课题1血红蛋白的提取和分离知识梳理、同步训练(教师用)

课题 1 血红蛋白的提取和分离知识梳理、同步训练（教师用）课题 1血红蛋白的提取和分离知识梳理一、凝胶色谱法1 概念：也称做，是根据分离蛋白质的有效方法。2 原理（1） 由构成的凝胶，内部有许多贯穿的。（2） 当不同的蛋白质通过凝胶时，相对分子质量的蛋白质容易进入凝胶内部的通道， 路程，移动速度，而相对分子质量的蛋白质无法进入凝胶内部的通道，只能在 移动，路程，移动速度，从而使不同的蛋白质分子得以分离。 二、缓冲溶液1 作用：在一定范围内，抵制的对溶液 pH 的影响，维持 pH。2 配制：由种缓冲剂溶解于中配制而成，通过调节缓冲剂的就可以得到 不同 pH 范围内使用的缓冲液。三、电泳1 概念：指在电场的作用下发生的过程。2 原理：在一定的下，、等生物大分子的可解离基团会带上或 ，在的作用下，这些带电分子会向着与其所带电荷的电极移动。3 作用：电泳利用了待分离样品中各种分子的差异及分子本身的、的不同，使 带电分子产生不同的，从而实现样品中的分离。4 方法：常用的电泳方法有和，测定蛋白质分子量时通常 使用。四、实验操作1样品处理：通过、等操作收集血红蛋白溶液。（1） 红细胞的洗涤：目的是。分离时采取，直至上清液中没有 ，表明红细胞已洗涤干净。（2） 血红蛋白的释放：在和的作用下，红细胞破裂，释放出血红蛋白。（3） 分离血红蛋白溶液：把离心后，将试管中的液体用过滤，除去，于 中静置片刻后，分离出下层的。2粗分离：即透析（1） 方法：将血红蛋白溶液装入，将放入一定量的适宜浓度的中， 透析。（2） 目的：将的杂质除去。（3） 原理：透析袋能使小分子自由进出，而将大分子物质保留在袋内。3纯化：通过凝及色谱柱将相对分子质量较大的杂质蛋白除去。操作如下：（1） 凝胶色谱柱的制作。（2） 凝胶色谱柱的装填 材料：本实验使用的是。 方法：凝胶用充分溶胀后，配成，一次性倒入色谱柱内。不能有 存在；不能发生流干露出凝胶颗粒的现象。（2）样品的加入的洗脱a准备：加样前，打开流出口，使柱内凝胶面上的缓慢下降到与平齐，关闭出 口。b 加样：用小心地将 1mL 透析后的样品加到的顶端，注意不要破坏。c 加样后，打开下端出口，使样品渗入内。1 / 9课题 1 血红蛋白的提取和分离知识梳理、同步训练（教师用）洗脱：加入，打开下端出口，进行。4纯度鉴定：在鉴定的方法中，使用最多的是。五操作提示1 红细胞的洗涤：、与十分重要。过少，无法除去血浆蛋白； 过高和过长会使等一同沉淀，达不到分离效果。2 色谱柱填料的处理：商品凝胶使用前需直接放在中膨胀，可以将加入其中的 用加热，加速膨胀。3 凝胶色谱柱的装填：在装填凝胶柱时，不得有气泡存在。气泡会搅乱洗脱液中蛋白质的， 降低。4 蛋白质的分离：如果红色区带地移动，说明色谱柱制作成功。【答案】一、1分配色谱法 相对分子质量大小2（1）多糖类化合物 通道 （2）相对分子质量 较小 较长 较快 较大 凝胶外部 较短 较快 相对分子质量二、1外界 酸和碱 基本不变212 水 使用比例三、1带电粒子 迁移2 pH 多肽 核酸 正电 负电 电场 相反3 带电性质 大小 形状 迁移速度 各种分子4 琼脂糖凝胶电泳 聚丙烯酰胺凝胶电泳 SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳四、1红细胞的洗涤 血红蛋白的释放 分离血红蛋白溶液（1）去除杂蛋白 低速短时间离心 黄色 （2）蒸馏水 甲苯 （3）搅拌好的混合液 滤 纸 脂溶性沉淀层 分液漏斗 红色透明液体2 （1）透析袋 透析袋 磷酸缓冲液 12h （2）样品中分子量较小3 （2）交联葡聚糖凝胶 蒸馏水 凝胶悬浮液 缓慢 气泡 缓冲液（3）缓冲液 凝胶面 吸管 色谱柱 凝胶面 凝胶层 磷酸缓冲液 洗脱4SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳五、1洗涤次数 离心速度 离心时间 洗涤次数 离心速度 时间 白细胞2 洗脱液 湿凝胶 沸水浴3 洗脱次序 分离效果4 均匀一致同步训练一、选择题（13 小题）一、选择题1.选用红细胞作为分离蛋白质的实验材料的好处是 （ ）A.血红蛋白是有色蛋白 B.红细胞无细胞核C.红细胞蛋白质含量高 D.红细胞 DNA 含量高A 在红细胞中约 90%是血红蛋白，血红蛋白因含有血红素而呈现红色，因此凝胶色谱分离时可以通过观察 颜色来判断什么时候应该收集洗脱液。这使血红蛋白的分离过程非常直观，大大简化了实验操作。2.血红蛋白呈红色的原因是A.含有 O B.含有 CO C.含有 CO D.含有血红素2 2D 血红蛋白因含有血红素而成红色。3.凝胶色谱法分离蛋白质的依据是（ ）（ ）A.对其他分子的亲和力 B.溶解度 C.所带电荷多少 D.相对分子质量的大小2 / 9课题 1 血红蛋白的提取和分离知识梳理、同步训练（教师用）D 凝胶色谱法是根据相对分子质量的大小分离蛋白质的有效方法。分子小的蛋白质容易进入凝胶内部，路 程长，移动速度较慢，分子大的蛋白质无法进入凝胶内部，路程短，移动速度较慢，从而将相对分子质量 不同的蛋白质分离。4.缓冲液的作用是在一定范围内，抵制外界的影响来维持 （ ）A.温度基本不变 B.pH 基本不变 C.渗透压基本不变 D.氧气浓度基本不变B 缓冲液中的缓冲物质主要是对酸碱物质起到缓冲作用，以维持 pH 基本不变。5.使用 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳过程中，不同蛋白质的电泳迁移率完全取决于 （ ）A.电荷的多少 B.分子的大小 C.肽链的多少 D.分子形状的差异B 蛋白质在聚丙烯酰胺凝胶中的迁移率取决于它所带净电荷的多少以及分子的大小等因素。为了消除净电 荷对迁移率的影响，可以在凝胶中加入 SDS。SDS 所带负电荷的量大大超过了蛋白质分子原有的电荷量， 因而掩盖了不同种蛋白质间的电荷差别，使电泳迁移率完全取决于分子的大小。6.在血红蛋白的提取和分离实验中，下列操作正确的是 （ ）A. 分离红细胞时采用低速长时间离心B. 红细胞释放出血红蛋白只需要加入蒸馏水就可C. 分离血红蛋白溶液是低速短时间离心D. 透析时要用 20mmol/l 的磷酸缓冲液，透析 12hD 分离红细胞时采用低速短时间离心，如 500r/min。将洗涤好的红细胞倒入烧杯中，加蒸馏水和 40%体积 的甲苯，充分搅拌 10min，使红细胞破裂，释放出血红蛋白。将搅拌好的混合液转移到离心管中，以2000r/min 的速度离心 10min。透析时取 1mL 的血红蛋白溶液装入透析袋中，将透析袋放入盛有 300mL 的物质的量浓 度为 2mmol/L 的磷酸缓冲液中，透析 12h。7.血红蛋白的提取和分离中，将搅拌好的混合液转移到离心管中，离心后，可以明显看到试管中的溶液分为 4 层，其中第 3 层是（ ）A.无色透明的甲苯层 B.脂溶性物质的沉淀层C.血红蛋白的水溶液 D.其他杂质的暗红色沉淀物C 离心后，可以明显看到试管中的溶液分为 4 层，从上到下数，第 1 层为无色透明的甲苯层，第 2 层为白 色薄层固体，是脂溶性物质的沉淀层，第 3 层是红色透明液体，这是血红蛋白的水溶液，第 4 层是其他杂 质的暗红色沉淀物。8.（原创）凝胶柱制作的顺序一般是 （ ）橡皮打孔 挖凹穴 装玻璃管 盖尼龙网 盖尼龙纱将橡皮塞插入玻璃管 接尼龙管、装螺旋夹 柱顶安装玻璃管的橡皮塞A. B. B.C. D. B 制作时首先选择适合封堵玻璃管口的橡皮塞，中间打一能够插入0.5mL 的移液管的孔。将橡皮塞上部用 刀切出锅底状的凹穴，将 0.5mL 的移液管头部切下 5cm 长的一段，插入橡皮塞孔内。将尼龙网剪成与橡皮 塞上部一样大小的圆片，覆盖在橡皮塞的凹穴上，再用大小合适的100 目的尼龙纱将橡皮塞上部包好，插 到玻璃管的一端。色谱柱下端用移液管头部作出口部位，连接一细的尼龙管，并用螺旋夹控制尼龙管的开 闭。柱顶部插入安装了玻璃管的橡皮塞。9.以下关于凝胶色谱柱的制作中正确的是 ( )A. 将橡皮塞上部用刀切出锅底状的凹穴B. 将橡皮塞下部切出凹穴C. 插入的玻璃管的上部要超出橡皮塞的凹穴底面D. 将尼龙网剪成与橡皮塞下部一样大小的圆片A 制作时首先选择适合封堵玻璃管口的橡皮塞，中间打一能够插入 0.5mL 的移液管的孔。将橡皮塞上部（而 不是“下部”）用刀切出锅底状的凹穴，将 0.5mL 的移液管头部切下 5cm 长的一段，插入橡皮塞孔内，插3 / 9 长课题 1 血红蛋白的提取和分离知识梳理、同步训练（教师用）入的玻璃管的上部不得（而不是“要”）超出橡皮塞的凹穴底面。将尼龙网剪成与橡皮塞上部（而不是“下 部”）一样大小的圆片，覆盖在橡皮塞的凹穴上，再用大小合适的 100 目的尼龙纱将橡皮塞上部包好，插 到玻璃管的一端。10.（原创）对于凝胶色谱柱的装填哪项是错误的 （ ）A. 凝胶充分溶胀后配成凝胶悬浮液，在尼龙管打开的情况下一次性缓慢倒入色谱柱内B. 色谱柱内一旦发现有气泡产生就必须重装C. 装填时可轻轻敲打色谱柱，使凝胶装填均匀D. 当凝胶表面干燥后，用 300mL 的物质的量浓度为 20mmol/L 的磷酸缓冲液充分洗涤D 凝胶色谱柱的凝胶表面不能干燥，填充完毕后应立即洗涤。11.样品的加入和洗脱的操作不正确的是 （ ）A. 加样前，打开色谱柱下端的流出口，使柱内凝胶面上的缓冲液缓慢下降到凝胶面的下面B. 用吸管小心的将 1ml 透析后的样品加到色谱柱的顶端，不要破坏凝胶面C. 加样后，打开下端出口，使样品渗入凝胶床内D. 等样品完全进入凝胶层后，关闭下端出口A 加样前，打开色谱柱下端的流出口，使柱内凝胶面上的缓冲液缓慢下降到与凝胶面平齐（而不是下面）， 关闭出口。用吸管小心的将 1ml 透析后的样品加到色谱柱的顶端，注意不要破坏凝胶面。加样后，打开下 端出口，使样品渗入凝胶床内。等样品完全进入凝胶层后，关闭下端出口。12.（原创）SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳在本课题中的作用是 （ ）A.对分离的蛋白质进一步纯化 B.对分离的蛋白质的纯度进行鉴定C.检测分离的蛋白质的活性 D.提高蛋白质的活性B 判断纯化的蛋白质是否达到要求，需要进行蛋白质纯度的鉴定。在鉴定的方法中，使用最多的是SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳。二、非选择题13.(改编题)红细胞含有大量血红蛋白，红细胞的机能主要是由血红蛋白完成，血红蛋白的主要功能是携 带氧气或二氧化碳，我们可以选用猪、牛、羊或其它脊椎动物的血液进行实验，来提取和分离血红蛋白， 请回答下列有关问题：（1）血红蛋白提取和分离的程序可分为四步：样品处理、 、和 。（2）样品处理包括红细胞的洗涤、和三步。红细胞洗涤次数不能过少，否则 ；离心速度 和时间 会使白细胞等一同沉淀， 达不到分离的效果。（3）凝胶色谱柱在装填过程中，凝胶充分溶胀后， 悬浮液，在色谱柱下端的尼龙管的螺旋夹下，一次性缓慢倒入色谱柱内，可轻轻地敲动色谱 胶装填均匀。（4）右图是样品的加入与洗脱示意图，从图中可 正确的加样操作是用吸管小心将透析后的样品 确的操作次序是 。 答案粗分离；纯化；纯度鉴定血红蛋白的释样品样品配成凝胶的情况柱，使凝以看出，加样，正放；分离血红蛋白溶液；无法除去血浆蛋白；过高；过 (3)打开(4)贴着管壁； a14.凝胶色谱法是 60 年代初发展起来的一种快速而又简单的分离技术，由于设备简 b操作方便，不需要有机溶剂，对高分子物质有很高的分离效果，目前已经在生物化分子生物学、生物工程学、分子免疫学等领域广泛应用，不但应用于科学研究，而c已经大规模地用于工业生产。据图回答下列问题：（1 ）a 、b 均为蛋白质分子，其中先从层析柱中洗脱出来的是 ，原因单、学、且4 / 9d是课题 1 血红蛋白的提取和分离知识梳理、同步训练（教师用）。（2）自己制作凝胶色谱柱时，在色谱柱底部 d 位置相当于多孔板的结构可由替代。（3）装填凝胶色谱柱时，色谱柱内不能有气泡的存在，原因是。（4）洗脱时对洗脱液的流速要求是 。若 选 用 SephadexG-75, 则 “ G ” 表 示 ；“ 75 ” 表示。答案（1）a；a 相对分子质量大，无法进入凝胶内部的通道，只能在凝胶外部移动，路程较短，移动速度 较快（2）尼龙网和尼龙纱（3）气泡会搅乱洗脱液中蛋白质的洗脱次序，降低分离效果（4）保持稳定（5） 凝胶的交联程度、膨胀程度及分离范围； 凝胶得水值，即每克凝胶膨胀时吸水 7.5g15.某生物兴趣小组以 -淀粉酶为实验材料进行系列实验：一是用凝胶色谱法测定 -淀粉酶的相对分子 质量，二是用包埋法固定 -淀粉酶来探究固定化酶催化效果。请回答下列问题：（1）凝胶色谱法的原理是。（2）某人欲使用凝胶色谱法比较 -淀粉酶、唾液淀粉酶两种蛋白质的分子质量大小，请你选择需要的材 料，借用右图的实验装置，帮助其设计实验步骤，并预测实验结果，得出相关结论。实验步骤：将含有 -淀粉酶、唾液淀粉酶两种蛋白质的混合液加入装满凝胶的玻璃管上端，用进行洗脱，检测其 。实验结果及结论：。（3）该小组同学用琼脂作载体，用包埋法固定a淀粉酶来探究固定化酶催化效果。实验结果如下：(注： 假设加入试管中的固定化淀粉酶量与普通a淀粉酶量相同)固定化淀粉酶普通a淀粉酶 淀粉溶液1 号试管2 号试管60保温 5 分钟，取出冷却至室温，滴加碘液现象变蓝不变蓝该实验设计体现了原则。1 号试管变蓝的原因是 。答案 （1）根据相对分子质量的大小分离蛋白质（2）缓冲液；洗脱的先后次序；若a淀粉酶先于唾液淀 粉酶洗脱出来，则a淀粉酶的相对分子质量大于唾液淀粉酶；若唾液淀粉酶先于a淀粉酶洗脱出来，则 唾液淀粉酶的相对分子质量大于a淀粉酶（3）对照原则、单一变量原则因为淀粉分子太大难以通过 琼脂扩散与淀粉酶接触而导致反应无法进行素能提升一、选择题1.下列哪种现象表示凝胶色谱柱的装填性能良好 （ ）A.色带均匀、狭窄、平整 B.色谱柱内有气泡C.色谱柱内有气泡 D.色谱柱装填不均匀A 色带均匀、狭窄、平整说明凝胶色谱柱装填良好，有其它情况出现必须重装。2.凝胶柱的制作常用玻璃管，在选择玻璃管时应考虑的因素有 （ ）玻璃管的高度 玻璃管的直径 样品的体积 缓冲液的 pHA. B. C. D.B 影响分离的主要因素是色谱柱的高度，但也要考虑玻璃管的直径，柱高与直径一般保持在 5:110:1。 样品的体积也要考虑，体积大时色谱柱相应要高些。缓冲液的 pH 不影响玻璃管的选择。5 / 9课题 1 血红蛋白的提取和分离知识梳理、同步训练（教师用）3. 凝胶色谱法分离蛋白质所用的凝胶是交联葡聚糖凝胶（ SephadexG-75），其中 G、75 的含义分别是 （ ）A. G 表示凝胶的使用量，75 表示加 75g 水B. G 表示凝胶的交联程度，75 表示需加热 75C. G 表示凝胶的交联程度,膨胀程度及分离范围，75 表示每克凝胶膨胀时吸水 7.5gD. G 表示凝胶的膨胀体积，75 表示每克凝胶膨胀后体积可达 75cm3C G 表示凝胶的交联程度,膨胀程度及分离范围，75 表示凝胶得水值，即每克凝胶膨胀时吸水 7.5g。4.关于对样品处理过程的分析，正确的是 ( )A. 洗涤红细胞的目的是去除血浆中的葡萄糖、无机盐B. 洗涤次数、离心速度及离心时间都会影响实验效果C. 洗涤过程选用 0.1的生理盐水D. 在血液中加入柠檬酸钠能够加速红细胞破裂B 洗涤红细胞的目的是去除杂蛋白，A 项错误；洗涤次数过少，无法除去血浆蛋白，离心速度过高和时间 过长，白细胞会一同沉淀，所以 B 项正确；洗涤是用 0.9%的生理盐水，C 项错误；在血液中加入柠檬酸钠 能够防止血液凝固，D 项错误。5.下列操作可以达到目的的选项是 （ ）选项ABCD操作溶解海藻酸钠时用大火加热将装有蛋白质粗制品的透析袋（玻璃纸制成）放入 透析液中提取 DNA 时，在切碎的洋葱中加入洗涤剂 在 PCR 扩增 DNA 时加入引物目的海藻酸钠可以快速溶解 蛋白质与其他小分子化合物分 离溶解 DNA合成子链的原料B 溶解海藻酸钠时应用小火间断加热，大火加热会焦糊，所以 A 项错误；透析可以除去样品中分子量较小 的杂质，所以 B 项正确；提取洋葱 DNA 时，在切碎的洋葱中加入洗涤剂是为了溶解细胞膜而不是 DNA，所 以 C 项错误；在 PCR 扩增 DNA 时加入引物的作用是使 DNA 聚合酶能够从引物 3端开始连接脱氧核苷酸, 所以 D 项也错误。6.（原创）将加入洗脱液的湿凝胶用沸水浴加热，逐渐升温至接近沸腾。下列哪项不是这种做法的目的 （ ）A.提高凝胶内酶的活性 B.加速凝胶膨胀，节约时间C.除去凝胶中可能带有的微生物 D.排除胶粒内的空气A 凝胶内没有酶。7.下列有关提取和分离血红蛋白的程度叙述错误的是 （ ）A. 样品的处理就是通过一系列操作收集到血红蛋白溶液B. 通过透析可以去除样品中分子质量较大的杂质，此为样品的粗提取C. 可通过凝胶色谱法将相对分子质量大的杂质蛋白除去，即样品的纯化D. 可通过 SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定血红蛋白的纯度B 血红蛋白提取和分离的程序可以分为四大步，即样品处理、粗分离、纯化和纯度鉴定。首先通过洗涤红 细胞、血红蛋白的释放、离心等操作收集到血红蛋白溶液，此为样品的处理；再经过透析去除分子量较小 的杂质，此为样品的粗分离；然后通过凝胶色谱法将相对分子质量大的杂质蛋白除去，此为样品的纯化； 最后经聚丙烯酰胺凝胶电泳进行纯度鉴定。8.在血红蛋白分离过程中，如果红色带区歪曲、散乱、变宽，与其有关的是 （ ）A.凝胶色谱柱的制作 B.色谱柱的装填C.洗脱过程 D.样品的处理B 在装填凝胶柱时，如果有气泡存在，气泡会搅乱洗脱液中蛋白质的洗脱次序，出现红色带区歪曲、散乱、6 / 9课题 1 血红蛋白的提取和分离知识梳理、同步训练（教师用）变宽的现象。9.在血红蛋白的整个提取过程中，不断用磷酸缓冲液处理的目的是 （ ）A. 防止血红蛋白被氧气氧化B. 血红蛋白是一种碱性物质，需要酸中和C. 磷酸缓冲液会加速血红蛋白的提取过程D. 让血红蛋白处在稳定的 pH 范围内，维持其结构和功能D 磷酸缓冲液的作用主要是维持血红蛋白所处环境 pH 的稳定，维持其结构和功能。10.(多选)用凝胶色谱法分离蛋白质时，相对分子质量的大的蛋白质 （ ）A.路程较长 B.路程较短 C.移动速度较慢 D.移动速度较快BD 相对分子质量大的蛋白质不能进入凝胶内部的通道，只能在凝胶外部移动，所以路程较短，移动速度 也较快。11.（多选，改编）关于凝胶色谱操作的叙述错误的是 （ ）A. 在进行凝胶色谱柱的装填时，装填前要将色谱柱垂直固定在支架上B. 在洗脱过程中加入磷酸缓冲液的目的是准确模拟生物体内的生理环境，保持体外的 pH 和体内一致C. 凝胶用缓冲液充分溶胀后配成凝胶悬浮液D. 装填凝胶时要将色谱柱下端连接的尼龙管关闭，一次性缓慢倒入色谱柱内CD 凝胶要用蒸馏水充分溶胀，配成凝胶悬浮液；装填凝胶时要将色谱柱下端连接的尼龙管打开。12.(多选)已知某样品中存在甲、乙、丙、丁、戊五种物质，其分子大小、电荷的性质和数量情况如下图 所示。下列叙述正确的是 （ ）A. 将样品装入透析袋中透析 12h，若分子乙保留在袋内，则分子 也保留在袋内B. 若五种物质为蛋白质，则用凝胶色谱柱分离时，甲的移动速度 慢C. 分子甲与分子乙所带电荷性质相同D. 若五种物质为蛋白质，用 SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳分离样品 的蛋白质分子，则分子甲和分子戊形成的电泳带相距最近 BC 能从透析袋中出来的是小分子物质，甲的分子量比乙要小的分子量 丙 丁 乙 戊 甲0 电荷量甲最中多，甲可以从透析袋中出来，所以 A 项错误；用凝胶色谱柱分离蛋白质时，分子小进入凝胶可以内部被滞留， 移动速度慢，甲的分子最小，移动速度应最慢，所以 B 项正确；离心时分子质量较大的分子容易沉淀，而 甲与丙的分子质量差别较大，丙沉淀时甲不一定沉淀，分子甲与分子乙均位于纵坐标的左侧，所带电荷性 质相同，所以 C 项正确；SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳分离样品中的蛋白质分子，由于 SDS 所带负电荷的量 大大超过了蛋白质分子原有的电荷量，因而掩盖了不同种蛋白质间的电荷差异别，使电泳迁移率完全取决 于分子的大小。则分子乙和分子戊的分子质量较接近，形成的电泳带相距最近，所以 D 项错误。二、非选择题13.（改编题）右图表示血红蛋白提取和分离的部分实验装置，请回答下列问题：（1）血红蛋白是人和其他脊椎动物红细胞的主要组成成分，其在红细胞中的作用体现了蛋白质具有功能。（2）甲装置中，B 是血红蛋白溶液，则 A 是。甲装置用于 ，目的是 。（3）用乙装置分离蛋白质的方法叫 ，是根据分离蛋白质的有效方法。当时，用试管收集流出液，每 5mL 收集一管，连续收集。（4）判断纯化的蛋白质是否达到要求，需要进行甲乙7 / 9课题 1 血红蛋白的提取和分离知识梳理、同步训练（教师用）蛋白质纯化的鉴定。在鉴定的方法中使用最多的是凝胶电泳。答案（1）运输（2）20mol/L 的磷酸缓冲液；血红蛋白的粗分离；除去样品中分子量较小的杂质（3）凝胶色谱法；相对分子质量的大小；红色的蛋白质接近色谱柱底端（4）SDS-聚丙烯酰胺14.（改编题）红细胞含有大量血红蛋白，红细胞的机能主要是由血红蛋白完成。我们可以选用猪、牛、 羊等动物的血液进行实验，来提取和分离血红蛋白，请回答下列有关问题：（1）实验前取新鲜的血液，要切记在采血容器中预先加入柠檬酸钠，取血回来，马上进行离心，收集血红 蛋白溶液。 其中加入柠檬酸钠的目的是 。 此过程是样品处理，它应包括红细胞洗涤、 、分离血红蛋白溶液。 （2）收集的血红蛋白溶液在透析袋中透析，这是样品的粗分离。透析的目的是 透析的原理是。透析袋由半透膜制成，常用的半透膜有 (至少填 2 个)。（3）然后通过凝胶色谱法将样品进一步纯化，最后经 SDS聚丙烯酰胺凝胶电脉进行纯度鉴定。其中通过 凝胶色谱法将样品纯化的目的是 ；支持物电泳是目前应用较为普遍的纯 化蛋白质的一种方法，支持物有 (至少填 2 个)。答案（1）防止血液凝固 血红蛋白的释放（2）去除相对分子质量较小的杂质 透析袋能使小分子 自由进出，而大分子则保留在袋内 肠衣、膀胱膜、玻璃纸等（3）通过凝胶色谱法去除相对分子质量较 大的杂质；滤纸、醋酸纤维薄膜、大分子凝胶等15（改编题）试回答下列“蛋白质提取与分离实验”的有关问题： ab透析袋透析液图 1图 2图 3图 4（1） 为了提取和分离血红蛋白，首先对红细胞进行洗涤以去除杂质蛋白，洗涤时应使用生理盐水而不使 用蒸馏水的原因是 。（2） 若要去除血清蛋白中的小分子杂质，采用图 1 装置。透析液是 ，一段时间后，若向烧 杯中加入双缩脲试剂，透析袋内溶液是否出现紫色并说明判断的依据：。（3）图 4 是用于分离蛋白质的凝胶色谱法柱，装填凝胶色谱柱时，色谱柱内不能有气泡的存在，原因是先从层析柱中洗脱出来的是 ，原因是。a、b 均为蛋白质分子，其中（4）图 2、图 3 分别表示电泳法分离蛋白质和纸层析法分离叶绿体中色素的结果。不同蛋白质得以分离是因为；不同色素得以分离是因为。答案（1）防止红细胞吸水破裂（2）磷酸缓冲液； 出现紫色，双缩脲试剂可以透过半透膜，与袋内血清 蛋白质反应，生成紫色物质（3）气泡会搅乱洗脱液中蛋白质的洗脱次序，降低分离效果；a； a 相对分子 质量大，无法进入凝胶内部的通道，只能在凝胶外部移动，路程较短，移动速度较快（ 4）不同蛋白质所 带电荷性质、分子大小和形状不同，导致电泳时迁移速度不同； 不同色素在层析液中溶解度不同，导 致层析时扩散速度不同8 / 9课题 1 血红蛋白的提取和分离知识梳理、同步训练（教师用）9 / 9