微生物的显微镜直接计数法.ppt

实 验 三 微生物的显微镜直 接计数法和大小的 测定 实验目的 学习使用目镜测微尺和镜台测微尺在显 微镜下测定微生物大小的方法。 学习使用血球记数板测定微生物数量的 方法。 实验材料 显微镜、目镜测微尺、镜台测微尺、 血球记数板、酵母菌悬液、盖玻片、 无菌滴管、吸水纸、擦镜纸。 实验步骤 测定酵母菌细胞的大小 测定的工具：目镜测微尺 镜台测微尺 目镜测微尺每格实际代表的长度随物镜的放大倍 数而改变，也会因使用不同的显微镜而产生误差， 因此在使用前必须用镜台测微尺进行校正。 目镜测微尺的每格长度 (m)=镜台测微尺 10/目镜测微尺 酵母菌 显微直接计数 方法：活菌计数法 平板菌落计数法；总菌计数 法 血球计数板或霍瑟（ Peroff Hausser） 细菌计 数板（二者原理和部件相同，只是厚薄不同而已）。 细胞数 /ml=100小格内细胞总数 100 400 10 1000 稀释倍数 细胞数 /ml=80小格内细胞总数 80 400 10 1000 稀释倍数 1. 取清洁无油的血球计数板，在计数室上面加 盖血盖片。 2. 取酵母菌液，摇匀，用滴管由盖玻片边缘滴 一小滴，使菌液自行渗入，计数室内不得有 气泡。 3. 用 4 镜观察并将计数室移至视野中央。 4. 在 4 镜下计数：计数 4个（或 5个）中格的平 均值，然后求得每个中格的平均值。乘上 16 （或 25）就得出计数区总菌数，最后再换算 到每 mL菌液中的含菌数。 5. 注意事项： 计上不计下，计左不计右。出芽 计一半 实验结果 目镜测微尺标定结果： 目镜下 倍物镜目镜测微尺每格长度是 m。 菌号 酵母的直径大小测定结果 目镜测微尺格数 实际直径 /m 1 2 3 4 5 均值 将显微计数结果记录于下表中。 T表示五个 中方格中的总菌数； D表示菌液稀释倍数。 各中格中菌数 T D 二室平均 值 个 /ml 1 2 3 4 5 第一 室 第二 室 问题与讨论 为什么目镜测微尺必须用镜台测微尺来 校正？ 在显微镜下直接测定微生物数量有什么 优缺点？ 本次实验课结束 请确保血球计数板清洗干净！ 请值日生同学留下值日 下周再见！