《NPN的鉴别方法》PPT课件.ppt

饲料原料中非蛋白氮 (NPN)的鉴别 山东六和集团技术部 郭吉原 一 .目前 NPN的种类 A 铵盐 (NH4HCO3 、 (NH4)2SO4、 NH4Cl)、 尿素 B 尿素的衍生物 :缩二 脲、磷酸脲、淀粉糊化 尿素 、 脲醛聚合物 (蛋白精 )、 糠醛尿素 、 糖基化尿素 C 叠氮化钙 CaN6 D 三聚氰胺 C3N6H6 脲醛聚合物和三聚氰胺 是目前最常用的 NPN 脲醛聚合物 (蛋白精 )(CP=10元 ),三聚氰胺 (CP=20元 ) 二 .NPN的鉴别 (1)-尿素 试剂 : 1.生黄豆粉 。 将大豆磨成粉末 （ 注意；切勿加热升温 ) 2.酚红： g/L。 称取酚红 （ 苯酚红 ） 0.1g溶于 100ml乙醇中 。 步骤：取约 0.5-2g样品，于 50ml比色管内，再加 约 0.1-0.2g生黄豆粉， 3 5滴酚红， 40ml水，塞 好塞子，摇动 30秒，静止，如溶液变成红色，则 样品中掺入尿素 二 .NPN的鉴别 (1)-尿素 定量分析 : 称样 1-3g于碘量瓶内 ,加生豆粉约 1克 ,准确 加入 100ml水 ,在 30 C摇动 1h,过滤 ,取滤液 50ml于蛋白仪内 ,加 NaOH(30%)10ml,用硼 酸吸收 , 再用盐酸滴定 ,同时做样品和生豆 粉空白 . CP= (V-V0-V01)xCx0.014x6.25 mx50/100 x100 二 .NPN的鉴别 (2)-铵盐 试剂 1. 氢氧化钠溶液 , g氢氧化钠加 ml水 。 2. PH 试纸 步骤：取样品 3-5g于 100ml 烧杯内，表皿内侧沾 一条湿的 PH试纸，向烧杯内加约 5-10ml 氢氧化 钠，将表皿迅速盖上，如试纸迅速变蓝，打开表 皿有很浓的氨味则含铵盐。 二 . NPN的鉴别 (3)-脲醛聚合物 ( 蛋白精 试剂 ：变色酸 2g/L硫酸溶液 称取 0.2g变色酸于干燥的烧杯内 ， 加入 100 ml 浓硫酸 ， 电炉上加热到约 70-80 ， 待溶解后 ， 降 温 ， 移入 120 ml棕色的滴瓶内 。 步骤：将可疑物从显微镜下夹出数粒于干燥的 小烧杯内，滴加约 1 ml变色酸，电炉上加热到刚 刚产生微烟，取下，加入约 30 ml水，若溶液变成 稳定的紫色，则样品中有蛋白精。 二 . NPN的鉴别 (3)-脲醛聚合物 ( 蛋白精 1. 鱼粉肉骨粉除去伪装方法 ： 任何掺假的鱼粉均要做一番伪装 ， 如直接 将经伪装过鱼粉放在显微镜下看很难发现真 实情况 ， 因此镜检前应首先要除去伪装 ， 最 有效的方法就是脱脂 ， 具体做法如下： 鱼粉肉骨粉除去伪装方法 (1) (1) 将少许鱼粉 （ 3-5g ） 用定性滤纸包好 ， 放入索氏脂肪抽提器内 ， 以石油醚作提取剂 ， 脱脂约 30分钟 ， 至石油醚中看不到黄色为止 ， 将纸包取出 ， 水浴上烘干 （ 70-80 ） 。 (2) 将少许鱼粉（ 3-5g ） 放入烧杯内，加入 50ml石油醚，搅拌 2分钟，过滤，将滤渣放回 烧杯，加 50ml石油醚，搅拌 2分钟，过滤。将 滤渣烘干（ 70-80 ）。 鱼粉肉骨粉除去伪装方法 (2) (3) 将少许鱼粉 （ 3-5g ） 放入烧杯内 ， 加丙 酮 50ml搅拌 2分钟 ， 静止 5分钟 ， 将上清液弃去 ， 再加 50ml石油醚搅拌 2分钟 ， 静止 5分钟 ， 弃去 上清液 ， 将下部分的鱼粉烘干 （ 70-80 ） 。 (4) 将少许鱼粉 （ 约 3g ） 放入烧杯内 ,加 3gKOH(NaOH),再 150ml水搅拌后在放电炉煮沸 2 分钟 ,静止 5分钟 ,倒掉上清液 ,用水洗残渣 3-4 次 ,再用丙酮 50ml洗残渣 2-3次 ,残渣用于蛋白 精和含大量粗纤维类物质 (如锯末 、 稻草 、 麦 芽根 )的检测 鱼粉肉骨粉除去伪装方法 (3) (5) 将少许鱼粉 （ 约 3-5g ） 放入分液漏斗 中 ,加四氯化碳 50-80ml,轻轻摇动后静止 5 分钟 ,把分液漏斗活拴打开将沉淀物放到一 小烧杯内 ,之后将小烧杯内沉淀物过滤出来 , 此残渣用于蛋白精的检测 . 请注意：乙醚 、 丙酮 、 石油醚均为易燃品 ， 请在通风的条件下操作 ， 严禁烟火 。 三 .其它 定性检查 的方法 A . 掺入植物类物质 （ 如小麦麸、稻谷壳、粉丝蛋白粉） 试剂： 碘 -碘化钾溶液 称 1g的碘及 5g碘化钾于烧杯内 ， 加 100ml水搅拌 2 分钟 ， 待溶解后将其移入 120ml棕色的滴瓶内 。 步骤：取约 5g样品放在烧杯内，加约 70ml水，在电 炉上煮沸，取下静止 2分钟，滴加碘碘化钾试剂 - 2ml， 如溶液变成蓝色则掺入植物性的物质 三 .其它 定性检查 的方法 B.掺入植物性物质 （ 含大量粗纤维类物质：如锯末、稻草、麦芽根 ） 试剂： 1.间苯三酚 20g/L 称间苯三酚 2g加 100ml 95% 乙醇 ， 溶解后放入棕色滴瓶 2.浓盐酸 36% 分析纯 步骤：称 1-2g鱼粉于培养皿内，滴加间苯三酚使样 品湿润，放置 5-10分钟后，滴加浓盐酸约 0.5ml， 放置 2-3分钟，如样品显现深红色，则样品中含木 质素，在显微镜下进一步确认为何物。 三 .其它 定性检查 的方法 C.掺入皮革粉 试剂 : 1 .稀硫酸 2mol/L 将取 10ml浓硫酸慢慢加入到 90ml水中 。 2 .二苯基卡巴腙 2g/L 称 0.2g二苯基卡巴腙 ， 加入 100ml95%乙醇 ， 溶 解后 ， 移入棕色滴瓶内 。 步骤：取 1-3 g鱼粉于坩埚内 ， 在电炉上炭化 ， 再 放在马弗炉内于 550-600 下灰化 2小时 ， 取出 ， 降 温后 ， 加入稀硫酸 10ml搅拌 ， 加二苯基卡巴腙 5-10 滴 ， 如溶液显紫红色则样品中含皮革粉 。 四 .目前真蛋白测定中的问题 1.真蛋白的测定方法 水洗法 三氯乙酸法 碱性硫酸铜法 重金属盐沉淀法 四 .目前真蛋白测定中的问题 2. 这类方法的特点 能查出水溶性的 NPN 如 :铵盐 、 尿素 、 磷酸脲 对水不溶性的 NPN查不出。 如 :脲醛聚合物 (蛋白精 )、 糠醛尿素 、 淀粉糊化 尿 素 、 缩二 脲 、 糖基尿素 、 三聚氰胺 花生粕等本身就有 3-7个 CP是水溶的 .检测数据 汇总 花生粕水溶性蛋白试验 .xls 四 .目前真蛋白测定中的问题 不论掺什么 NPN都盲目的测真 蛋白将会错检 、 误检 、 漏检 四 .目前真蛋白测定中的问题 3.赖氨酸复合饲料的真蛋白 ? 玉米用亚硫酸 浸 12-48h 粗粉碎 胚芽 玉米皮分离 离心分离 膜过滤 淀粉 玉米胚芽 玉米皮 玉米蛋白粉 葡萄糖 淀粉酶 赖氨酸 Lys渣 Lys高蛋白 Lys98%,65% Lys复合饲料 Lys蛋白 玉米皮稻谷壳 含 NH3废水 Lys菌种及杂菌 赖氨酸菌种 NH3 1# 2# 3# 4# 1# 2# 3# 4# 5# Lys 4.95 4.66 5.82 3.70 NH3 3.01 3.00 3.18 3.30 Met 0.36 0.32 0.32 0.27 CPNH3 15.5 15.4 16.4 17.0 Thr 0.47 0.48 0.41 0.45 CP 39.8 37.4 36.4 36.1 Cys 0.35 0.27 0.28 0.31 CF 8.48 10.45 10.44 9.07 Glu 1.70 1.88 1.44 1.80 EE 2.43 Ile 0.49 0.44 0.33 0.40 总能 Cal/g 3826 3942 3916 Leu 1.20 1.12 0.84 1.15 AFB1 ppb 18.2 6 Ala 0.99 1.00 0.79 0.94 DON ppm 4.1 0.9 3.0 His 0.18 0.35 0.28 0.36 F- 2ppm 1627 1552 AA 16.4 15.4 14.6 14.5 赖氨酸复合饲料的质量情况汇总 赖氨酸复合饲料的质量特点 游离氨 NH3高 3% CPNH3=15-17% ,AA=14-16%,CP=36-39% CPNH3 CP 组成 :玉米皮 +赖氨酸生产过程的含氨废水 霉菌毒素的残留高 F-2=1500-5000ppb DON=1-3ppm AFB1=15- 50ppb 40% 四 .目前真蛋白测定中的问题 赖氨酸蛋白 (外观 : 褐色或黑色小球 ) 2种赖氨酸菌体 蛋白的对比 3.如何测真蛋白 ? 判断是否掺假 (NPN)-镜检 、 定性分析。 根据 NPN的种类决定采用什么方法 AA总和 最有效的方法 三氯乙酸法 、 碱性硫酸铜法 、 重金属盐沉 淀法 、 水洗法 四 .目前真蛋白测定中的问题 3.如何测真蛋白 ? 掺微量的 NPN(调蛋白 1 5个百分点 ),氨 基酸分析也难查出 ,只有用其它方法检测 如 :镜检 、过筛测定 CP 、定性分析 测真蛋白要根据具体情况定方法 ,决不 能教条主义 四 .目前真蛋白测定中的问题 3.如何测真蛋白 AA法 -最有效 四 .目前真蛋白的测定中的问题 五 .鱼粉 (1) 鱼粉和鱼排粉有下面 2个问题 真假 的问题 好坏 的问题 (2) 解决问题的方法 真假 镜检 、 AA 、 N I R、 定性和常规检测分析 上述这些方法已能解决真假的问题 五 .鱼粉 好坏 -是现在碰到最多的问题 鱼粉的好坏与鱼粉的种类有关 白鱼粉 蒸汽鱼粉 直火鱼粉 蒸干鱼粉 (下杂鱼粉 ,鱼干粉 ) 直火鱼粉常含少部分 (10-20%)过热成分 质量差的直火鱼粉有时含 40-50%的烧焦鱼 粉 ,也可能是掺入的自燃鱼粉 . 直火干燥鱼粉。样品 经脱脂处理。可见很 多颗粒被火燎焦糊了 直火干燥鱼粉。样品经 脱脂处理。可见被火燎 焦糊的颗粒 五 .鱼粉 鱼粉的好坏与鱼粉的新鲜度有关 新鲜度指标 : 感观 、 气味 、 VBN、 组胺 、 酸价 、 过氧化 值 、 TBA 蒸干鱼粉 ,下杂鱼粉 ,鱼干粉的新鲜度最差 含鱼溶浆多的鱼粉新鲜度也差一些 感观难看和气味难闻的鱼粉新鲜度很差 五 .鱼粉 (1) 乳猪料用蒸汽鱼粉 ,禁用蒸干鱼粉 (下杂鱼 粉 , 鱼干粉 ),最好不用直火鱼粉 . (2) 6 9月减少国产鱼粉用量 ,多用进口鱼粉 , 其它时间增大国产鱼粉用量 . (3) 进口鱼粉也逐渐象国产鱼粉一样掺假的手 段及方法 谢 谢 大 家