TG1感受态细胞使用说明书

TG1感受态细胞使用说明书产品及特点本产品是采用大肠杆菌DH5 a菌株经特殊工艺处理得到的感受态细胞可用于DNA的化学转化。使用pUC19质粒检测本产品，转化效率可达10 8。本产品为dam -，dcm -的菌株，能够排除dam ，dcm甲基化的影响。菌株基因型为：supEhsdA5thi A(latproAB) F+trsD36 proAB +lacIQlacZAM15规格及成分成分编号包装本产品BTN807010.1 mL X 10运输及保存自备试剂使用方法干冰运输、-80C保存，有效期半年。目的DNA、SOC或LB培养基等1. 取感受态细胞置于冰浴中。一次转化感受态细胞的建议用量为50-100儿，可以根据 实际情况分装使用。以下实验以50儿感受态细胞为例。2. 待感受态细胞融化后，向感受态细胞悬液中加入目的DNA （根据实际情况加入适量 的DNA，通常100儿感受态细胞能够被1 ng超螺旋质粒DNA所饱和），用移液器 轻轻吹打混匀，冰浴30分钟。3. 42 C热击45秒，迅速将离心管转移到冰浴中，冰上静置2-3分钟。4. 每个离心管中加入450儿无菌的SOC或LB培养基（不含抗生素），混匀后置于37 C 摇床，150 rpm振荡培养45分钟使菌体复苏。5. 根据实验需求，取适量已转化的感受态细胞，加到含相应抗生素的SOC或LB固体 琼脂培养基上，用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开，将平板置于37 C直至液体被吸收， 倒置培养，37 C培养12-16小时。注意：1. 涂布用量可根据具体实验调整。若转化的DNA总量较多，可取少量转化产物涂布平板; 若转化的DNA总量较少，可取200-300儿转化产物涂布平板。若预计的克隆数较 少，可通过离心（4,000 rpm，2分钟）后吸除部分培养液，悬浮菌体后将其涂布于 平板中。2. 新制备的固体培养基不易涂干，可将平板正置于37 C直至液体被吸收后再倒置培养。3. 涂布剩余的菌液可置于4C保存，如果次日的转化菌落数过少，可以将剩下的菌液再 涂布新培养基进行培养。