常用缓冲液及培养基配方

常用缓冲液及培养基配方LB 液体培养基：10g5g10gBacto -蛋白胨酵母抽提物 氯化钠加950ml蒸馏水溶解，用5N氢氧化钠调pH至7.0,定容至1000ml,高压灭菌后保存。LB 固体培养基：每升LB液体培养基中加入12g琼脂粉，高压灭菌后保存。SOB液体培养基20g5g0.5gBacto -蛋白胨酵母抽提物NaCl力口950 ml水溶解，加入250mmol/L KCl 溶液 10ml，用5 N NaOH调pH至7.0，定容至 1000ml,高压灭菌后保存。使用前加入5 ml经灭菌的2mol/LMgCl2oSOC液体培养基SOB中加入经灭菌的葡萄糖溶液至终浓度为20 mmol/Lo麦康凯固体培养基每1000ml水中加52g培养基粉，煮沸溶解后分装，高压灭菌。NA固体培养基牛肉浸膏3g酵母浸膏1g蛋白胨5g蔗糖10g琼脂粉15g加950ml蒸馏水溶解，调pH至7.0，定容至1000ml,高压灭菌后保存。TB 培养基 ：将下列组分溶解在0.9L水中：Bacto-蛋白胨12g酵母抽提物24g甘油4ml各组分溶解后高压灭菌。冷却到60C,再加100ml灭菌的170mmol/L KPOq/0.72 mol/L KjHPO4的溶液。高压灭菌或用0.22um的滤膜过滤除菌。溶液I葡萄糖 2.25 g50mmol/L1mol/L Tris Cl(pH8.0) 6.25ml20mmol/L0.5mol/L EDTA(pH8.0) 5ml10mmol/L调pH至8.0后，用水定容至250 ml,高压灭菌后保存。溶液II10 mol/L NaOH2ml10% SDS10ml用水定容至100 ml,现配现用。溶液III60ml5 mol/L 醋酸钾冰醋酸11.5ml水28.5ml高压灭菌后保存。高盐 TE 缓冲液10mmol/L Tris.Cl, pH 8.0*0.1mmol/L EDTA, pH 8.0*1mol/L NaCl 于室温保存(可在几年内保持稳定)CTAB抽提液2% (w/v) CTAB(古立烷基三乙基溴化铵)100mmol/L Tris.Cl,pH 8.0 *1.4mol/L NaCl于室温保存(可在几年内保持稳定)CTAB/NaCl 溶液(10% CTAB/0.7mol/L NaCl)在80ml H2O中溶解4.1g NaCl，缓慢加入10 一 CTAB (十六烷基三乙基溴化铵)，同时加 热并搅拌。如果需要，可加热至65C溶解。定容终体积至1OOml.CTAB沉淀液1%( w/v) CTAB50mmol/L Tris.Cl， pH 8.010mmol/L EDTA， pH8.0PBS缓冲液：十二水磷酸氢二钠15g磷酸二氢钾1g氯化钠40g氯化钾1g定容至5000ml,调pH至7.2。ELISA包被液：碳酸钠1.59g碳酸氢钠2.93g定容至1000ml，调pH至9.6。ELISA 洗涤液(0.01M PBST)：5000ml PBS 中加 2.5ml 吐温-20显色液(底物溶液-邻苯二胺溶液)：pH5.0 磷酸盐-柠檬酸缓冲液： 0.1 M 柠檬酸(19.2 g/L) 24.3 ml、0.2 M Na2HPO4 (28.4 g/L) 25.7 ml、临用时取上述溶液10 ml,加邻苯二胺(OPD) 4 mg,溶解后加入30%H2O2 15 gl;终止液： 2 M H2SO4TE 缓冲液(pH8.0)：10mmol/L1mmol/LTris HCl(pH8.0)EDTA(pH8.0)高压灭菌。10% SDS：10g十二烷基硫酸钠溶于90ml水中，加热至68C溶解，加几滴浓盐酸调pH至7.2,定 容至100ml，过滤除菌。50XTAE缓冲液242 g57.1 ml100 ml54g27.5ml20mlTris冰醋酸0.5 mol/L EDTA(pH8.0)用水定容至1000 ml,用时稀释50倍。5XTBE缓冲液：Tris 碱*硼酸0.5mol/L EDTA(pH8.0)加水定容至1000ml, 0.5 X使用。6XDNA 上样缓冲液：0.25%溴酚蓝*0.25%二甲苯青 FF*30%甘油甲醛凝胶加样缓冲液(DEPC处理水配制)：50%甘油1mmol/L EDTA(pH8.0)0.25 溴酚蓝*0.25 二甲苯青 FF*适量溴化乙锭*20X SSC：氯化钠175.3g柠檬酸钠88.2g蒸馏水900ml溶解后用5N氢氧化钠调pH至7.0,定容至1000ml,高压灭菌保存。预杂交液：6XSSC5XDenhardt 试剂0.5% SDS100ug/ml 经变性并断裂成片段的鲑精 DNA5X甲醛凝胶电泳缓冲液：0.1mol/L MOPS(pH7.0)*40mmol/L 乙酸钠5mmol/L EDTA(pH8.0)*甲醛变性凝胶配方：加入0.7 g琼脂糖到49.7 ml DEPC-H2O中，用煮沸法溶解琼脂糖，待溶液冷却至55C 同时加入7 ml 10XMOPS(0.2 mol/L MOPS pH7.0, 20 m mol/L 乙酸钠, 10 m mol/L EDTA pH8.0)电泳缓冲液和13.3 ml甲醛，摇匀，制板待用。05 mol/L磷酸缓冲液(PH 7.2)134 g Na2HPO4, 4 ml 85% H3PO 4用水定容至 1L。探针标记中的逆转录终止液 1X TEN40 m mol/L Tris-Cl (PH 7.5),1 m mol/L EDTA (PH 8.0),150 m mol/L NaC!洗膜液I 2XSSC，0.1%(m/V) SDS洗膜液II0.1XSSC， 0.1%(m/V) SDSSDS-PAGE 电泳分析所用的试剂：30%丙烯酰胺：29g丙烯酰胺和lgN , N 亚甲基双丙烯酰胺，加入60ml ddH2O,完 全溶解后定容至100ml，过滤，置棕色瓶中备用。Tris-甘氨酸电泳缓冲液：Tris 3.00g，甘氨酸14.4g, SDS lg,调pH至8.3，用水定容至 1L。12%分离胶：ddH2O 3.3ml，30%丙烯酰胺4ml, Tris-HCl (pH8.8) 2.5ml, 10%SDS 0.1ml， 10%过硫酸铵0.1ml, TEMED 0.006ml。5%浓缩胶：ddH2O 1.4ml, 30%丙烯酰胺0.33ml, Tris-HCl (pH6.6) 0.25ml, 10%SDS0.02ml, 10%过硫酸铵0.02ml, TEMED 0.002ml。考马斯亮蓝染色液：乙醇450ml,冰醋酸100ml, ddH2O 450ml,考马斯亮蓝R-250 2.5g。 脱色液(1L)：乙醇450ml，冰醋酸 100ml, ddH2O 450ml。2X上样缓冲液：100mmol/L Tris-HCl (pH6.8), 200mmol/L 二硫苏糖醇(DTT), 4% SDS, 0.2%溴酚蓝, 20%甘油。蛋白纯化所需的缓冲液：Buffer B(pH 8.0)： 8M urea、100 mM NaH2PO4、10mM Tris-ClBuffer C(pH 6.3)： 8M urea、100 mM NaH2PO4、10mM Tris-ClBuffer D(pH 5.9)： 8M urea、100 mM NaH2PO4、10mM Tris-ClBuffer E(pH 4.5)： 8M urea、100 mM NaH2PO4、10mM Tris-Cl 电洗脱缓冲液：SDSTris-Base甘氨酸定容至 1000ml蛋白提取缓冲液：Tris-HCl, pH6.8SDS-疏基乙醇尿素电转移缓冲液：Tris-Base 3.00g,甘氨酸 14.4g, SDS 1g,Western blot所用试剂：0.1-0.5g3g18.8g50mmol/L4.5%7.5%9mol/L甲醇200ml，调pH至8.3，用水定容至1L。1xPBS(pH74)： NaCl 8 g, KCl 0.2 g, KH2PO4 0.24 g, Na2HPO4 1.44g,用蒸馏水溶解 至1 LIxPBST： 5L 1xPBS 中加入2.5ml Tween-20 封闭液：100ml PBS缓冲液中加入5克脱脂奶粉植物基本培养基溶液大量元素(1L)七水硫酸镁370mg磷酸二氢钾170mg硝酸钾1900mg硝酸氨1650mg二水氯化钙440mg微量元素(1L)硼酸6.2mg一水硫酸锰15.6mg七水硫酸锌8.6mg二水钼酸钠0.25mg五水硫酸铜0.025mg六水氯化钴0.025mg碘化钾0.83mg七水硫酸亚铁27.8mg乙二铵二乙酸二钠37.3mg有机(1L)盐酸硫胺素0.5mg盐酸吡哆辛0.5mg烟酸0.05mg肌醇100mgMSs 培养基10 X 大量100ml100 X 微量10ml100X 铁盐10ml500XB5 有机2ml6-BA1mg蔗糖30g琼脂0.8%调 PH5.8 并加水定容至 1LMsr (1L)10 X大量兀素100ml100 X微量元素10ml100XFe 盐10ml500XB5 有机2ml蔗糖3g葡萄糖7g琼脂0.8%PH5.8加水定容至1L水稻转化用培养基培养基成分NB（基本培养基）（刘巧泉等,1998）Nbi（愈伤诱导和继代 培养基） 高渗培养基NBs（筛选培养基）N6大量兀素营养液、EDTA-Fe营养液、B5微量兀素营养液、B5 维生素营养液NB、0.5g/L谷氨酰胺、0.5g/L脯氨酸、0.3g/L水解酪蛋白、30g/L 蔗糖、2mg/L 2,4-D、2.6g/L 植物胶，pH5.8Nbi、47g/L 山梨醇、47g/L 甘露醇，pH5.8NB、0.5g/L谷氨酰胺、0.5g/L脯氨酸、0.3g/L水解酪蛋白、30g/L 庶糖、2mg/L 2,4-D、40mg/L Hyg（第一次师选用量为 50mg/L）、 2.6g/L 植物胶，pH5.8MS（再生培养基）MS 大量兀素营养液、 EDTA-Fe 营养液、 MS 微量兀素营养液、B5维生素营养液、2g/L水解酪蛋白、30g/L蔗糖、30g/L山梨醇、2.0mg/L 6-BA、0.5mg/L NAA、30mg/L Hyg、3.0g/L 植物胶，pH5.8NBr（再生培养基）NB、2g/L 水解酪蛋白、30g/L 蔗糖、30g/L 山梨醇、2.0mg/L 6-BA、0.5mg/L NAA、30mg/L Hyg、3.0g/L 植物胶，pH5.81/2MS（生根培养基）1/2（MS大量兀素营养液+ED1A-Fe营养液+ MS微量兀素营养液）、 B5 维生素营养液、 3g/L 蔗糖、 7g/L 葡萄糖、 40mg/L Hyg、 2.6g/L 植物胶，pH5.8水稻转化用激素和化合物的配制（1） 2,4-D（lmg/ml）:称取lOOmg 2,4-D置于小烧杯内，加少量无水乙醇使之完全溶解后，将 水缓慢加入不停搅拌的2,4-D酒精溶液中，不可出现沉淀，定容至100ml,过滤除菌。6-BA （lmg/ml）：称取100mg 6-BA置于小烧杯内，加少量1M KOH溶解，慢慢加灭菌蒸 馏水至100ml,过滤除菌，4C保存。（3）NAA（1mg/ml）：称取100mg NAA置于小烧杯内，用1M KOH溶解，慢慢加灭菌蒸馏水 至100ml，过滤除菌，4C保存。