《ORCH操作》PPT课件.ppt

美德声 TORCH试剂盒操作演示 1.IgM试验操作 1. 试剂盒从冰箱取出，室温下放置 20-30分钟，恢复到常温。 2.稀释样本 10微升血清加入到 1ml样本稀释液 （ DILSPE）中，稀释比例 1： 101. 我是样本稀 释液 3.配制抗原抗体酶复合物 1.9ml抗原 稀释液 冻干抗原粉 抗原稀释液 酶结合物 100微升酶结合物 混匀 混匀 复合物配制好要一个 小时后才能用哦！最 好在加样前配好 配好后没用完的复合物要放在 -20 保 存 4.制备洗涤液 我是洗液， 根据用量把 我进行 20倍 稀释就好了 5.加样 按以下表格加入样本、阴阳性对照及标准品 1 2 3 4 A 空白 样本 3 样本 11 B 阴性对照 样本 4 C 阴性对照 样本 5 D 标准品 样本 6 E 标准品 样本 7 F 阳性对照 样本 8 G 样本 1 样本 9 H 样本 2 样本 10 不要把我们弄错哦 注：标准品用瓶身上标记的量的蒸馏水溶解，阴阳性 对照不用稀释，直接可用 黄色的是阴性对照 标准品 绿色的是阳性对照 6.第一次孵育 37 ，孵育 60min 7.洗 板 每个微孔用 350洗液，洗 5次 8.加入抗原抗体酶结合物 除了空白孔外， 每个微孔内加入 100微 升之前配制的抗原抗体酶结合物。 9第二次孵育 跟第一次孵育一样，还是 37 ，孵 育 60分钟 10.洗板 跟第一次洗板一样，还是每个微 孔用 350洗液，洗 5次 11.加入色原 /底物 每一个微孔内加 入 100微升，室 温下避光孵育 20 分钟 。 注：计时要从加 第一个孔时开始 哦！ 12.加入终止液 也是每孔加 100微升 终止液可是硫酸 哦，使用时要小 心！ 13.酶标仪读数 在 450nm和 620-630nm波长处判 读结果，阳性结果可做确认实 验进行确认。 结果判读 质控组判断：符合以下判断表示试验过程可靠： A1为空白孔，其 OD值 0.05 B1,C1孔阴性对照 OD平均值小于 0.15； CV值 30% 标准品 S/Co 1.5 阳性对照 OD值 0.75 结果判断： Cut-off值 =阴性对照平均值 +0.25 S/Co 1.0 阴性结果 1.0 S/Co 1.2 灰区 S/Co 1.2 阳性结果 二、 确认试验 1.样本稀释、抗原抗体酶复合物（以下 称 A液）配制跟刚才是一样的。 唯一不同的是 酶复合物 的配制（以下称 B 液） 用抗原稀释液对酶 结合物进行 20倍稀 释就行。 不需要再 加入任何抗原物质！ 2.按下表加样 1 2 3 4 A 空白 样本 3 样本 7 B 阴性对照 样本 4 C 阴性对照 样本 4 D 样本 1 样本 5 E 样本 1 样本 5 F 样本 2 样本 6 G 样本 2 样本 6 H 样本 3 样本 7 3.孵育、洗板 37 孵育 60分钟，然后洗板。（同刚才 的试验是一样的） 4.按下表加入酶复合物 1 2 3 4 A 空白 样本 3（加 B液） 样本 7（加 B液） B 阴性对照 (加 A液 ) 样本 4 （加 A液） C 阴性对照 (加 A液 ) 样本 4（加 B液） D 样本 1（加 A液） 样本 5 （加 A液） E 样本 1（加 B液） 样本 5（加 B液） F 样本 2 （加 A液） 样本 6 （加 A液） G 样本 2（加 B液） 样本 6（加 B液） H 样本 3 （加 A液） 样本 7 （加 A液） 剩下操作和刚才的试验一样 孵育 60min 洗板 加入底物 20min 加入终止液 酶标仪读数 结果解释 结果阴阳性判断同刚才试验也一样 样本 (加 A液 ) 样本 （加 B液） 结果解释 + + 假阳性 + - 真阳性 - -（ +） 检查实验步骤 三 IgG试剂盒的操作 1. 试剂盒从冰箱取出，室温下放置 20-30分钟，恢复到常温。 2.稀释样本 10微升血清加入到 1ml样本稀释液 （ DILSPE）中，稀释比例 1： 101. 我是样本稀 释液 3.加样 按下表加样 ，都为 100微升 （定性实验） 1 2 3 4 A 空白 样本 3 样本 11 B CAL1 样本 4 C CAL1 样本 5 D CAL2 样本 6 E CAL2 样本 7 F CAL6 样本 8 G 样本 1 样本 9 H 样本 2 样本 10 六瓶不同浓度的标准品，无需稀释，直 接可用。 定性试验只用 1、 2和 6号标准品就行 4.孵育 37 ，孵育 60min 5.洗板 每个微孔用 350洗液，洗 5次 6.加入酶标二抗 除了空白孔外，其他孔内都加入 100微升 直接可用，不需 要任何稀释 7.孵育 37 ，孵育 60min 8.洗板 每个微孔用 350洗液，洗 5次 9.加入色原 /底物 每一个微孔内加 入 100微升，室 温下避光孵育 20 分钟 。 注：计时要从加 第一个孔时开始 哦！ 10.加入终止液 也是每孔加 100微升 终止液可是硫酸 哦，使用时要小 心！ 11.酶标仪读数 在 450nm和 620-630nm波长处判 读结果 12.结果判读 质控组判断：符合以下判断表示试验过程可靠 ： A1孔为空白孔，其 450nm处 OD值 0.100 (弓形体、 巨细胞、风疹 )；单疱 1、单疱 2、单疱 1+2 试剂盒 A1孔 0D值 0.05 标准品 1经空白校正后， OD值 0.15;CV值 标准品 1的 OD值 +0.100 标准品 6的 OD值 1.000 结果判断： 定性检测：样本中抗体吸光度低于标准品 2的吸光度时， 为阴性结果；反之，为阳性结果。标准品 2 （ 50IU/ML）被美国国家临床实验标准委员会 （ NCCLS）认为该浓度是 IgG抗体提供有效保护 防止病毒二次感染的最低浓度。 大功告成！ 谢谢