药物稳定性试验统计分析方法

药物稳定性试验统计分析方法在确定有效期的统计分析过程中，一般选择可以定量的指标进行处理，通常根据药物含 量变化计算，按照长期试验测定数值，以标示量对时间进行直线回归，获得回归方程，求 出各时间点标示量的计算值(y),然后计算标示量(y) 95%单侧可信限的置信区间为yz, 其中：12-21)式中，tN-2概率0.05，自由度N-2的t单侧分布值(见表12-4), N为数组；X。一给定自变 量；X 自变量X的平均值；S = Q(12-22)N - 2式中，Q 二 L - bL ； L y 的离差平方和，L =Yy2 - (Yy)2/N ； Lxyxy 的离差乘yyxy yyyyxy积之和L二Yxy - (Yx)(Yy)/N ； b直线斜率。xy将有关点连接可得出分布于回归线两侧的曲线。取质量标准中规定的含量低限(根据各 品种实际规定限度确定)与置信区间下界线相交点对应的时间，即为药物的有效期。根据情 况也可拟合为二次或三次方程或对数函数方程。此种方式确定的药物有效期，在药物标签及说明书中均指明什么温度下保存，不得使用 “室温”之类的名词。例：某药物在温度252C，相对温度6010%的条件下进行长期实验，得各时间的标 示量如表 12-4。表 12-4 供试品各时间的标示量时间/月03691218标示里/%99.397.697.398.496.094.0以时间为自变量(x),标示量 (y)为因变量进行回归，得回归方程y= 99.18-0.26x，r=0.8970,查T单侧分布表，当自由度为4，P=0.05得tN-2=2.132：3.444N - 2 = 0.9279s-QY(X - X)2 = 210i当 X0=0 时，（即 0 月）i 1(0 8)2=2Z9297 气 + 杠= 1.356按回归方程计算0月时的y值得99.18%，则y值置信区间yz,即:99.18 + 1.356=100.5499.181.356=97.82其他各时间（3、6、9、12、18月）的y及置信区间按同法计算，结果见表12-5。表 12-5 稳定性数据表时间下界值上界值/月头测标示里（y） /%计算标小里（y ） /%y zy+z099.399.1897.82100.54397.698.4097.3499.45697.397.6296.7798.47998.496.8496.0297.661296.096.0695.0897.041894.094.5092.9296.092492.9490.6195.273091.3888.2794.493689.8285.9193.72用时间与y、y、yz、y+z作图，得图12-6，从标示量90%处划一条直线与置信区 间下界线相交，自交点作垂线于时间轴相交处，即为有效期，本例有效期为25.5个月。图12-6药品产品有效期估算图图 12-6六、经典恒温法前述实验方法主要用于新药申请，但在实际研究工作中，也可考虑采用经典恒温法，特别对 水溶液的药物制剂，预测结果有一定的参考价值。经典恒温法的理论依据是前述Arrhenius的指数定律K=Ae-E/RT，其对数形式为log K =E2.303RT+ log A12-23)以logK对1/T作图得一直线，此图称Arrhenius图，直线斜率为-E/ （2.303R）,由此可 计算出活化能E。若将直线外推至室温，就可求出室温时的速度常数（K25）。由K25可求出 分解10%所需的时间（即T0.9）或室温贮藏若干时间以后残余的药物的浓度。实验设计时，除了首先确定含量测定方法外，还要进行预试，以便对该药的稳定性有一 个基本的了解，然后设计实验温度与取样时间。计划好后，将样品放入各种不同温度的恒温 水浴中，定时取样测定其浓度（或含量），求出各温度下不同时间药物的浓度变化。以药物 浓度或浓度的其他函数对时间作图，以判断反应级数。若以logc对T作图得一直线，则为 一级反应。再由直线斜率求出各温度的速度常数，然后按前述方法求出活化能和T0.9。要想得到预期的结果，除了精心设计实验外，很重要的问题是对实验数据进行正确的处 理。化学动力学参数（如反应级数、K、E、T1/2）的计算，有图解法和统计学方法，后一种 方法比较准确、合理，故近来在稳定性的研究中广泛应用。下面介绍线性回归法。例如某药 物制剂，在40C、50C、60C、70C四个温度下进行加速实验，测得各个时间的浓度，确 定为一级反应，用线性回归法求出各温度的速度常数，结果见表12-6。表 12-6动力学数据表T/C1/TX103KX105/h-1lgK403.1922.664.575503.0947.944.100603.00122.38 3.650702.91356.50 3.248将上述数据（logK对1/T）进行一元线性回归，得回归方程：logK=47.65.98/T+10.64E= （ 4765.98 ） X 2.303X8.319=91309.77（J/mol）=91.31（kJ/mol）除经典恒温法外，还有线性变温法， Q10 法，活化能估算法等，在研究工作中，有时可 以应用。