BCA蛋白定量

凯基BCA蛋白含量检测试剂盒Cat Number：KGPBCA For Research Use OnlyStore at -20 for one yearExpire date： 一、 试剂盒说明 BCA蛋白浓度测定试剂盒(BCA Protein Assay Kit)是根据目前世界上最常用蛋白浓度检测方法之一BCA法研制而成，实现了蛋白浓度测定的简单，高稳定性，高灵敏度和高兼容性。检测浓度下限到达25微克/毫升，最小检测蛋白量到达0.5微克，待测样品体积为120微升。二、 试剂盒组份组 份Cat: KGPBCA试 100 assay酶标板/20assay 1mL比色杯Cat: KGPBCA 250 assay酶标板/50assay 1mL比色杯蛋白标准溶液0. 5 g/L 2 mL5 mLBCA试剂A 20 mL25 mL2BCA试剂B0.4mL 1mL 三、 操作步骤A 酶标板操作1. 标准曲线的绘制：取一块酶标板，按照下表参加试剂孔号01234567蛋白标准溶液L01248121620去离子水L2019181612840对应蛋白含量g00.51.02.04.06.08.010.02. 根据样品数量，按50体积BCA试剂A加1体积BCA试剂B50:1配制适量BCA工作液，充分混匀；3. 各孔参加200L BCA工作液；4. 把酶标板放在振荡器上振荡30sec，37放置30分钟，然后在562nm下比色测定。以蛋白含量g为横坐标，吸光值为纵坐标，绘出标准曲线；5. 稀释待测样品至适宜浓度，使样品稀释液总体积为20L，参加BCA工作液200L，充分混匀，37放置30分钟后，以标准曲线0号管做参比，在562nm波长下比色，记录吸光值；, 6. 根据所测样品的吸光值，在标准曲线上即可查得相应的蛋白含量g，除以样品稀释液总体积20L，乘以样品稀释倍数即为样品实际浓度单位：g/L。 B 分光光度计测定1. 标准曲线的绘制：各管按照下表参加试剂孔号01234567蛋白标准溶液L051020406080100去离子水L1009590806040200对应蛋白含量g02.55.010.020.030.040.050.02. 根据样品数量，按50体积BCA试剂A加1体积BCA试剂B50:1配制适量BCA工作液，充分混匀；3. 各管参加1000L BCA工作液；4. 各管充分混匀，37放置30分钟，然后在562nm下比色测定。以蛋白含量g为横坐标，吸光值为纵坐标，绘出标准曲线；5. 稀释待测样品至适宜浓度，样品稀释液总体积为100L，参加BCA工作液1000L，充分混匀，37放置30分钟后，以标准曲线0号管做参比，在562nm波长下比色，记录吸光值；6. 根据所测样品的吸光值，在标准曲线上即可查得相应的蛋白含量g，除以样品稀释液总体积100L，乘以样品稀释倍数即为样品实际浓度单位：g/L。四、 考前须知1. 配制好的混合BCA工作液室温24小时内稳定。2. 参加BCA工作液后，也可以在室温放置2小时，或60放置30分钟。BCA法测定蛋白浓度时，吸光度会随着时间的延长不断加深。并且显色反响会因温度升高而加快。如果浓度较低，适合在较高温度孵育，或延长孵育时间。3. 待测样品浓度在502000微克/毫升浓度范围内有较好的线性关系。4. BCA法测定蛋白浓度不受绝大局部样品中的化学物质的影响，可以兼容样品中高达5%的SDS，5%的Triton X-100，5%的Tween 20, 60, 80。但受螯合剂和略高浓度的复原剂的影响，需确保EDTA低于10mM，无EGTA，二硫苏糖醇低于1mM，-巯基乙醇低于1mM.不适用BCA法时建议使用Bradford蛋白浓度测定试剂盒。5. 操作时要带手套。内容总结1以蛋白含量g为横坐标，吸光值为纵坐标，绘出标准曲线22. 参加BCA工作液后，也可以在室温放置2小时，或60放置30分钟3如果浓度较低，适合在较高温度孵育，或延长孵育时间