2 CH*+CO Sulfur emission(gated at 6-26 ms)H+H+S2 S2*+H2S+S S2*(second-order or quadratic response)Phosphorus emission(gated at 4-14 ms)H+PO HPO*(first order or linear response)PFPD Selectivity by Emission Delay(Gating)Hydrocarbon and sulfur emission profiles as a function of timeS emission occurs 6 ms after ignition and lasts over 20 ms,whereas HC related emission occurs quickly and is over within 4 msPFPD Selectivity by Wavelength(Filters)Hydrocarbon and sulfur emission profiles as a function of wavelength.Varian PFPD uses a 340-460 nm filter.Sulfur Components in Diesel Fuel1077 Injector,200:1 Split,1 L injection,DB-1,30m,0.32 mm ID,1 m df,He Carrier Gas at 50 cm/sec at 230 C,Detector:200 C,Range 10,Attn 400 样品：普洱茶，正已烷提取 检测器：ECD分析方法的质量控制1、分析方法必须经过认可或周密的验证。、分析方法必须经过认可或周密的验证。2、分析程序作出明确的规定，经考核核准的人员才能进行分析、分析程序作出明确的规定，经考核核准的人员才能进行分析、测试，分析结果计算和记录、校核等工作。测试，分析结果计算和记录、校核等工作。3、使用质量控制样品。包括经用有证标准物质或其它国际上公、使用质量控制样品。包括经用有证标准物质或其它国际上公认的标准物质校准的实验室参考物质。推荐以下几种质量控制样认的标准物质校准的实验室参考物质。推荐以下几种质量控制样品：品：a.不含有待测物质的空白样品不含有待测物质的空白样品b.待测物含量等于最高残留限量或略大于检测限或分析方法测定待测物含量等于最高残留限量或略大于检测限或分析方法测定低限的实际样品。低限的实际样品。c.待测物含量高于最高残留限量或高检测限或分析方法测定低限待测物含量高于最高残留限量或高检测限或分析方法测定低限的实际样品的实际样品4、每一次测试应同时检测质量控制样品，包括上述的三个样品，、每一次测试应同时检测质量控制样品，包括上述的三个样品，在条件不允许的情况下，可以只包括样或样品。在条件不允许的情况下，可以只包括样或样品。5、用添加样品检查回收率、响应线性和制作校正曲线。、用添加样品检查回收率、响应线性和制作校正曲线。6、主要仪器设备，应能满足检测方法的要求，并要经常进行校、主要仪器设备，应能满足检测方法的要求，并要经常进行校准和维护。准和维护。7、计算结果必须详细说明，其结果必须符合统计分析的质量要、计算结果必须详细说明，其结果必须符合统计分析的质量要求。求。农药残留实验室规范 农药残留量检测是较复杂的检测技术。由于待测样本中农药含量往往很低，帮要求各检测步骤者应科学、严密，方法灵敏度要高；由于待测农药品种和样本种类多，故需要采用不同的样本前处理和测定方法；由于检测步骤多，流程长，故要求操作人员应具有熟练的技术和丰富的经验。农药残留量检测工作特点决定了农药残留实验室的特点：具在较丰富经验和较高技术水平的专家；具有先进的检测仪器和配套设备；具在最大安全性和最小污染机会的条件。技术人员必须是经过严格培训的分析化学家，不但要有该领域的专业知识，必须是经过严格培训的分析化学家，不但要有该领域的专业知识，还要具有能胜任该项工作的技能和经验，经考核合格。还要具有能胜任该项工作的技能和经验，经考核合格。1.明确采用的检测方法原理及进行每一步骤处理的目的和重要性。明确采用的检测方法原理及进行每一步骤处理的目的和重要性。2.熟练掌握农药残留量检测各步骤的操作技术。熟练掌握农药残留量检测各步骤的操作技术。3.熟悉检测仪器的性能、工作原理、使用及一般故障的排除。、熟悉检测仪器的性能、工作原理、使用及一般故障的排除。、4.能独立设计、建立检测方法。能独立设计、建立检测方法。5.能独立进行数据处理和撰写实验报告。能独立进行数据处理和撰写实验报告。6.掌握农药残留田间试验的意义、原理和方法。掌握农药残留田间试验的意义、原理和方法。7.了解国内外农药残留量检测发展动态、新技术和新方法。了解国内外农药残留量检测发展动态、新技术和新方法。8.具有安全防护知识具有安全防护知识防止污染一、污染来源1、不合格的试剂。2、玻璃器皿、注射器、色谱柱、检测器等3、橡皮管、橡皮塞、滤纸、塑料等4、实验台、桌子抛光剂、皮肤软膏、含有杀菌剂的肥皂、洗涤剂、香料（香水）、化妆品等，当用气相色谱电子捕获检测器和氮磷检测器时，要格外注意。5.周围环境6.其它二、污染来源1、农药残留实验室与农药制剂分析实验室分开。2、农药标准品贮存室待测样本、试剂和玻璃仪器贮存室相距要远。3、检测仪器应放在隔离室内，并远离样本前处理室。4、良好的环境条件避免损失1.样本包装运输过程应避免阳光直射，并尽快运到实验室，贮存在3-50C条件下，要求在几天内测完。2.样品贮存若样本需贮存6-9个月，应贮存在-200C下。由于有时酶的作用使农药残留降解所需的温度是很低的，因此，如果有怀疑的话，还应在相同条件下做添加样本贮藏试验进比较。3.冷冻样本中的冰晶和水不得丟弃，应重新匀浆后再取样检测4.解冻样品及样本溶液存放。解冻的样本应立即检测。样本溶液的存放应避免光直射和高温。5.充分提取，完全转移6.浓缩。浓缩时溶剂蒸发不能太快，加热温度不能太高，减压的压力不能太大。特别是在溶液浓缩至体积很小时或近干时，要格外注意，稍有疏忽就可能造成严重损失。