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第十八章 经典液相色谱法,第一节 概述 液相色谱法：以液体为流动相的色谱法称。,经典液相色谱：固定相颗粒较大且不均匀 常压下输送流动相 柱效较低 分析周期长 现代液相色谱：固定相颗粒小且均匀 高压下输送流动相 柱效较高 分析周期短,第二节 液-固吸附柱色谱,（一）分离原理 （二）常用吸附剂 （三）吸附剂和流动相的选择,（一）分离原理 各组分与流动相分子争夺吸附剂表面活性中心 利用吸附剂表面的活性吸附中心对不同组分的 吸附能力差异而实现分离,（二）常用吸附剂：多孔、微粒状物质 1. 硅胶 2. 氧化铝 3. 聚酰胺,1. 硅胶（SiO2H2O）,结构：内部硅氧交联结构多孔结构 表面有硅醇基氢键作用吸附活性中心 表面硅醇基存在形式：,吸附活性的大小顺序是：,游离羟基 束缚形 活泼形,适用：分析酸性或中性物质,硅胶吸附特性：,1）与极性物质或不饱和化合物形成氢键 物质极性，吸附能力，k ，tR 强极性吸附中心，不易洗脱 2）吸水失活 105110OC烘干30分钟(可逆失水)吸附力最大 500OC烘干(不可逆失水)活性丧失，无吸附力,表18-1 硅胶和氧化铝的含水量与活性的关系,续前,4. 三者关系图示： 组分 吸附剂 流动相 极性 活性小 极性 非(弱)极性 活性大 非极性或弱极性,第三节、薄层色谱法,（一）概述 （二）定性参数 （三）吸附剂的选择 （四）展开剂的选择 （五）薄层板的制备 （六）定性与定量分析,（一）概述,1定义：将固定相均匀涂布在表面光滑的平板上， 形成薄层而进行色谱分离和分析的方法 2操作过程：见图示 铺板 活化 点样 展开 定位(定性)/洗脱(定量),3分离机制：吸附（分配，离子交换，空间排阻） 4特点：分析快速、灵敏、显色方便 5应用：药物杂质检查、纯度测定 next,图示,图示,L0,L1,L2,（二）定性参数,1. 比移值Rf,续前,讨论 Rf与K有关，即与组分性质（溶解度）以及薄层板 和展开剂的性质有关 色谱条件一定，Rf只与组分性质有关，是薄层色谱基本定性参数，说明组分的色谱保留行为,续前,1）K大，Rf小 2）薄层板一定，对于极性组分 展开剂极性大，Rf大（容易洗脱） 展开剂极性小，Rf小 （不容易洗脱） 3）Rf范围：0 Rf 1 （组分迁移速度和距离小于展开剂迁移速度和距离） Rf = 0.20.8（常用） 0.30.5（最佳）,续前,2. 相对比移值Rs,讨论 参考物与被测组分在完全相同条件下展开 可以消除系统误差，大大提高重现性和可靠性； 参考物可以是后加入纯物质，也可是样品中已知组分 相对比移值Rs与组分、参考物性质及色谱条件有关，范围可以大于或小于1,3.影响比移值的因素,1）被分离物质的结构和性质 2）薄层板的性质 3）展开剂的极性 4）温度 5）展开槽内的展开剂蒸气饱和程度,（三）分离参数,分离度（R） 两相邻斑点中心距离与两斑点平均宽度（直径）的比值成为分离度 R=2d/(W1+W2),（三）吸附剂的选择 根据被测物极性和吸附剂的吸附能力 被测物极性强弱极性吸附剂 被测物极性弱强极性吸附剂,（四）展开剂的选择（同液固吸附色谱流动相的选择） 根据被测组分、吸附剂和展开剂本身的极性,（五）薄层板的制备,定性分析窄条 定量分析1020cm,（六）点样和展开 （七） 定性与定量分析 定性分析日光，紫外光，显色 定量分析洗脱法，薄层扫描法,第四节 纸色谱法,将固定相放在纸上，以纸做载体进行点样、展开、 定性、和定量的液-液分配色谱法,固定相：纸纤维吸附的水 流动相：与水不互溶的有机溶剂（饱和正丁醇） 分离机制：同液-液分配色谱 定性参数：,讨论：Rf与组分性质、流动相及溶解度有关 极性组分易保留，Rf 小（流动相极性， Rf ） 非极性组分易流出，Rf大（流动相极性，Rf ）,第五节 离子交换柱色谱,一 离子交换树脂 1 阳离子交换树脂 2 阴离子交换树脂 二 离子交换树脂的性能 1 交联度（degree of cross linking） 2 交换容量(exchange capacity) 三 离子交换色谱法的分离原理,
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