高分辨外周血染色体制备与羊水细胞培养课件

高分辨外周血染色体制备及羊水细胞培养检验科：陈美佳 进修初衷提高自身专业理论水平和实验操作技能，学习先进的技术，开阔视野。PREFACE 人外周血染色体制备1羊水染色体制备2阅片3日常理论知识的学习4体会5CONTENTS6致谢人外周血染色体制备1制备原理制备原理1.正常情况下，人体外周血淋巴细胞不再分裂，但植物血凝素（PHA）可刺激血中的淋巴细胞转化成淋巴母细胞，使其恢复增殖能力。2.秋水仙素抑制细胞分裂，使细胞分裂停止在中期以获得足够量的分裂期细胞，经低渗、固定、制片、染色后镜下观察进行核型分析。外周血染色体制备1接种收获滴片显带两瓶培养基，每瓶培养基接种0.4ml外周血，于37培养箱培养66-72h秋水仙素、低渗、预固定，三次固定每管悬液滴两张玻片，每张玻片头体尾各一滴，于60烤箱烤22h胰酶消化，小牛血清终止消化，吉姆萨染液染色外周血染色体制备1制备的过程制备的过程合格的外周片合格的外周片1.每个低倍镜视野有5-7个分裂相2.染色体分裂相分散好，交叉少，染色体直，长度良好，显带后镜下观察桃红色，染色体带纹清晰可辨，背景清晰，无杂质或杂质少外周血染色体制备1制备失败原因及对策制备失败原因及对策1.细胞培养基2.接种3.血源4.秋水仙素5.低渗时间6.固定液比例7.玻片质量8.烤片9.显带10.染色时间外周血染色体制备1关键点 关键点 关键点 关键点 无菌操作标本核对试剂配制温湿度控制注意事项21234羊水染色体制备2收获羊水细胞培养1细胞克隆出现小圆细胞大量小圆细胞出现折光度好出现贴壁细胞换液接种 观察一般从第5天开始观察，出现贴壁细胞即可换液接种培养无菌抽取20ml的羊水，完全培养基接种，于CO2培养箱中培养羊水细胞培养1 收获时机1.细胞的克隆数量2.克隆中细胞密度3.小圆细胞生长情况 收获1.消化法 加秋-低渗-固定-滴片2.原位法 加秋-低渗-固定-原位制片羊水染色体制备21.有足够分裂相中期2.细胞密度适宜3.染色体分布均匀4.染色体形态清晰且直5.镜下看不到细胞质 羊水染色体制备2 2理想羊水片注意事项1.培养瓶等器材保证无菌、干净、无毒2.不使用过期或不合格的试剂3.培养室定期进行空气消毒4.操作过程保证无菌操作5.正确配置和使用试剂 羊水染色体制备2 2优点缺点原位收获法区分真假嵌合；收获时间缩短；收获过程中无羊水细胞的丢失及损伤。收获过程中实验条件要求较高，尤其是对温度和湿度的控制很关键；不能上扫描系统，耗时耗力。胰酶消化法收获与制片条件要求不高，可以上扫描系统。不能区分真假嵌合；收获过程中有细胞损伤与丢失。阅片3掌握了核型分析的基本流程以及对常见异常染色体片的判读了解病人的性别、年龄、临床诊断和检查结果等信息。1234核型认真核对每一对染色体的条带。计数20个核型，分析5个核型，出现性染色体数目异常或结构异常核型都要增加计数，翻倍计数至50个或100个，直至确定结果后才可停止。结合其他检测结果发报告。日常理论知识学习4周五病例讨论晨 读体会5扎实的专业理论知识，异常核型的判断经验丰富，对待工作一丝不苟。1互相学习与讨论的氛围很浓厚。2我将在这里学到的先进专业技术、严格的实验室管理制度、学术氛围等带回科室，提高我们的水平。3自己不断加强学习，提高自己的执业素养。4THANKS主讲人：陈美佳听课人员：柳青听课人员：柳青 农建宏农建宏 何敏何敏 刘凤琼刘凤琼 陈一君陈一君 姜晓姜晓 方燕华方燕华 黄霈黄霈 唐兰艳唐兰艳 刘欣刘欣 陆梦盈陆梦盈 邓海花邓海花 李璐李璐 邹世杰邹世杰 唐霞唐霞 赵绮赵绮 李良焱李良焱 覃江韬覃江韬