花青苷种类、提取及检测

花青苷种类、提取及检测一. 种类花色素均具有类黄酮的基本结构，由两个苯环和一个含氧杂环组成的(C6-C3-C6)C15化合 物(如图)，根据 B 环羟基化和甲基化位置和数目的不同而将花色素主要分为六类:天竺葵色素 (Pelargonidin)、矢车菊色素(cyanidin)、芍药色素(peonidin)(3/ -甲基矢车菊色素)、飞燕草色素 (delphinidin)、矮牵牛色素(petunidin)(37 ,5，-甲基飞燕草色素)和锦葵色素(malvidin)(3，,5，-二 甲基飞燕草色素)。不同植物中花色素发生糖苷化的位点(C3、C5和C7位等)和数目的差异， 及酞化程度的不同使植物中存在着不同的花色素普，其结构复杂，但都以这六种花色素为基 本结构(Grotewold, 2006)。関1.1就色素基本化学蜡絢天竺葵色跆R1=H. R2=Hl矢车荊色索：RI=0H,R2=H：飞離申色熱RI=O比 Et2=OHFlf. LI ChmkaJ srnicture vf untbxyiiDlTis- Fdaigonidin： R2=H； Cyuiidin： Kl=OH, R2=H； Dtlphinidin：二. 提取国内外学者对花青苷的提取做了大量研究，提取目的及目标花青苷不同，提取方法略有 差异。花青苷易溶于水、甲醇、乙醇等极性溶液，花青苷的稳定性受酶、温度、氧气、光、 pH值、金属离子等理化性质的影响，在中性和碱性条件下不稳定。提取过程常采用酸性溶液，酸能够破坏植物细胞膜并溶解水溶性色素，甲醇溶液提取效 率高于乙醇及水溶液。花青苷一般用于食品着色，考虑到甲醇的不安全因素，一般选用体积 分数为1%的乙醇溶液。采用盐酸酸化可保持提取液pH值较低，阻止无酰基花青苷的降解。随着盐酸被浓缩， pH 值升高，导致花青苷的降解。为获得更接近于天然状态的花青苷，采用弱有机酸或中性溶剂做初步提取，弱有机酸多用甲酸、乙酸、丙酸、柠檬酸和酒石酸，中性溶剂一般采用丙酮作提取剂。粗提后的花青苷提取液浓度很低，浓缩时一般不超过 40C,时间也不宜太长 1.植色素苻和类黄酮、总酚的測定参照Pirelli等的方法略作修改，O.lg叶片， 洗净，用5ml的0.1S6HCL甲（V/V）4DC浸提24九 测定提取液在530nm色素科）、 320 nm（类黄酮）和2S0nm （总酚的吸光值。作为一个花色素昔单位， U=OD325/g.Fw作为一个类黄酮单位，U=ODSD/g.Fw作为一个总酣单位。2.花青苷含量的测定：用0.1%。的盐酸甲醇浸提叶片2h后,测657nm、530nm处的吸光度。3.花色背的测定秦考仝月澳等（1982的方法，将叶片取回，洗净，擦 干，剪碎后，采用1.5HC1 :聽乙醇=1舌：跖/v）混合液，在黑暗条件下浸提24 h,后用岛津UV-2450紫外可见分光光度计检測5站 即 波长的光密度值，参照胡位荣等C004）的计算方法进行花色背含量的计 算。叶緑素去b和类胡萝卜素的含量参照Lichtenthaler等0983的方4.花青昔的主要吸收峰是5和tie左右，叶媒素的吸收峰是在660mn左右、几种提取槪比较的结果表 明，曲乙諒工】5moMLHCl=85 : 1&的混合液所提耽的色索的主要吸收峰与花青昔和叶尿累的吸枚 峰相吻合，并且对色索的捷取敷果较好+枚选择95歸乙醇；k5mol/LHCl-85 15的混合液作为以后5.结杲表明对提取影响最大的是pH,其次为乙醇浓度，料液比、提取时间。最佳提取条 件拘：浓度旳坯、pH=1的乙椁溶液为提取剂，料液比1： 50?提取时间60 mm.（3）紫外可见光谱分析纯化后的紫甘蓝色素，在28 nm. 323 nm和RO nm处的 吸收峰说明紫甘蓝色素属于花青昔类物质，且含有醸基化的花青昔，色素的性质比普通 花青苗稳定*2. 2 测定方法2- 2. 1 样品处理将含猖花青素的植物叶片（鲜）用剪刀剪成12mm畔片*准确称量1OOg,置于50mL三角瓶屮衣加人10mL 0. lmol/L盐酸溶液杯口用封 口膜扎紧以防水分茨发T*32 C忸温培养箱中没 提4讥 不时摇荡。取出过滤.滤液作为待测溶液。2. 2. 2测定用Lem比色皿，在TU 1221型紫外可见光分光光度计上于530nm处测定其吸光度（A）,以0* Imoi/L盐酸溶液作为空白对照.2. 2. 3 计算设每 览样品在10nJ. 0. lmol/k盐酸溶液中 的浸提液的吸光度A = 0l 一个花育素单位以 此比较花肯素的相对含量“花青素含量（花青素单位/ 10mL a lmol/L 盐酸）=10A13式中，10将吸光度换算成为花育素单位A测得的吸光度H稀释倍数7.花色甘芒中性和弱碱性潛液中不禾稳定:囚此.提取过程通常要采用酸性潛剂*对丁提取溶剂:甲醇是最佳选择，因为 甲醇提取效車比乙醇高20嚅，比水高73%25 o酸性洛剂在破坏植物細胞膜的冋吋濬解水溶性色素。最常用的提取洛剂是 1%的盐酸甲醇潘液J隹是用丁食品着色时，考虑到甲醉的毒性，可以选择的盐酸乙醇潘液。花色昔的最大吸收区在5W、静Otm范围内，而講这一范围最近的类黄酮的最大吸收范围在肖50弼跖m在新鲜的植 物提取物中，因为很少含有在花色昔的最人吸收区发生吸收的干扰物质,花色昔总量可以利用比耳定量通过适当波长处的 吸光度来测定罔-2. 1,3花青素的提取及其含量的分光光度法测定剪取硫灯或亂灯光照培养34d(4片真叶期)的番茄幼苗真叶0.5g经过液氮冷冻 然后用研钵研成细粉口加L2mol/LHC15mt提取花青素忆叽在530imi处测定提取液的 光吸收(A530).换算成单位鲜重叶片在530mn波长的光吸收(A5S0/g FW)来表示叶片 中花青素相对含量。9.3花青秦的提取和鉴别花青素分子中存在高度分子井窥体系，具有 酸性与碱性基团，易溶于水=甲醇、乙醇等极性 溶和中。通常用含有少量盐酸或甲酸的甲醇做溶 剂提取，其中的酸能防止非酰基化的花色昔的降 解，黙而在蒸发浓缩时这些酸会导致色素的降 解。在一些植物中，少量的酸会使联基化的花色 昔部分或全部的水解。ReviLla在1夕溯年对从葡萄 中提取花青素的峯种方法进行了比较实验，证明 当溶剂中的HC1达到0- 12mOlH时就能使酰基化 的花色苜部分水解2=后来，用丙酮提取花青 素，与用酸性甲醇相比，用丙酮提取效果更好， 消除了果胶的影响，并且提取温度低W对于三. 检测紫外一可见光谱是花青苷结构鉴定的经典方法，其鉴定方法为：花青苷有2个最大吸 收波长,500540nm附近及27nm附近，据此可判定是否为花青苷色素；若B环有邻位酚羟基，则向体积分数 0.01%盐酸-甲醇溶液中滴加 35 滴 AlCl ，甲醇或乙醇溶液时会出现蓝移；3糖苷位置可据花青苷吸光度比值A /A 判定；在波长300330nm间有吸收峰，表明存440 max在酰基；若在波长440n处有肩峰，则5号位羟基没被取代；若在紫外光下有荧光，表明在 5 号位有取代基。(取代基位置参考下图)H图1花青素的耳本结构表1伍种常见花青素的结构特点英文名駅代物y天些葵色素PelargonidinHH矢车菊色素CyanidinOHH飞燕草色素DelphinidinOHOH芍药色素PeonidinOKiH牵牛花色素PetunidinOMeOH鶴英色素MaliidinOKfeOMe本文档部分内容来源于网络，如有内容侵权请告知删除，感谢您的配合！