第十三章莨菪烷类抗胆碱药物的分析

第十三章第十三章莨菪烷类抗胆碱药物的分析莨菪烷类抗胆碱药物的分析第一节第一节 莨菪烷类药物的结构和性质莨菪烷类药物的结构和性质一、典型药物一、典型药物NH3COOOHHH2SO4H2H2O硫酸阿托品硫酸阿托品（消旋体）（消旋体）NH3COOOHHH2SO4H*NH3COOHHBrOHOH3H2O*硫酸莨菪碱硫酸莨菪碱（左旋体）（左旋体）氢溴酸东莨菪碱氢溴酸东莨菪碱（左旋体）（左旋体）22二、主要理化性质二、主要理化性质1.1.水解性水解性 酯结构，易水解酯结构，易水解2.2.碱性碱性 五元脂环上叔胺氮原子，具碱性五元脂环上叔胺氮原子，具碱性3.3.旋光性旋光性 含不对称碳原子，呈左旋体含不对称碳原子，呈左旋体第二节第二节 鉴别试验鉴别试验一、一、VitailiVitaili 反应（托烷类生物碱）反应（托烷类生物碱）生物碱生物碱水解水解莨菪酸莨菪酸发烟硝酸发烟硝酸 三硝基衍生物三硝基衍生物KOHKOH（C C2 2H H5 5OHOH）固体固体KOHKOH有色的醌型产物有色的醌型产物深紫色深紫色二、与硫酸二、与硫酸-重铬酸钾的反应重铬酸钾的反应 本类药物水解后，生成的莨菪酸，可与硫酸本类药物水解后，生成的莨菪酸，可与硫酸和重铬酸钾在加热的条件下，发生氧化反应，生成和重铬酸钾在加热的条件下，发生氧化反应，生成苯甲醛，而逸出类似苦杏仁的臭味。苯甲醛，而逸出类似苦杏仁的臭味。HOOCOHHOOC-H2O(H2SO4)CH2CHO2O2+2CO2 +H2O 沉淀反应沉淀反应 与生物碱沉淀试剂反应与生物碱沉淀试剂反应 阿托品阿托品+氯化汞氯化汞 黄色沉淀黄色沉淀 东莨菪碱东莨菪碱+氯化汞氯化汞 白色复盐沉淀白色复盐沉淀三、与生物碱显色剂或沉淀剂的反应三、与生物碱显色剂或沉淀剂的反应四、光谱鉴别法四、光谱鉴别法1.1.紫外光谱法紫外光谱法2.2.红外光谱法红外光谱法五、色谱法五、色谱法 TLCTLC、HPLCHPLC、GCGC、PCPC六、硫酸盐和溴化物的反应六、硫酸盐和溴化物的反应硫酸盐的鉴别反应硫酸盐的鉴别反应溴化物的鉴别反应溴化物的鉴别反应供试品溶液供试品溶液硝酸银硝酸银淡黄色淡黄色氨试液氨试液稀硝酸稀硝酸微溶微溶氯试液氯试液稀硝酸稀硝酸不溶不溶溴游离溴游离三氯甲烷三氯甲烷黄色或红棕色黄色或红棕色第三节第三节 特殊杂质与检查特殊杂质与检查 1.1.酸度酸度 5%5%水溶液的水溶液的pHpH值为值为4.04.05.55.5，来控制本品中酸性杂质。，来控制本品中酸性杂质。2.2.其他生物碱其他生物碱一、氢溴酸东莨菪碱中特殊杂质检查一、氢溴酸东莨菪碱中特殊杂质检查本品水溶液本品水溶液+氨试液氨试液不混浊不混浊合格合格混浊混浊存在其他生物碱存在其他生物碱+KOH+KOH试液试液混浊（东莨菪碱）混浊（东莨菪碱）3.3.易氧化物易氧化物 二、硫酸阿托品中有关物质的检查二、硫酸阿托品中有关物质的检查 硫酸阿托品为消旋体，无旋光性，而莨菪硫酸阿托品为消旋体，无旋光性，而莨菪碱为左旋体，可利用旋光度测定法对莨菪碱为左旋体，可利用旋光度测定法对莨菪碱杂质进行检查。碱杂质进行检查。ChPChP采用采用HPLCHPLC法检查硫酸阿托品的有关物质。法检查硫酸阿托品的有关物质。第四节第四节 含量测定含量测定一、酸性染料比色法一、酸性染料比色法（一）（一）原理原理 在适当在适当pH溶液中溶液中 有机相(BH+In-)水相(BH+In-)+HIn H+In-+B H+BH+1.1.水相中反应水相中反应2.2.有机溶剂提取有机溶剂提取 离子对离子对BHBH+InIn-被有机溶剂提取，使有机相被有机溶剂提取，使有机相呈色，剩余的酸性染料留于水相。呈色，剩余的酸性染料留于水相。3.3.比色法测定比色法测定（1 1）定量分离出有机提取液，脱水后，测定）定量分离出有机提取液，脱水后，测定A A，求出有机碱含量，求出有机碱含量（2 2）定量分离出有机提取液，脱水后，碱化，）定量分离出有机提取液，脱水后，碱化，则水相呈色，测定水相中则水相呈色，测定水相中InIn-的吸收度，间的吸收度，间接求出有机碱的含量接求出有机碱的含量 BHBH+InIn-+OH+OH-B+HB+H2 2O+InO+In-（3 3）定量分离出有机提取液，脱水后，酸化，）定量分离出有机提取液，脱水后，酸化，则水相呈色，测定水相中则水相呈色，测定水相中HInHIn的吸收度，间的吸收度，间接求出有机碱的含量接求出有机碱的含量 BHBH+InIn-+H+H+BH BH+HIn+HIn（二）影响因素（二）影响因素1.1.水相的最适水相的最适pHpH值值 如果水相如果水相pHpH值过小，酸性染料几值过小，酸性染料几乎仍以分子状态存在；如果水相乎仍以分子状态存在；如果水相pHpH值过大，则生物值过大，则生物碱几乎全部以游离碱的形式存在碱几乎全部以游离碱的形式存在 要求：要求：能使有机碱全部以盐的形式存在，酸性染料能够解能使有机碱全部以盐的形式存在，酸性染料能够解离成离子，以便它们定量地结合成离子对而转溶于离成离子，以便它们定量地结合成离子对而转溶于有机相，且又能将剩余的染料完全保留在水相。有机相，且又能将剩余的染料完全保留在水相。B +H+B H+H I n H+I n H+O H O H H+pH（酸性）（酸性）BH+，InBH+In-，有机溶剂提取的是，有机溶剂提取的是HIn pH（碱性）（碱性）In-，BH+BH+In-，有机溶剂提取的是，有机溶剂提取的是B水相水相pH的选择方法：的选择方法：理论计算理论计算 实验求得实验求得 用待测的有机碱加入一定的酸性染料，配制成用待测的有机碱加入一定的酸性染料，配制成一系列不同一系列不同pH值的溶液，分别用有机溶剂提值的溶液，分别用有机溶剂提取后测定有机溶剂提取液的吸收度，吸收度值取后测定有机溶剂提取液的吸收度，吸收度值最大的溶液所对应的最大的溶液所对应的pH值就是水相的最佳值就是水相的最佳pH值。值。2.2.酸性染料的选择酸性染料的选择 与有机碱定量地结合；与有机碱定量地结合；生成的离子对在有机相中溶解度大并在最大生成的离子对在有机相中溶解度大并在最大吸收波长处有较大吸收度；吸收波长处有较大吸收度；酸性染料本身在有机溶剂中不溶或很少溶解。酸性染料本身在有机溶剂中不溶或很少溶解。常用：常用：溴甲酚绿、溴甲酚绿、溴麝香草酚蓝（溴麝香草酚蓝（BTBBTB）等）等CH3CCH3BrBrHO(CH3)2HCSO3HCH(CH3)2Ol溴麝香草酚蓝溴麝香草酚蓝(BTB)lbrom thymol bluelpH 6.07.6（黄（黄蓝）蓝）磺酞类指示剂磺酞类指示剂CBrBrBrBrHOCH3CH3SO3HOl溴甲酚绿溴甲酚绿(BCG)lbrom cresol greenlpH 3.65.2（黄（黄蓝）蓝）CBrBrBrBrHOCH3CH3SO3HOCBrBrBrBrHOSO3HOl溴甲酚绿溴甲酚绿(BCG)lbrom cresol greenlpH 3.65.2（黄（黄蓝）蓝）l溴酚蓝溴酚蓝(BPB)lbromophenol bluelpH 3.84.6（黄（黄紫）紫）3.3.有机溶剂的选择有机溶剂的选择 CHClCHCl3 3、CHCH2 2ClCl2 2 4.4.水分的影响水分的影响 严防水分的混入严防水分的混入 有机层可加入无水硫酸钠等脱水剂或经干有机层可加入无水硫酸钠等脱水剂或经干燥滤纸滤过燥滤纸滤过5.5.有色杂质的排除有色杂质的排除（三）特点（三）特点1.1.选择性高选择性高 （选用适当（选用适当pHpH缓冲液可消除干扰）缓冲液可消除干扰）2.2.灵敏度高、供试品用量少灵敏度高、供试品用量少3.3.准确度差，不能用于原料药的测定，只能准确度差，不能用于原料药的测定，只能用于制剂分析用于制剂分析实例实例1 1：氢溴酸山莨菪碱片测定：氢溴酸山莨菪碱片测定 氢溴酸山莨菪碱溴甲酚绿氢溴酸山莨菪碱溴甲酚绿 BHBH+InIn-(黄色黄色)maxmax420nm(CHCl420nm(CHCl3 3)，测，测A A 与与1.1401.140相乘即得相乘即得C C1717H H2323NONO4 4HBrHBr3H3H2 2O O 6.3pH140.129.38634.440342317242317HBrNOHCOHHBrNOHC换算因数实例实例2 2：莨菪碱与东莨菪碱混合物的测定：莨菪碱与东莨菪碱混合物的测定：莨菪碱莨菪碱pKpKb b4.35 4.35 东莨菪碱东莨菪碱 pKpKb b6.56.5在在pH6.6pH6.6，用，用BCPBCP测定莨菪碱，东莨菪碱不能成盐，测定莨菪碱，东莨菪碱不能成盐，故不能形成离子对；故不能形成离子对；在在pH5.6pH5.6，用，用BTBBTB测定总量。测定总量。OC=OCH-PhHOCH2N-CH3OC=OCH-PhHOCH2ON-CH3二、非水溶液滴定法二、非水溶液滴定法 硫酸二元酸，在冰醋酸介质中，发生一硫酸二元酸，在冰醋酸介质中，发生一级解离，生产级解离，生产HSOHSO4 4-硫酸阿托品与高氯酸反应摩尔比硫酸阿托品与高氯酸反应摩尔比1:11:1OCOCHCH2OHN CH3.H2SO4.H2O2（BHBH+）2 2 SO SO4 42-2-+HClO+HClO4 4BHBH+ClO ClO4 4-+BH+BH+HSO HSO4 4-三、三、HPLCHPLC法法 离子对色谱法离子对色谱法 分析碱性离子对试剂分析碱性离子对试剂 戊烷磺酸钠、庚烷磺酸钠、十二烷基磺酸钠戊烷磺酸钠、庚烷磺酸钠、十二烷基磺酸钠 高氯酸、三氯乙酸、磷酸、十二烷基硫酸钠高氯酸、三氯乙酸、磷酸、十二烷基硫酸钠 分析酸性离子对试剂分析酸性离子对试剂 四丁基溴化铵、四丁基氢氧化铵四丁基溴化铵、四丁基氢氧化铵