波尔山羊人工授精的技术程序

山东永丰牧业波尔山羊人工授精的技术程序 1采精 (1)采精前准备 (I)采精室(场)的准备。采精室地面用01的新洁尔灭溶液或35煤酚皂(来苏儿)或石炭酸溶液喷洒消毒，夜间打开紫外线灯消毒，山东永丰牧业工作服可在夜间挂在采精室进行紫外线消霉。 ()台羊或采精台的准备。采精前，将活台羊牵入采精架加以保定，然后彻底清洗其后躯，特别是尾根、外阴、肛门等部分。外阴部用2来苏儿水消毒，并用干净抹布擦干。如用假母羊做台羊，须先经过训练，即先用真母羊为台羊，采精数次，再改用假母羊为台羊。 ()公羊性准备。种公羊采精前性准备的充分与否，直接影响着精液的数量和质量。因此，在临采精前，均须以不同诱情方法使公羊有充分的性欲和性兴奋。一般采取让公羊在活台羊附近停留片刻，进行几次假爬跨或观看其他公羊爬跨射精等方法，可增加性刺激强度，表现出较强烈的性行为。 利用假台羊采精，要事先对种公羊进行调教，使其建立条件反射。调教的方法：在假台羊的后躯涂抹发情母羊的阴道黏液和尿液，公羊则会受到刺激而引起性兴奋并爬跨假台羊，经过几次采精后即可调教成功；在假台羊旁边牵一发情母羊，诱使公羊进行爬跨，但不让其交配而把其拉下，反复多次，待公羊的性冲动达高峰时，迅速牵走母羊，令其爬跨假台羊采精；将待调教的公羊拴系在假台羊附近，让其目睹另一头已调教好的公羊爬跨假台羊，然后再诱其爬跨。在公羊调教过程中，要反复进行训练，耐心诱导，切勿施用强迫、恐吓、抽打等不良刺激，以防止性抑制而给调教造成困难。获得第一次爬跨采精成功后，还要经过几次反复，山东永丰牧业以便使公羊建立巩固的条件反射。此外，还要注意人畜安全和公羊生殖器官的清洁卫生。 (2)采精方法(假阴道) (I)假阴道的准备。假阴道的安装和消毒。首先检查所用的内胎有无损坏和沙眼。安装时先将内胎装入外壳，使光面朝内，并要求两头等长，然后将内胎一端翻套在外壳上，依 同法套好另一端，此时勿使内胎有扭转情况，并使松紧适度，然后在两端分别套上橡皮圈固定之。用长柄镊子夹上70酒精棉球消毒内胎，从内向外旋转，勿留空间，要求彻底，待酒精挥发后，用生理盐水棉球多次擦拭。山东永丰牧业将消毒好的集精杯用生理盐水棉球多次擦之，然后安装在假阴道的一端，如图42所示。2 7 1 图4-2羊采精用假阴道1外壳2内胎3固定胶圈4集精杯5气嘴6。水管7温水 ()灌注温水。左手握住假阴道的中部，右手用量杯或吸水球将温水(5055U)从灌水孔灌人，水量为外壳与内胎间容量的l213为宜。实践中常竖立假阴道，水达灌水孔即可。最后装上带活塞的气嘴，并将活塞关好。 ()涂抹凡士林。用消毒玻璃棒取少许经消毒的凡士林涂抹一薄层，涂抹深度以假阴道长度的前l312处为宜。 ()检温、吹气加压。用消毒的温度计插入假阴道内检查温度，以采精时达3942*(2为宜。若温度过高或过低，山东永丰牧业可用冷水或热水加以调节。当温度适宜时向夹层注入空气，使涂凡士林一端的内胎壁遇合，口部呈三角形裂隙为宜。最后用纱布盖好入口，准备采精。 (V)采精技术。采精人员右手握住假阴道后端，固定好集精杯(瓶)，并将气嘴活塞朝下，蹲在台羊右后侧，让假阴道靠近母羊的臀部；在公羊跨上母羊背侧的同时，将假阴道与地面保持3540。角，迅速将公羊的阴茎引入假阴道内，切勿用手抓碰摩擦阴茎；若假阴道内温度、压力、滑度适宜，当公羊后躯急速用力向前一冲时，即已射精；此时，顺公羊动作向后移下假阴道，并迅速将假阴道竖起，集精杯一端向下；然后打开活塞上的气嘴，放出空气，取下集精杯，用盖盖好，送精液处理室待检。 ()采精频率。合理安排公羊采精频率是维持公羊健康和最大限度采集精液的重要条件。公羊采精频率要根据精子产生数量、储存量、每次射精量、精子活率、精子形态正常率和饲养管理水平等因素来决定。随意增加采精次数，不仅会降低精液品质，而且会造成公羊生殖机能降低和体质衰弱等不良后果。山东永丰牧业在生产上，公绵羊和公山羊射精量少而附睾储存量大。由于配种季节短，每天可采精多次，连续数周，不会影响精液质量。山羊的适宜采精频率见表43。对于常年采精公羊，采精频率通常为每周2 d采精，每天采精2次。生产上所采精液样品中如出现未成熟精子、精子尾部近头端有未脱落原生质滴、种公羊性欲下降等，都说明公羊采精次数过多，这时应立即减少或停止采精。表43正常成年公羊的采精频率及其精液特性 2精液品质检查(评定) (1)精液的外观检查 (I)精液量。射精量是指公羊1次采精所射出精液的容积，可以用带有刻度的集精瓶(管)直接测出，绵、山羊公羊射精量如表53所列。当公羊的射精量太多或太少时，都必须查明原因。若射精量太多，可能是由于副性腺分泌物过多或其他异物(尿、假阴道漏水)混入；如过少，可能是由于采精技术不当、山东永丰牧业采精过频或生殖器官机能衰退所致。凡是混入尿、水及其他不良异物的精液，均不能使用。 ()色泽与气味。羊正常精液呈乳白色或浅乳黄色，其颜色因精子浓度高低而异。乳白程度越重，表示精子浓度越高。若精液颜色异常，表明公羊生殖器官有疾病。如精液呈淡绿色表示混有脓汁；呈淡红色是混有血液；呈黄色是混入尿液等。诸如此类色泽的精液，应该弃去或停止采精。 精液一般无味。有的带有动物本身的固有气味，如羊精液略有膻味。任何精液若有异昧如尿味、腐败臭味时应停止使用。 ()云雾状。羊正常精液因精子密度大而呈混浊不透明状，肉眼观察时，由于精子运动翻腾滚滚如云雾状。精液混浊度越大，云雾状越显著，乳白色越浓，表明精子密度和活率也越高。 (2)显微镜检查。 (I)精子活率检查。精子活率是指精液中呈前进运动精子所占的百分率。由于只有具有前进运动的精子才可能具有正常的生存能力和受精能力，所以精子活率与母羊的受胎率有密切关系，它是目前评定精液品质优劣的重要指标之一。一般鲜精子活率在60以下不可用于配种。 检查精子活率的常用方法是目测评定法。通常采用光学显微镜放大200 400倍，对精液样品检查标本进行目测评定。山东永丰牧业可在普通的玻璃片上滴一滴精液，然后用盖玻片均匀盖着整个液面，做成压片，在显微镜下目测评定标本。也可采用精液检查板法。精液检查板是由日本西川义正等人设计，可使被检查的精液样品厚度均匀地保持在50 tan，因此观察时不易产生误差。使用时将精液滴在检查板中央，过量的精液将会自动流向四周，再盖上盖玻片，即制成检查标本。羊的原精液密度大，可用生理盐水、5的葡萄糖溶液或其他等渗稀释液稀释后再进行制片。 精子的活动受室内温度影响极大。温度高了，活动加快；温度低了，则活动减弱。因此，检查时室温应保持在1830之间，显微镜周围温度3738C的保温箱内进行。 精子运动方式可分为直线前进运动、旋转运动、摆动运动3种。精子的直线前进运动最有利于受精。评定精子活率时就是以精液中精子直线前进运动的百分比来衡量。 ()精子密度检查。精子密度通常是指每毫升精液中所含精子数。根据精子密度可以计算出每次射精量中的总精子数，再结合精子活率和每次输精量中应含有效精子数，即可确定精液合理的稀释倍数和可配母羊的只数。因此，精子的密度也是评定精液品质优劣的常规检查中的主要项目。但一般只需在采精后对新鲜的原精液做一次性密度检查即可。 目前测定精子密度的主要方法是目测法、山东永丰牧业血细胞计计数法和光电比色测定法。目测法(又称估测法)在检查精子活力时同时进行，在显微镜下可根据精子稠密程度，分为密(25亿个mL以上)、中(20亿25亿个mL)、稀(20亿个mL以下)3级，如图4，3所示。“密”指在视野中精子之间距离小于1个精子的长度；“中”指在视野中精子之间距离大约等于l个精子的长度；“稀”指在视野中精子之间距离大于1个精子的长度。 血细胞计计数法采用该法计算精子与计算血液中红细胞、白细胞的操作方法相类似。这是一种比较准确地测定精子密度的方法，且设备比较简单，但操作步骤较多，故一般 图4-3羊精子密度示意图也只对公羊精液品质做定期检查时采用。其操作方法如下：用红血细胞吸管吸至“05”，然后再吸人3氯化钠溶液至“101”刻度，稀释200倍。以拇指及食指分别按住吸管的两端，充分摇动使精液和3氯化钠溶液混合均匀，然后弃去吸管前端数滴，将吸管尖端放在计算板与盖玻板之间的空隙边缘，使吸管中的精液流入计算室，充满其中。在400600倍显微镜下观察，以计数器数出5个大方格内精子数。计算时以精子头部为准，在方格四边线条上的精子，只计算上边和左边的，避免重复。选择的5个大方格，应位于l条直角线上或四角各取l个，再加上中央1个。山东永丰牧业求得5个大方格的精子总数后，乘上1 000万或加7个零，即可得每毫升精液所含精子数。 光电比色计精子密度测定法美国Sa Lisbury等1943年以后研究应用此法。其原理是精子密度越高，其精液越浓，以至透光性越低，从而使用光电比色计通过反射光或透射光能准确地测定精液样品中的精子密度。目前世界各国已较普遍应用于牛、羊精子密度的测定。其优点是准确、快速、使用精液量少，仪器价格一般，经久耐用，操作简便，一般技术人员均可掌握。其方法是事先将原精液稀释成不同倍数，并用血细胞计计算其精子密度，从而制成已知系列各级精子密度的标准管，然后使用光电比色计测定其透光度，根据透光度求出每相差1透光度的级差精子数，编制成精子密度查数表备用。一般检测精液样品时，只需将原精液按1：801：100的比例稀释后，先用光电比色计测定其透光值，然后根据透光值查对精子密度查数表，即可从中找出其相对应的精子密度值。 ()精子形态检查。精子的形态正常与否与受胎率有着密切的关系。如果精液中形态异常的精子所占的比例过大，不仅影响受胎率，甚至可能造成遗传障碍，所以有必要进行精子形态的检查。特别是冷冻精液，对精子的形态检查更有必要。精子形态检查有畸形率和顶体异常率检查2种。 畸形率。一般品质优良的精液，山东永丰牧业其精子畸形率不超过14，普通的也不能超过20，超过20以上者，则会影响受精率，不宜用做输精。 畸形精子一般分四类：头部畸形，如头部巨大、瘦小、细长、圆形、轮廓不明显、皱褶、缺损、双头等；颈部畸形，如颈部膨大、纤细、屈折、不全，带有原生质滴、不鲜明、双颈等；体部畸形，如体部膨大、纤细、不全，带有原生质滴、弯曲、屈折、双体等；尾部畸形，如尾部弯曲、屈折、回旋、短小、长大、缺损、带有原生质滴、双尾等。正常精子及各类型畸形精子如图44所示。一般头、颈部畸形较少，体、尾部畸形较多。 精液中有大量畸形精子出现时，证明：精子的生成过程中受到破坏；副性腺及尿道分泌物有病理变化；由精液射出起至检查时或保存过程中，因没有遵守技术操作规程使精子受到外界不良影响。 畸形精子检查方法：先将精液用生理盐水或稀释液做适当稀释后，做涂片。干燥后，浸入96酒精或5福尔马林中固定25 min，用蒸馏水冲洗。阴干后可用伊红(美蓝、龙胆紫、红墨水也可以)染色25rain用蒸馏水冲洗即可放在 图44畸形精子类型图1正常精子2脱落的原生质滴3各类畸形精子4精子头尾分离 5，6带原生质滴精子7尾弯曲精子8脱落顶体600 1 500倍显微镜下检查，总数不少于300个。畸形精子率的计算为畸形精子占计算总精子数的百分比。在日常精液检查中，不需要每天检查，只有在必要时才进行。 精子顶体异常率。同畸形率检查一样制成抹片，待自然干燥后再用福尔马林磷酸固定液固定15 min，水冲洗后用姬姆萨缓冲液染色l520 h，再用水冲洗干燥后，用树脂封装，置于l 000倍以上普通显微镜下随机观察500个精子(最少不得少于200个)，即可计算出顶体异常率。山东永丰牧业顶体异常一般表现有膨胀、缺损、部分脱落和全部脱落等情况(图45)。 福尔马林磷酸盐固定液的配制：先配制089氯化钠(Naa)溶液。取225 9 Na2Ht】O42H20和055 9 NattzP042H20放入容量瓶中加入0：89氯化钠(NaCl)溶液约30mL。在 图45精子顶体异常图1正常顶体2顶体膨胀3顶体部分脱落4顶体全部脱落3012左右待磷酸盐全部溶解，加入经碳酸镁(MgC03)饱和的甲醛8 mL。再用089氯化钠(Naa)溶液配制到100 n1L，静止24 h后即可使用。 姬姆萨原液的配制：取姬姆萨染料1 9，甘油66 mL，甲醛66 mL；先将姬姆萨粉剂溶于少量甘油中，在研钵内研磨，直至无颗粒为止；再将全部甘油倒人，置于56恒温箱中2 h；然后加入甲醛，密封保存于棕色瓶中。 3精液的稀释 (1)精液稀释的目的。绵、山羊的精液密度大，一般1 mL 原精液中约有25亿个精子，但每次配种，只要输入5 000万8 000万个精子，就可使母羊受胎。精液稀释以后不仅可以扩大精液量，增加可配母羊只数，更重要的是稀释液可以中和副性腺的分泌物，缓解对精子的损害作用，同时供给精子所需要的营养，为精子生存创造一个良好的环境，从而达到延长精子存活时间，便于精液的保存和运输。 (2)稀释液的主要成分和作用。 (I)稀释剂。稀释剂主要用于扩大精液容量。山东永丰牧业各种营养物质和保护物质的等渗溶液都具有稀释精液、扩大容量的作用，只不过其作用有主次之分而已。一般用于扩大精液量的物质多采用等渗氯化钠、葡萄糖、果糖、蔗糖及奶类等。 ()营养剂。营养剂主要提供营养以补充精子生存和运动所消耗的能量。常用的营养物质有葡萄糖、果糖、乳糖、奶和卵黄等。 ()保护剂。保护剂指对精子能起保护作用的各种制剂，如维持精液pH值缓冲剂，防止精子发生冷休克的抗冻剂，以及创造精子生存的抑菌环境等。 缓冲物质。在精液保存过程中，随着精子代谢产物(如乳酸和c02)的积累，pH值会逐渐降低，超过一定限度时，会使精子发生不可逆的变性。因此，为防止精液保存过程中的pH值变化，需加入适量的缓冲剂。常用的缓冲物质有柠檬酸钠、酒石酸钾钠、磷酸二氢钾等。 抗冻物质。在精液的低温和冷冻保存中，山东永丰牧业必须加入抗冻剂以防止冷休克和冻害的发生。常用的抗冻剂为甘油和二甲基亚砜(DMSO)等。此外，奶类和卵黄也具有防止冷休克的作用。 抗菌物质。在精液稀释中必须加入一定剂量的抗菌素，以抑制细菌的繁衍。常用的抗菌素有青霉素、链霉素和氨苯磺胺等。 其他添加剂。其他添加剂的主要作用是改善精子外在环境的理化特性，以及母羊生殖道的生理机能，以利于提高受精机会，促进受精卵发育。常用的添加剂有以下几类： (I)酶类。如过氧化氢酶具有能分解精子代谢过程中产生的过氧化氢，消除其危害以提高精子活率的作用；口一淀粉酶具有促进精子获能，提高受胎率的作用。 ()激素类。如催产素、PGE等可促进母羊生殖道蠕动有利于精子运行而提高受胎率。 ()维生素类。如维生素Bl、维生素82、维生素812、维生素C、维生素E等，具有改善精子活率，提高受胎率的作用。 另外，如CQ、己酸、植物汁液等可调节稀释液的pH值；ATP、精氨酸、咖啡因、冬眠灵等具有提高精子保存后活率的作用。 (3)稀释液的种类和配制方法。 (I)稀释液的种类。根据稀释液的性质和用途，稀释液可分为现用稀释液、常温保存稀释液、低温保存稀释液和冷冻保存稀释液4类。 现用稀释液。以扩大精液容量、增加配种头数为目的的现用稀释液适用于采精后稀释，立即输精用。在牧场、农村饲养种公羊的单位开展人工授精可采用这种稀释液。现用稀释液以简单的等渗糖类和奶类物质为主体配制而成，也可将085或089氯化钠溶液高压灭菌后使用。 常温保存稀释液。该类稀释液适应精液常温短期保存用，一般pH值较低。肉羊常温保存稀释液有鲜乳稀释液、葡萄糖一柠檬酸钠一卵黄稀释液。鲜乳稀释液是将新鲜牛奶或羊奶用数层纱布过滤，然后在水浴锅中加热至9295，维持1015 min，冷却至室温，除去上层奶皮，每毫升加青霉素1 000 IU、链霉素l 000 tt9，用于山、绵羊精液的稀释。葡萄糖一柠檬酸钠一卵黄稀释液是用l00 mL蒸馏水加3 9无水葡萄糖、14 9柠檬酸钠溶解过滤后煮沸消毒1520 min，降至室温加入20 mL新鲜卵黄，每毫长加入青霉素1 000 IU、链霉素l 000耀，适用于绵羊精液稀释；l00 mL蒸馏水加5 9乳糖、3 9无水葡萄糖、l5 9柠檬酸钠或加人55 9葡萄糖、099果糖、06 9柠檬酸钠、017 9乙二胺四乙酸二钠山东永丰牧业，溶解过滤消毒冷却后每毫升加青霉素l 000 IU、链霉素l 000 tL9，适用于山羊精液稀释。 低温保存稀释液适应精液低温保存用，其成分较复杂，多数含有卵黄和奶类等抗冷休克作用物质，还有的添加甘油或二甲基亚砜等抗冻害。 绵羊精液保存稀释液配方为：10 9奶粉加100 mL蒸馏水配成基础液，取90基础液和10卵黄再加上l 000 IUh】L青霉素和1 000 99mL双氢链霉素制成稀释液。山羊精液保存稀释液配方为：葡萄糖08 9，二水柠檬酸钠2。8 9，加蒸馏水100 mL配成基础液，取80基础液、20卵黄、青霉素1 000IUmL、双氢链霉素l 000 99mL配成稀释液。 徐刚毅等用葡萄糖一卵黄一柠檬酸低温保存稀释液保存波尔山羊精液49 h后活力可达60。茆干达等对影响波尔山羊精液低温保存效果因素研究结果表明，卵黄的加入不利于精液的保存，组分为不含卵黄的I ris-柠檬酸稀释液低温保存的精子有效存活时间显著好于含有卵黄的葡萄糖哥L糖一柠檬酸钠一卵黄及葡萄糖柠檬酸钠一乙二胺四乙酸一卵黄低温保存稀释液；同时研究结果还表明，在稀释液中添加50 tt9mL恩。诺沙星比添加青霉素、链霉素对精液保存效果要好；此外，还发现在稀释液中添加抗氧化剂褪黑激素和SOD可延长精子存活时间。可见羊低温保存稀释液的配方仍待进一步深入研究。 冷冻保存稀释液。请参阅第6章肉羊精液冷冻保存技术第三节精液冷冻保存技术程序中冷冻稀释液部分。 ()稀释液的配制方法 配制稀释液所使用的用具、容器必须洗涤干净，消毒，用前经稀释液冲洗。 稀释液必须保持新鲜。如条件许可，山东永丰牧业经过消毒、密封，可在冰箱存放l周，但卵黄、奶类、活性物质及抗生素必须在用前临时添加。 所用的水必须清洁无毒性。蒸馏水或去离子水要求新鲜。使用沸水应在冷却后用滤纸过滤，经过实验对精子无不良影响才可使用。 药品成分要纯净，称量需准确，充分溶解，经过滤后进行消毒。高温变性的药品不宜高温处理，应用绍菌滤膜以防变性失效。 使用的奶类应在水浴中灭菌(9095)10 rain，除去奶皮。卵黄要取自新鲜鸡蛋，取前应对蛋壳消毒。 抗生素、酶类、激素、维生素等添加剂必须在稀释液冷却至室温时，按用量准确加入。 (4)稀释方法和倍数。 (I)稀释方法。精液稀释的温度要与精液的温度一致，在2025时进行稀释。将与精液等温的稀释液沿精液瓶壁缓缓倒入，用经消毒的细玻璃棒轻轻搅匀。如做20倍以上高倍稀释时，应分两步进行，先加入稀释液总量的l312做低倍稀释，稍等片刻后再将剩余的稀释液全部加入。稀释完毕后，必须进行精子活率检查，如稀释前后活率一样，即可进行分装与保存。 ()稀释倍数。精液进行适当倍数的稀释可以提高精子的存活力。绵、山羊的精液一般稀释比例为1：21：4；精子密度在25亿以上的精液可以l：40 1：50稀释。根据试验，山羊精液以1：10稀释的常温精液受胎率达95。16，甚至以1：20，1：30，1：40，1：50，1：80，1：100等6种稀释比例，输精后的情期受胎率均在80以上。其中1：201：40的情期受胎率达91。749723，l：501：100的情期受胎率达81828938。 4液态精液的保存和运输 (1)液态精液的保存。精液保存时可暂时抑制或停止精子的运动，降低其代谢速度，减缓其能量消耗，以达到延长精子存活时间而又不至于丧失受精能力。精液的保存方法，一般可按保存温度分为常温(1525)保存、低温(05)保存、冷冻(一79或一196)保存等。 (工)常温保存。 概念。常温保存温度为l525，允许温度有一定的变动幅度，所以也称变温保存或室温保存。山东永丰牧业常温保存无需特殊的温控和制冷设备，比较简便。特别是绵羊精液采用常温保存，比低温或冷冻保存的效果相对较好。一般绵山羊精液常温保存48 h以上，活力仍可达原精液活力的70。其缺点则是保存时间较短。 常温保存方法。将稀释后的精液装瓶密封，用纱布或毛巾包裹好，置于l525CN度中避光保存。通常采用隔水保温方法处理。也可将储精瓶直接放在室内、地窖或自来水中保存。 ()低温保存 概念。将羊的精液保存于05环境下，称低温保存。低温保存时间较常温保存时间长。由于绵羊精液的特异性，采用低温保存效果尚不理想，还有待于进一步研究。 原理。精液稀释后缓慢降温至0-52保存，利用低温来抑制精子活动，降低代谢和能量消耗，抑制微生物生长，以达到延长精子存活时间的目的。当温度回升后，精子又恢复正常代谢机能并维持其受精能力。山东永丰牧业为避免精子发生冷休克，在稀释液中须添加卵黄、奶类等抗冷物质，并采用缓慢降温的方法。 低温保存方法。 降温处理精子发生冷休克的温度是100。稀释后的精液，为避免精子发生冷休克，必须采取缓慢降温方法，从30。C降至5时，每分钟下降02左右为宜，整个降温过程需12 h完成。方法是将分装好的精液瓶用纱布或毛布包缠好，再裹以塑料袋防水，置于05低温环境中存放，也可将精液瓶放入30。CN水的容器内，一起置放在05t；氐NN境中，经l2 h，精液温度即可降至O-59。 保存方法最常用的方法是将精液放置在冰箱内保存，也可用冰块放入广口瓶内代替；或者在广口瓶里盛有化学制冷剂(水中加入尿素、硫酸铵等)的凉水内；还可吊入水井深处保存。无论哪种方法，均应注意维持温度的恒定。 升温处理低温保存的精液在输精前要进行升温处理山东永丰牧业。升温的速度对精子影响较小，故一般可将储精瓶直接投入30温水中即可。 (2)液态精液的运输。用塑料细管盛装和运输液态精液 非常方便，值得大力推广。运输精液的细管可用内径03 cIn、长20 crll的灭菌软塑料管；每管装稀释精液04405 mE；在酒精灯上将细管两端加热，待管端熔化时，用镊子夹一下，将两端密封。运输距离在12 h的路程时，可用干净的毛巾或软纸包起来，装在运输人衣袋内带走。输精时，将精液细管一端的封口剪开，沿阴道上壁插入母羊阴道底部，再将另一端剪开，精液就会流入发情母羊的阴道，保持一两分钟后放开母羊。应注意的是，不能沿阴道下壁插入，否则有可能将细管插入尿道。如果运输距离在46 h以上的路程时，就要将装有精液的细管放入盛有凉水和冰块的保温瓶中运输，到达目的地后，从保温瓶中取出细管，使温度回升，按上述方法输精。 液态精液运输时应注意以下几项事宜：盛装精液的器具应安放稳妥，做到避光、防湿、防震、防撞；运输途中，必须维持精液的温度恒定，切忌温度升降变化；运输精液应附有精液运输单，其内容有：发放的站名、公畜品种和畜号、采精日期、精液剂量、稀释液种类、稀释倍数、精子活率和密度等内容。 5母羊的发情鉴定 (1)外部观察法。外部观察法适用于各种动物。此法主要观察母羊外部表现和精神状态，从而判断其是否发情和发情程度。发隋动物常表现为兴奋不安，对周围外界的刺激反应敏感，常呜叫，举尾弓背，频频排尿，食欲减退，放牧的母羊离群独自行走，喜主动寻找和接近公羊，愿意接受公羊交配，并摆动尾部，后肢岔开，后躯朝向公羊，当公羊追逐或爬跨时站立不动。泌乳母羊发情时，泌乳量下降，不照顾羔羊。羊的发隋期短，外部表现不明显，因此常结合试情法进行发情鉴定。 (2)试情法。试情法是根据母羊对试情公羊的反应行为 来判定是否发情。发情时，母羊通常表现为愿意接近公羊，弓腰举尾，后肢开张山东永丰牧业，频频排尿，有求配动作等。不发情或发情结束后的母羊则表现为远离公羊，当强行牵拉接近时，往往会出现躲避行为，甚至踢、咬等抗拒行为。这种方法简易可行，有相当高的准确性。除此之外，试情公羊还能起促进母羊发情和排卵的作用。在配种期内，每日定时(清晨l次或上、下午各l次)将试情公羊放人母羊群中，让公羊自由接触母羊，将接受公羊爬跨或被试情公羊追赶的发情母羊及时抓出，不让试情公羊与母羊交配。试情公羊一般选用24岁体质健壮、性欲旺盛、无恶癖的非种用公羊。试情公羊的头数为母羊数的35。试情时可分批轮流使用。试情期间适当添草补料，保证精力充山 沛。母羊置于试情圈内，地面干燥，环境安静。试情圈宜小不宜大，圈大羊少，增加试情公羊的负担，圈小羊多，容易漏选、错选发情母羊；试情圈面积以每只羊1215 m2为宜。试出的发情母羊挑出后放在另一空圈内。试情结束后，最好选用另一头试情公羊，对全部挑出的发情母羊重复试情l次。试情期间，有专人在羊群中走动，把密集成堆或挤在圈角的母羊赶开。试情公羊不用时要关好，不能混入母羊群内。输精前，输精员用开膣器检查母羊阴道及阴道黏液情况，对于发情过期、发情不到期的母羊不予输精，以保证输精质量。试情公羊处理可采用试情布法、切除输精管法、睾酮处理羯羊等。试情布法是取长60 cm、宽40锄的细软白布l块，四角缝上布带，拴在试情公羊腰部，将阴茎兜住，不影响公羊行动和爬跨，照常射精，但精液被试情布兜住，不能与母芋直接交配。每次试情完毕，要及时解下试情布，洗净晾干。 切除输精管法是选择12岁健康公羊，在45月份进行手术。这时天气凉爽，无蚊蝇叮咬，容易愈合。将公羊左侧卧，由助手保定；取术者操作方便姿势，对术部消毒，术者不熟练时可用局部麻醉。在睾丸基部触摸精索(有坚实感)找输精管，用拇指和食指捻转捏住，或用食指紧压皮肤。术部切口。切开皮肤和鞘膜，露出输精管；用消毒好的钳子将输精管带出创面，分离结缔组织和血管，剪去45锄一段输精管(剪得过少有可能愈合时接连)。术口撒抗生素粉剂，缝合伤口。重复另侧输精管切除手术。手术成功的话，公羊23 d即可恢复性欲和正常爬跨行为。剐术后恢复的试情羊，由于输精管内残存的精子完全排净起码要6周，因此在此之前要避免公羊接触母羊。为确保不发生错配，正式试情前最好采精l次检查精液中有无精子存在。山东永丰牧业一切无误后，方可正式用于试情。 睾酮处理法是将由于睾丸被摘除而不再表现性行为的公羊利用注射或埋植睾酮方法加以处理，从而引发羯羊恢复雄性行为，但不具有精子发生过程，可以做试情公羊用；试情利用强度不如前2种试情方法。可选择适宜的l岁以匕羯羊，皮F注射l50 rn9丙酸睾酮，1周1次，连续3次。如果计划配种全期使用，每隔2周再补充注射l次，剂量仍为l50 n埂。 (3)阴道检查法。阴道检查法是应用阴道开张器或扩张筒插入母羊阴道，观察其阴道黏膜的色泽和充血程度、子宫颈的弛缓状态、子宫颈外口开口的大小和黏液的颜色、分泌量及黏稠度等，以判断母羊的发情程度。在检查时，器械要经灭菌消毒；插入时要小心谨慎，以免损伤阴道壁。由于基础学科的发展，阴道检查法所凭借的不少生理性状得到了科学的验证如黏液的涂片结晶法已成为独立的发情鉴定方法。阴道的周期性充血认为是与排卵有一定联系。有的性状如子宫颈管开放程度的变化可作为很好的判断依据。再结合其他性状变化可以提高发情鉴定的准确性。但是这种方法因不能准确地判断母羊的排卵时间，只能是在必要时作为辅助性的检查手段。 6输精 (1)输精前的准备 (I)母羊准备。将发情母羊两后肢担在输精室内离地高度50 cm左右的横杠式输精架上或站立在输精坑边。若无输精架或输精坑时可由工作人员保定母羊，其方法是工作人员倒骑在羊的颈部，用双手握住羊的两后肢飞节上部并稍向上提起，以便于输精。在输精前先用001的高锰酸钾或2的来苏儿水消毒输配母羊外阴部，再用温水洗掉药液并擦干，最后以生理盐水棉球擦拭。 (II)器械准备。各种输精用具在使用之前必须彻底洗净消毒，用灭菌稀释液冲洗。玻璃和金属输精器，可置入高温干燥箱内消毒或蒸煮消毒。橡胶管不宜高温，可蒸汽消毒。阴道开张器及其他金属器材等用具，可高温干燥消毒，也可浸泡在消毒液内或利用酒精火焰消毒。 输精枪以每头母羊l支为宜。山东永丰牧业当不得已数头母羊用1只输精枪时，每输完l头后，先用湿棉球(或卫生纸或纱布块)由尖端向后擦拭干净外壁，再用酒精棉球涂擦消毒，其管内腔先用灭菌生理盐水冲洗干净，后用灭菌稀释液冲洗方可再使用。 (HI)精液准备。用于输精的精液，必须符合羊输精所要求的输精量、精子活率及有效精子数等。 (IV)X员准备。输精人员要身着工作服，手洗干净后以75酒精消毒，待酒精完全挥发干再持输精器。 图46羊用注射输精器1注射器活塞夹2刻度板3注射器圆筒夹4螺旋转轮 5容量2 mL羊用导管注射器 (2)输精的要求。 (工)输精时间。母羊输精时间一般在发情后1036 h。在生产上，一般早晨发现母羊发情，可在当天下午输精；傍晚发现母羊发情，可于第二天上午输精。为提高母羊受胎率，可第一次输精后间隔l2 h再输l次，此后若母羊仍继续发情，可再输精l次。 ()输精量。原精液可为0O5O1 mL，稀释后精液或冷冻精液应为01O。2 mL。要求每个输精剂量中有效精子数应不少于2 000万个。 ()输精方法。将发情母羊两后肢担在输精室内离地高度50cm左右的横杠式输精架上(图47)或站立在输精坑边图47母羊在横杠式输精架上图48母绵羊进行凹坑 输精示意图(图48)。若无输精架或输精坑时可由工作人员保定母羊，其方法是工作人员倒骑在羊的颈部，用双手握住羊的两后肢飞节上部并稍向上提起，以便于输精。输精时将开膣器插入阴道深部，之后旋转90。，开启开膣器寻找子宫颈口。如果在暗处输精，用额灯或手电筒光源辅助。开膣器开张幅度宜小(23 ClTI)，从缝里找子宫颈口较容易；否则开张越大，刺激越大，羊努责，越不易找到子宫颈口。子宫颈口的位置不一定正对阴道，但其在阴道内呈一小突起，附近黏膜充血而颜色较深。找到子宫颈口后，将输精器插入子宫颈口内l2 crn处将精液缓缓注入。有些羊需用输精器前端拨开子宫颈外I-3上、下2片或3片突起皱壁方可将输精器插入子宫颈日内。若子宫颈日较紧或不正者，可将精液注到子宫颈口附近，但输精量应加大l倍。输完精后先将输精器取出，再将开膣器抽出。 注意，输精瞬间，应缩小开膣器开张程度，减少刺激，并向外拉l3，使阴道前边闭合，容易输精。输精完毕母羊在原保定位置停留一会再放开，将母羊赶走。输精人员的手和输精器外壁要用生理盐水擦净后再操作。输精总的原则要求做到适时、深部、慢插、轻注、稍站l0字。