常用溶液的配制

一. 常用贮液与溶液 1mol/L亚精胺（Spermidine）:溶解2.55g亚精胺于足量的水中，使终体积为10ml。分装成小份贮存于-20。 1mol/L精胺（Spermine）：溶解3.48g精胺于足量的水中，使终体积为10ml。分装成小份贮存于-20。 10mol/L乙酸胺（ammoniumacetate）：将77.1g乙酸胺溶解于水中，加水定容至1L后，用0.22um孔径的滤膜过滤除菌。 10mg/ml牛血清蛋白(BSA）：加100mg的牛血清蛋白（组分V或分子生物学试剂级，无DNA酶）于9.5ml水中（为减少变性，须将蛋白加入水中，而不是将水加入蛋白），盖好盖后，轻轻摇动，直至牛血清蛋白完全溶解为止。不要涡旋混合。加水定容到10ml，然后分装成小份贮存于-20。 1mol/L二硫苏糖醇（DTT）：在二硫苏糖醇5g的原装瓶中加32.4ml水，分成小份贮存于-20。或转移100mg的二硫苏糖醇至微量离心管，加0.65ml的水配制成1mol/L二硫苏糖醇溶液。 8mol/L乙酸钾（potassiumacetate）：溶解78.5g乙酸钾于足量的水中，加水定容到100ml。 1mol/L氯化钾（KCl）：溶解7.46g氯化钾于足量的水中，加水定容到100ml。 3mol/L乙酸钠（sodiumacetate）：溶解40.8g的三水乙酸钠于约90ml水中，用冰乙酸调溶液的pH至5.2，再加水定容到100ml。 0.5mol/LEDTA:配制等摩尔的Na2EDTA和NaOH溶液（0.5mol/L），混合后形成EDTA的三钠盐。或称取186.1g的Na2EDTA2H2O和20g的NaOH，并溶于水中，定容至1L。 1mol/LHEPES：将23.8gHEPES溶于约90ml的水中，用NaOH调pH（6.8-8.2），然后用水定容至100ml。 1mol/LHCl：加8.6ml的浓盐酸至91.4ml的水中。 25mg/mlIPGT：溶解250mg的IPGT（异丙基硫代-D-半乳糖苷）于10ml水中，分成小份贮存于-20。 1mol/LMgCl2:溶解20.3gMgCl26H2O于足量的水中，定容到100ml。 100mmol/LPMSF：溶解174mg的PMSF（苯甲基磺酰氟）于足量的异丙醇中，定容到10ml。分成小份并用铝箔将装液管包裹或贮存于-20。 20mg/ml蛋白酶K（proteinaseK）：将200mg的蛋白酶L加入到9.5ml水中，轻轻摇动，直至蛋白酶K完全溶解。不要涡旋混合。加水定容到10ml，然后分装成小份贮存于-20。 10mg/mlRnase（无DNase）（DNasefreeRNase）：溶解10mg的胰蛋白RNA酶于1ml的10mmol/L的乙酸钠水溶液中（pH5.0）。溶解后于水浴中煮沸15min，使DNA酶失活。用1mol/L的TrisHCl调pH至7.5，于-20贮存。（配制过程中要戴手套） 5mol/L氯化钠（NaCl）：溶解29.2g氯化钠于足量的水中，定容至100ml。 10N氢氧化钠（NaOH）：溶解400g氢氧化钠颗粒于约0.9L水的烧杯中（磁力搅拌器搅拌），氢氧化钠完全溶解后用水定容至1L。 10SDS（十二烷基硫酸钠）：称取100gSDS慢慢转移到约含0.9L的水的烧杯中，用磁力搅拌器搅拌直至完全溶解。用水定容至1L。 2mol/L山梨（糖）醇（Sorbitol）：溶解36.4g山梨（糖）醇于足量水中使终体积为100ml。 100三氯乙酸（TCA）:在装有500gTCA的试剂瓶中加入100ml水，用磁力搅拌器搅拌直至完全溶解。（稀释液应在临用前配制） 2.5Xgal（5-溴-4-氯-3-吲哚-半乳糖苷）：溶解25mg的Xgal于1ml的二甲基甲酰胺（DMF）,用铝箔包裹装液管，贮存于-20。 100Denhardt试剂（Denhardtsregent）成分及终浓度配制100ml溶液各成分的用量 2%聚蔗糖（Ficoll，400型）2%聚乙烯吡咯烷酮（PVP-40）2%BSA（组分V） 水2g2g2g 加水至总体积为100ml,依照上表称取各组分，溶于水中定容。过滤除菌及杂质，分装成小份于-20贮存。 10标准DNA连接酶缓冲液（standardDNAligasebuffer）（粘端、平端连接）成分及终浓度配制10ml溶液各成分的用量0.5mol/LTris-HCl:5ml1mol/L贮液,100mmol/LMgCl2:1ml1mol/L贮液,100mmol/LDTT:1ml1mol/L贮液,2mmol/LATP:200ul100mmol/L贮液,5mmol/L盐酸亚精胺（可选）:50ul1mmol/L贮液,0.5mg/mlBSA（组分V）（可选）:0.5ml10mg/mL贮液,水:2.25ml 将配制好的缓冲液分装成小份，贮存于-20。 100mmol/LdNTP溶液（dNTPsolutions）可以购买到100mmol/L纯dNTPs贮液，-80可贮存至少6个月。 10mmol/LdNTP混合液成分及终浓度配制20ul溶液各成分的用量 10mmol/LdATP 10mmol/LdCTP 10mmol/LdGTP 10mmol/LdTTP 水2ul100mmol/LdATP贮液 2ul100mmol/LdCTP贮液 2ul100mmol/LdGTP贮液 2ul100mmol/LdTTP贮液 12ul 20PEG8000/2.5MNaCl 成分及终浓度配制10ml溶液各成分的用量 质量浓度为20聚乙二醇 2.5mol/L氯化钠 水20g 50ml5mol/L氯化钠或14.6g固体氯化钠 补足100ml 加聚乙二醇于含有氯化钠的烧杯中，加水至终体积100ml，用磁力搅拌器搅拌溶解。 20SSC 成分及终浓度配制1L溶液各成分的用量 300mmol/L柠檬酸三钠（二水） 3mol/L氯化钠 水88.2g 175.3g 补足1L 溶解柠檬酸三钠（二水）和氯化钠于约0.9L水中，加几滴10NNaOH溶液调pH为7.0，用水补足体积至1L。 DEPC（焦碳酸二乙酯）处理水 加100ulDEPC于100ml水中，使DEPC的体积分数为0.1。在37温浴至少12h，然后在15psi条件下高压灭菌20min，以使残余的DEPC失活。DEPC会与胺起反应，不可用DEPC处理Tris缓冲液。 甲酰胺（deionizedformamide） 直接购买或加DowexXG8混合树脂于装有甲酰胺的玻璃烧杯中，用磁力搅拌器轻轻搅拌1h，可去除甲酰胺中的离子。经Whatman1号滤纸过滤除去树脂后分成小份，充氮气于-80贮存（防止氧化）。 磷酸缓冲液（phosphatebuffer） 按照下表所给定的体积，混合1mol/L的磷酸二氢钠（单碱）和1mol/L磷酸氢二钠（双碱）贮液，获得所需pH的磷酸缓冲液。配制1mol/L的磷酸二氢钠（NaH2PO4H2O）贮液：溶解138g于足量水中，使终体积为1L;1mol/L磷酸氢二钠（Na2HPO4）贮液:溶解142g于足量水中使终体积为1L。 1mol/L磷酸二氢钠（ml）1mol/L磷酸氢二钠（ml）最终pH值 TE（用于悬浮和贮存DNA） 成分及终浓度配制100ml溶液各成分的用量 10mmol/LTrisHCl 1mmol/LEDTA 水1ml1mol/LTris-HCl（pH7.4-8.0，25） 200ul0.5mol/LEDTA（pH8.0） 98.8ml Tris缓冲液（Tris-HClbuffer） 将121g的Tris碱溶解于约0.9L水中，再根据所要求的pH（25下）加一定量的浓盐酸（11.6N），用水调整终体积至1L。 浓盐酸的体积（ml）pH 二.电泳缓冲液、染料和凝胶加样液 电泳缓冲液 50Tris-乙酸（TAE）缓冲液 成分及终浓度配制1L溶液各成分的用量 2mol/LTris碱 1mol/L乙酸 100mmol/LEDTA 水242g 57.1ml的冰乙酸（17.4mol/L） 200ml的0.5mol/LEDTA（pH8.0） 补足1L 5Tris-硼酸（TBE）缓冲液 成分及终浓度配制1L溶液各成分的用量 445mmol/LTris碱 445mmol/L硼酸盐 10mmol/LEDTA 水54g 27.5g硼酸 20ml的0.5mol/LEDTA（pH8.0） 补足1L 染料 1溴酚蓝（bromophenolblue）加1g水溶性钠型溴酚蓝于100ml水中，搅拌或涡旋混合直到完全溶解。 1二甲苯青FF（xylenecyanoleFF）溶解1g二甲苯青FF于足量水中，定容到100ml。 10mg/ml的溴化乙锭（ethidiumbromide） 小心称取1g溴化乙锭，转移到广口瓶中，加100ml水，用磁力搅拌器搅拌直到完全溶解。用铝箔包裹装液管，于4贮存。 凝胶上样液（gelloadingsolutions） 6碱性凝胶上样液（室温贮存） 成分及终浓度配制10ml溶液各成分用量 0.3N氢氧化钠 6mmol/LEDTA 18聚蔗糖（400型） 0.15溴甲酚绿 0.25二甲苯青FF 水300ul10N氢氧化钠 120ul0.5mol/LEDTA（pH8.0） 1.8g 15mg 25mg 补足到10ml 6聚蔗糖凝胶上样液（室温贮存） 成分及终浓度配制10ml溶液各成分用量 0.15溴酚蓝 0.15二甲苯青FF 5mmol/LEDTA 15聚蔗糖（400型） 水1.5ml1溴酚蓝 1.5ml1二甲苯青FF 100ul0.5mol/LEDTA（pH8.0） 1.5g 补足到10ml 6溴酚蓝/二甲苯青/聚蔗糖凝胶上样液（室温贮存） 成分及终浓度配制10ml溶液各成分用量 0.25溴酚蓝 0.25二甲苯青FF 15聚蔗糖（400型） 水2.5ml1溴酚蓝 2.5ml1二甲苯青FF 1.5g 补足到10ml 6甘油凝胶上样液（4贮存） 成分及终浓度配制10ml溶液各成分用量 0.15溴酚蓝 0.15二甲苯青FF 5mmol/LEDTA 50甘油 水1.5ml1溴酚蓝 1.5ml1二甲苯青FF 100ul0.5mol/LEDTA（pH8.0） 3ml 3.9ml 6蔗糖凝胶上样液（室温贮存） 成分及终浓度配制10ml溶液各成分用量 0.15溴酚蓝 0.15二甲苯青FF 5mmol/LEDTA 40聚蔗糖 水1.5ml1溴酚蓝 1.5ml1二甲苯青FF 100ul0.5mol/LEDTA（pH8.0） 4g 补足到10ml 10十二烷基硫酸钠/甘油凝胶上样液（室温贮存） 成分及终浓度配制10ml溶液各成分用量 0.2溴酚蓝 0.2二甲苯青FF 200mmol/LEDTA 0.1SDS 50甘油 水20mg 20mg 4ml0.5mol/LEDTA(pH8.0) 100ul10SDS 5ml 补足到10ml三.常用培养基 LB培养基 将下列组分溶解在0.9L水中： 蛋白胨10g 酵母提取物5g 氯化钠10g 如果需要用1NNaOH（1ml）调整pH至7.0，再补足水至1L。注：琼脂平板需添加琼脂粉12g/L,上层琼脂平板添加琼脂粉7g/L。 SOB培养基 将下列组分溶解在0.9L水中： 蛋白胨20g 酵母提取物5g 氯化钠0.5g 1mol/L氯化钾2.5ml 用水补足体积到1L。分成100ml的小份，高压灭菌。培养基冷却到室温后，再在每100ml的小份中加1ml灭过菌的1mol/L氯化镁。 SOC培养基 成分、方法同SOB培养基的配制，只是在培养基冷却到室温后，除了在每100ml的小份中加1ml灭过菌的1mol/L氯化镁外，再加2ml灭菌的1mol/L葡萄糖（18g葡萄糖溶于足够水中，再用水补足到100ml，用0.22um的滤膜过滤除菌）。 TB培养基 将下列组分溶解在0.9L水中： 蛋白胨12g 酵母提取物24g 甘油4ml 各组分溶解后高压灭菌。冷却到60，再加100ml灭菌的170mmol/LKH2PO4/0.72mol/LK2HPO4的溶液（2.31g的KH2PO4和12.54gK2HPO4溶在足量的水中，使终体积为100ml。高压灭菌或用0.22um的滤膜过滤除菌）。 2YT培养基 将下列组分溶解在0.9L水中： 蛋白胨16g 酵母提取物10g 氯化钠4ml 如果需要用1NNaOH（1ml）调整pH至7.0，再补足水至1L。注：琼脂平板需添加琼脂粉12g/L,上层琼脂平板添加琼脂粉7g/L。 YPD培养基 将下列组分溶解在0.9L水中： 蛋白胨20g 酵母提取物10g 葡萄糖20g 用水补足体积为1L后，高压灭菌。建议在高压灭菌之前，对色氨酸营养缺陷型每升培养基添加1.6g色氨酸，因为YPD培养基是色氨酸限制型培养基。为了配制平板，需要在高压灭菌前加入20g琼脂粉。 四.常用抗生素 氨苄青霉素（ampicillin）（100mg/ml） 溶解1g氨苄青霉素钠盐于足量的水中，最后定容至10ml。分装成小份于-20贮存。常以25ug/ml50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。 羧苄青霉素（carbenicillin）（50mg/ml） 溶解0.5g羧苄青霉素二钠盐于足量的水中，最后定容至10ml。分装成小份于-20贮存。常以25ug/ml50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。 甲氧西林（methicillin）（100mg/ml） 溶解1g甲氧西林钠于足量的水中，最后定容至10ml。分装成小份于-20贮存。常以37.5ug/ml终浓度与100ug/ml氨苄青霉素一起添加于生长培养基。 卡那霉素（kanamycin）（10mg/ml） 溶解100mg卡那霉素于足量的水中，最后定容至10ml。分装成小份于-20贮存。常以10ug/ml50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。 氯霉素（chloramphenicol）（25mg/ml） 溶解250mg氯霉素足量的无水乙醇中，最后定容至10ml。分装成小份于-20贮存。常以12.5ug/ml25ug/ml的终浓度添加于生长培养基。 链霉素（streptomycin）（50mg/ml） 溶解0.5g链霉素硫酸盐于足量的无水乙醇中，最后定容至10ml。分装成小份于-20贮存。常以10ug/ml50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。 萘啶酮酸（nalidixicacid）（5mg/ml） 溶解50mg萘啶酮酸钠盐于足量的水中，最后定容至10ml。分装成小份于-20贮存。常以15ug/ml的终浓度添加于生长培养基。 四环素（tetracyyline）（10mg/ml） 溶解100mg四环素盐酸盐于足量的水中，或者将无碱的四环素溶于无水乙醇，定容至10ml。分装成小份用铝箔包裹装液管以免溶液见光，于-20贮存。常以10ug/ml50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。 几种溶液的配制方法 1、PBS: 取ZLI-9061PBS溶于1000ml的蒸馏水中，混匀，测pH值应在7.27.4之间，若偏离此范围，请用0.1N的HCL或NaOH调整。 2、TBS： 2.1Tris缓冲液配方：（0.5MpH7.6） Tris（三羟甲基氨基甲烷）60.57g 1NHCL约420ml 双蒸水加至1000ml Tris缓冲液配制方法：先以少量双蒸水（300500ml）溶解Tris，加入HCl后，用HCl（1N）或NaOH（1N）将pH调至7.6，最后双蒸水加至1000ml。此液为储备液，4冰箱中保存。 2.2TBS配方： Tris-HCI缓冲液（0.5MpH7.6）100ml NaCI8.59g(0.15mol/L) 双蒸水加至1000ml TBS配制方法：先以少量双蒸水溶解NaCl，再加入Tris-HCl缓冲液，最后加双蒸水至1000ml，充分摇匀。 3、柠檬酸盐缓冲液（Citratebuffer）： 3.1储存液： A.0.1M柠檬酸溶液：称取21.01g柠檬酸（C6H8O7H20）溶于1000ml蒸馏水中。 B.0.1M柠檬酸钠溶液：称取29.41g柠檬酸钠（C6H5Na3O72H20）溶于1000ml蒸馏水中。 3.2工作液： 0.1取9mlA液和41mlB液加入450ml蒸馏水中，溶液pH值应为6.0 4、胰酶（Trypsin）： 4.1ZLI-9011胰蛋白酶消化液： 常用浓度为0.125%，即使用前将一滴试剂1胰酶溶液和三滴试剂2胰酶稀释液均匀混合（1:3稀释），则可直接滴加使用。胰酶的最终浓度可以根据使用者的要求进行调整，浓度范围可以从0.05%（1:10稀释）至0.25%（1:1稀释）。 4.2ZLI-9010胰蛋白酶： 取0.05g或0.1g胰蛋白酶加入到100ml0.05%或0.1%pH7.8的无水氯化钙水溶液中，溶解即可。 5、胃酶（Pepsin）： 4%胃蛋白酶，用0.1mol/LHCL配制。 （我公司备有ZLI-9013胃蛋白酶消化工作液，不需稀释直接滴加使用，欢迎选购） 6、DAB： 6.1ZLI-9032/9033DABKit： 使用前只需将试剂盒提供的A、B、C三种试剂各一滴加至1ml双蒸水中，即可获得1mlDAB工作液，简单易用。 6.1ZLI-9030DAB： 6mgDAB溶于10mlTBS（0.05MpH7.6），再加入0.1ml浓度为3的H2O2，过滤掉沉淀物，即可。 7、AEC： 4mgAEC溶于1ml二甲基甲酰胺中，加入14ml浓度为0.1M的醋酸缓冲液（pH5.2），然后加入0.15ml3%H2O2，过滤掉沉淀物。 8、RIPA： 1PBS，1%NP40，0.5sodiumdeoxycholate，0.1%SDS（此液体可长期保存）。以下抑制剂以储存液方式保存，临用前加入RIPA中。 l/ml）m8.110mg/mlPMSF异丙醇溶液（用量为10 l/ml）m8.2Aprotinin（Sigma产品，用量为30 8.31000mMsodiumorthovanadate冷冻液 l/ml）m（用量为10 9、BlottoA： 常规使用1PBS，5%milk，0.05%Tween20。 10、BlottoB： 与Phosphotyrosine抗体共用，1PBS，1%milk，0.05%Tween20。部分实验中milk可完全去除，但可能引起背景增高。