孙老师药品质量标准分析方法验证

药品质量标准分析方法验证天津市药品检验所化学室孙悦2012.12l概述l方法验证的一般原则l涉及的三个主要方面l方法验证具体内容l方法再验证l方法验证的评价l应用实例概述l分析方法验证的目的对药品进行质量控制是保证药品安全、有效的基础和前提。多角度多层面来控制药品质量。保证用药安全、有效、质量可控。概述l分析方法验证的作用分析方法验证是质量研究和质量控制的重要组成部分。分析方法验证的本质-证明自己概述l需要进行验证的情况建立药品质量标准时药品生产工艺变更制剂组分变更方法验证的一般原则l原则上每个检验项目均需要进行方法验证。l实际操作上应根据检测项目的要求，结合所采用的分析方法的特点确定。l同一分析方法用于不同的检验项目会有不同的验证要求。方法验证涉及的三个主要方面l需要验证的检测项目检测项目定义：为控制药品质量，保证药品安全有效而设定的测试项目。分类 鉴别 杂质检查（限度试验、定量试验）定量测定（含量测定、溶出度、释放度等）其他特定检测项目：粒径分布、旋光度等。方法验证涉及的三个主要方面l分析方法分析方法原理仪器及仪器参数、试剂、系统适用性试验等供试品溶液制备、对照品溶液制备、测定、计算。测试结果的报告方法验证涉及的三个主要方面l验证内容专属性线形、范围、准确度、精密度检测限、定量限、耐用性系统适用性试验等方法验证的具体内容l专属性定义：系指在其他成分（如杂质、降解物、辅料等）可能存在下，采用的分析方法能够正确鉴定、检出被分析物质的特性。需要考察专属性的的项目：鉴别 杂质检查 含量测定方法验证的具体内容l专属性 鉴别反应 鉴别试验应确证被分析物符合其特征。专属性试验要求证明能与可能共存的物质或结构相似化合物区分，需确证含被分析物的供试品呈正反应，而不含被测成分的阴性对照呈负反应，结构相似或组分中的有关化合物也应呈负反应。方法验证的具体内容l专属性 杂质检查为何要作专属性-作为纯度检查，所采用的分析方法应确保可检出被作为纯度检查，所采用的分析方法应确保可检出被分析物中杂质的含量分析物中杂质的含量。试验方法 杂质可获得的情况下杂质可获得的情况下-向供试品中加入一定量的杂质向供试品中加入一定量的杂质 在杂质不能获得的情况下在杂质不能获得的情况下-采用另一种合理但分离或检测原理不同的采用另一种合理但分离或检测原理不同的 方法方法 将供试品破坏后与破坏前比较将供试品破坏后与破坏前比较方法验证的具体内容l专属性 含量测定含量测定目的-得到供试品中被分析物的含量或效价的准确结果得到供试品中被分析物的含量或效价的准确结果。试验方法 杂质可获得的情况下杂质可获得的情况下-向供试品中加入一定量的杂质向供试品中加入一定量的杂质 在杂质不能获得的情况下在杂质不能获得的情况下-采用另一种合理但分离或检测原理不同采用另一种合理但分离或检测原理不同 的方法的方法 将供试品破坏后与破坏前比较，必要时将供试品破坏后与破坏前比较，必要时 进行色谱纯度检查。进行色谱纯度检查。方法验证的具体内容l线性定义：系指在设计的测量范围内，检品结果与供试品系指在设计的测量范围内，检品结果与供试品中被分析物的浓度（量）直接呈线性关系的程度。中被分析物的浓度（量）直接呈线性关系的程度。特点：线性是定量测定的基础，凡涉及定量测定的项线性是定量测定的基础，凡涉及定量测定的项目均需要验证线性。目均需要验证线性。试验方法：应在设计的应在设计的测定范围测定范围内测定线性内测定线性关系关系 分别精密称样，分别精密称样，制备一系列被测制备一系列被测 物质浓度系列进行物质浓度系列进行 测定。测定。至少制备至少制备5个浓度个浓度 以测得的响应信号作为被测物浓度的以测得的响应信号作为被测物浓度的 函数作图，观察是否呈线性。函数作图，观察是否呈线性。用最小二乘法进行线性回归用最小二乘法进行线性回归方法验证的具体内容l范围定义：系指能够达到一定的准确度、精密度和线性，测系指能够达到一定的准确度、精密度和线性，测试方法适用的试样中被分析物高低限浓度或量的区间。试方法适用的试样中被分析物高低限浓度或量的区间。特点：范围是规定值，在试验研究开始前应确定验证的：范围是规定值，在试验研究开始前应确定验证的范围和试验方法。范围和试验方法。试验方法试验方法：可采用符合要求的原料药配制成不同的浓度，：可采用符合要求的原料药配制成不同的浓度，按照相应的测定方法进行试验。按照相应的测定方法进行试验。方法验证的具体内容不同项目范围的确定-原则上应根据分析方法的具体应用原则上应根据分析方法的具体应用和线性、准确度、精密度结果和要求确定。和线性、准确度、精密度结果和要求确定。含量测定：应为测试浓度的含量测定：应为测试浓度的80%120%。制剂含量均匀度：应为测试浓度的制剂含量均匀度：应为测试浓度的70%130%。溶出度：范围为限度的溶出度：范围为限度的20%，如规定限度范围，则应为下，如规定限度范围，则应为下限的限的-20%至上限的至上限的+20%。释放度：如规定限度范围为，从释放度：如规定限度范围为，从1小时后为小时后为20%至至24小时后为小时后为90%，则验证范围为，则验证范围为 0%110%。杂质：范围应根据初步实测结果，拟定出规定限度的杂质：范围应根据初步实测结果，拟定出规定限度的+20%。方法验证的具体内容l准确度定义：系指用该方法测定的结果与真实值或认可的参系指用该方法测定的结果与真实值或认可的参考值之间的接近程度，有时也称真实度。一般用回收率考值之间的接近程度，有时也称真实度。一般用回收率（%）表示。）表示。特点：是定量测定的必要条件，因此涉及到定量测定是定量测定的必要条件，因此涉及到定量测定的检测项目均需要验证准确度。的检测项目均需要验证准确度。试验方法：一般制备一般制备3个不同浓度的试样，各测定个不同浓度的试样，各测定3次，共次，共9次，报告已知加入量的回收率或测定结果平均次，报告已知加入量的回收率或测定结果平均值与真实值之差及其可信限。值与真实值之差及其可信限。方法验证的具体内容l需要进行准确度验证的项目含量测定：原料药：使用已知纯度的对照品或符原料药：使用已知纯度的对照品或符 合要求的原料药合要求的原料药进行测定；或用本法测定结果与已建立准确度的另一方进行测定；或用本法测定结果与已建立准确度的另一方法的测定结果进行比较。法的测定结果进行比较。制剂：可用含已知量被测物的各组分混合物进行测定。制剂：可用含已知量被测物的各组分混合物进行测定。如不能得到制剂的全部组分，可向制剂中加入已知量的如不能得到制剂的全部组分，可向制剂中加入已知量的被测物进行测定，必要时与已建立准确度的方法比较结被测物进行测定，必要时与已建立准确度的方法比较结果。果。方法验证的具体内容杂质定量试验可向原料药或制剂中加入已知量杂质进行测定可向原料药或制剂中加入已知量杂质进行测定与另一成熟的方法进行比较。与另一成熟的方法进行比较。相对响应因子问题：如果不能得到，可采用二极管阵列相对响应因子问题：如果不能得到，可采用二极管阵列检测器测定紫外光谱，当杂质的光谱与主成分相似，则检测器测定紫外光谱，当杂质的光谱与主成分相似，则可采用原料药的响应因子近似计算杂质含量（自身对照可采用原料药的响应因子近似计算杂质含量（自身对照法）。法）。应明确表明单个杂质和杂质总量相当于主成分的重量比应明确表明单个杂质和杂质总量相当于主成分的重量比或面积比。或面积比。方法验证的具体内容l精密度定义：系指在规定的测试条件下，同一均质供试品，系指在规定的测试条件下，同一均质供试品，经多次取样进行一系列检测所得结果之间的接近程度经多次取样进行一系列检测所得结果之间的接近程度（离散程度）。（离散程度）。表示方式：偏差、标准偏差、相对标准偏差。偏差、标准偏差、相对标准偏差。三个考察层次：重复性、中间精密度、重现性。重复性、中间精密度、重现性。方法验证的具体内容重复性定义：系指在同样的操作条件下，在较短时间间隔内，系指在同样的操作条件下，在较短时间间隔内，由由同一同一分析人员测定所得结果的精密度。分析人员测定所得结果的精密度。测定方法：在规定范围内，至少用在规定范围内，至少用9次测定结果进行次测定结果进行评价，如制备评价，如制备3个不同浓度的试样，各测定个不同浓度的试样，各测定3次，或次，或100%的浓度水平，用至少测定的浓度水平，用至少测定6次的结果进行评价。次的结果进行评价。方法验证的具体内容中间精密度定义：系指在同一实验室，由于实验室内部条件改变，系指在同一实验室，由于实验室内部条件改变，如时间、分析人员、仪器设备、测定结果的精密度。如时间、分析人员、仪器设备、测定结果的精密度。变动因素：验证设计方案中的变动因素一般为日期、验证设计方案中的变动因素一般为日期、分析人员、设备。分析人员、设备。方法验证的具体内容重现性定义：系指不同实验室之间不同分析人员测定结果的系指不同实验室之间不同分析人员测定结果的精密度。精密度。变动因素：验证设计方案中的变动因素一般为日期、验证设计方案中的变动因素一般为日期、分析人员、设备。分析人员、设备。方法验证的具体内容l检测限：定义：系指试样中的被分析物能够被检测到的最低系指试样中的被分析物能够被检测到的最低量（但不一定要准确定量）量（但不一定要准确定量）。验证意义：考察方法是否具备灵敏的检测能力。因考察方法是否具备灵敏的检测能力。因此对杂质限度试验，需证明方法具有足够低的检测限，此对杂质限度试验，需证明方法具有足够低的检测限，以保证检出需控制的杂质以保证检出需控制的杂质。两种方法：直观法、信噪比法直观法、信噪比法。方法验证的具体内容l直观法 直观评价可以用于非仪器分析方法，也可用于仪器分直观评价可以用于非仪器分析方法，也可用于仪器分析方法。检测限的测定是通过对一系列已知浓度被测物析方法。检测限的测定是通过对一系列已知浓度被测物的试样进行分析，并以能准确、可靠检测被测物的最小的试样进行分析，并以能准确、可靠检测被测物的最小量或最低浓度来建立。量或最低浓度来建立。方法验证的具体内容l信噪比法 用于能显示基线噪音的分析方法，即把已知浓度试样用于能显示基线噪音的分析方法，即把已知浓度试样测出的信号与噪声信号进行比较，计算可检出的最低浓测出的信号与噪声信号进行比较，计算可检出的最低浓度或量。一般以信噪比为度或量。一般以信噪比为3：1时相应的浓度或注入仪器时相应的浓度或注入仪器的量确定检测限。的量确定检测限。l其他方法：基于工作曲线的斜率和响应的标准偏差进基于工作曲线的斜率和响应的标准偏差进行计算的方法等。行计算的方法等。l注意事项：无论用何种方法，均应用一定数量的试样，无论用何种方法，均应用一定数量的试样，其浓度为近于或等于检测限，进行分析，以可靠地测定其浓度为近于或等于检测限，进行分析，以可靠地测定检测限。检测限。l数据要求：应附测试图谱，说明测试过程和检测限结应附测试图谱，说明测试过程和检测限结果。果。方法验证的具体内容l定量限定义：系指试样中的被分析物能够被定量测定的最低系指试样中的被分析物能够被定量测定的最低量，其测定结果应具有一定的准确度和精密度。量，其测定结果应具有一定的准确度和精密度。特点：定量限体现了分析方法是否具备灵敏的定量检定量限体现了分析方法是否具备灵敏的定量检测能力。（杂质定量试验，需考察方法的定量限，以保测能力。（杂质定量试验，需考察方法的定量限，以保证含量很少的杂质能够被准确检出。）一般以信噪比证含量很少的杂质能够被准确检出。）一般以信噪比10：1时相应的浓度或注入仪器的量进行确定。时相应的浓度或注入仪器的量进行确定。方法验证的具体内容l方法直观法：可用于非仪器分析方法，也可用于仪器分可用于非仪器分析方法，也可用于仪器分析方法。定量限一般同过对一系列含有已知浓度被测物析方法。定量限一般同过对一系列含有已知浓度被测物的试样进行分析，在准确度和精密度都符合要求的情况的试样进行分析，在准确度和精密度都符合要求的情况下，来确定被测物能被定量的最小量。下，来确定被测物能被定量的最小量。方法验证的具体内容信噪比法：用于能显示基线噪音的分析方法，即把用于能显示基线噪音的分析方法，即把已知浓度试样测出的信号与噪声信号进行比较，计算可已知浓度试样测出的信号与噪声信号进行比较，计算可检出的最低浓度或量。一般以信噪比为检出的最低浓度或量。一般以信噪比为10：1。其他方法：基于工作曲线的斜率和响应的标准偏差：基于工作曲线的斜率和响应的标准偏差进行计算的方法等。进行计算的方法等。注意事项：无论用何种方法，均应用一定数量的试：无论用何种方法，均应用一定数量的试样，其浓度为近于或等于定量限，进行分析，以可靠地样，其浓度为近于或等于定量限，进行分析，以可靠地测定定量限测定定量限。方法验证的具体内容l耐用性定义：系指测定条件发生小的变动时，测定结果不受系指测定条件发生小的变动时，测定结果不受影响的承受程度。影响的承受程度。特点：耐用性主要考察方法本身对于可变试验因素的耐用性主要考察方法本身对于可变试验因素的抗干扰能力（如测试条件要求苛刻，则建议在方法中予抗干扰能力（如测试条件要求苛刻，则建议在方法中予以说明）。以说明）。典型变动因素：液相色谱的流动相组成、流速、液相色谱的流动相组成、流速、pH值、色谱柱、柱温等；气相色谱中载气及流速、色谱值、色谱柱、柱温等；气相色谱中载气及流速、色谱柱、固定相、担体、柱温、进样口和检测器温度。柱、固定相、担体、柱温、进样口和检测器温度。方法验证的具体内容l系统使用性试验定义：对一些仪器分析方法，在进行方法验证时，有对一些仪器分析方法，在进行方法验证时，有必要将分析设备、电子仪器与实验操作、测试样品等一必要将分析设备、电子仪器与实验操作、测试样品等一起当作完整的系统进行评估。系统适用性便是对整个系起当作完整的系统进行评估。系统适用性便是对整个系统进行评估的指标。统进行评估的指标。特点：系统适用性试验参数的设置需根据被验证方法系统适用性试验参数的设置需根据被验证方法类型而定。色谱方法对分析设备、电子仪器的依赖程度类型而定。色谱方法对分析设备、电子仪器的依赖程度较高，因此所有色谱方法均应进行该指标验证，并将系较高，因此所有色谱方法均应进行该指标验证，并将系统适用性作为分析方法的组成部分。具体验证参数和方统适用性作为分析方法的组成部分。具体验证参数和方法参考中国药典有关规定。法参考中国药典有关规定。方法再验证l定义：在某些情况下，如原料药合成工艺改变、制剂在某些情况下，如原料药合成工艺改变、制剂处方改变、分析方法发生部分改变等，均有必要对分析处方改变、分析方法发生部分改变等，均有必要对分析方法再次进行全面或部分验证，以保证分析方法可靠，方法再次进行全面或部分验证，以保证分析方法可靠，这一过程称为方法再验证。这一过程称为方法再验证。l原则：根据改变的程度进行相应的再验证，从而保证：根据改变的程度进行相应的再验证，从而保证所采用的分析方法能够控制药品的内在质量。所采用的分析方法能够控制药品的内在质量。方法再验证l需要进行再验证的情况当原料药合成工艺发生改变时当制剂的处方组成改变、辅料变更时当质量标准中某一项目分析方法发生部分改变时其他：例：已有国家标准的药品质量研究中，基于申例：已有国家标准的药品质量研究中，基于申报的原料药合成工艺、制剂处方中的辅料等一般无法保报的原料药合成工艺、制剂处方中的辅料等一般无法保证与已上市药品的一致性，需对质量标准中部分项目进证与已上市药品的一致性，需对质量标准中部分项目进行方法的再验证。行方法的再验证。方法再验证的评价l有关方法验证评价的一般考虑 l方法验证的整体性和系统性