兽医临床病理学

兽医临床病理学一. 概述1. 课程名称 兽医临床病理学是兽医临床诊断学的一个重要分支。它主要是运用病理学的研究方 法，从实验检验的角度，来诊断和分析动物疾病的一门科学。实际上可称之为“兽医实验诊 断学”或“兽医临床检验”。2. 发展历程从主观f客观；从手动f自动；从复杂f简单。最早的临床检验始于医生对病人尿液的肉眼观察，经历漫长的发展，以后逐渐演变 成目前的全自动化超微量的临床检验。二十世纪以来，医学领域大量地引进现代科学技术，加快了实验医学的发展步伐。 特 别是近20 年来，电子技术、计算机、分子生物学、免疫学、生物医学工程等多学科的发展 促进了实验诊断学科的飞速发展。现在已达到了一个较高的水平3. 现有的参考资料 Veterinary Clinical Pathology 美国肯色斯洲立大学兽医学院实验医学主任 EmbertH. Coles （科尔斯）教授所著。综合了动物病理生理学、实验诊断学等资料； 介绍了兽医临诊实验室检查技术； 分析和解释了各种检测数据和检验结果；对兽医教学、科研和临床实践 都有应用和参考价值。 兽医临床病理学 王小龙主编，中国农业出版社出版，国内唯一的教材； 兽医临床检验技术 郭定宗主编，中国农业大学出版社； 兽医临床病理学，湖南农业大学自编教材。二、临床医学检验的发展趋势1检验医学的现状 检验人员结构和素质逐步提高 全国现有27所院校设有医学检验专业，有 3 个博士点和17 个硕士点，每年毕 业的学生上千人。在岗的检验人员素质得到了普遍提高。 质量控制管理体系逐步趋于完善 保证了结果的准确性和可比性。 设备和技术得到发展 检验仪器的大量引进和运用，使医学检验实 现了自动化、微量化、标准化，原来无法测定的 项目现在能得到了准确测定， 而且检验结果更 加快速、客观、准确。2. 医学检验存在的问题 检验医学体系不完整 对检验医学的理论研究重视不够，医学检验目前在一定程度上还只能称之为“实 验医学检验学”，尚未形成具有自己特色的新的理论体系，与其他学科的交流融合也不够， 阻碍了检验医学获得更大的发展。 资源没有合理利用 机构设置重复，人员臃肿，力量分散，资源浪费。 质量控制不到位 质控的意识逐步淡化，认为有了自动化仪器和进口试剂盒，仪器做出的结果是“准 确”的，无需质量控制。 人员素质存在问题 由于医学检验高等教育起步晚，现在我国从事医学检验工作的主体相当一部分人甚至 未受过任何专门教育，整体素质差；高级医学检验人才严重缺乏，制约着医学检验技术的发展和应用，影响临床医疗工 作的质量。3. 医学检验的发展趋势 向信息化发展 在临床检验领域，建立以收集加工信息，实现信息共享为目的的信息系统已是必然 趋势。建立检验信息系统，将对推动我国检验医学的发展有着重大的意义。 向自动化发展目前一般都是单机的自动化f联机自动化f构成流水作业形成大规模的全实 验室自动化f进入电脑网络f提供给临床科室。三、兽医临床病理学的现状及发展趋势1. 临床检验的现状 新方法和自动化仪器得到广泛应用如：WBC自动分类仪：计数1000个WBC，且得出百分比； 如：纸片法检测尿液、粪便,检查项目多、很方便； 如：离子的测定最初用滴定法f火焰光度计法f离子选择电极法f原 子吸收分光光度法 检验质量逐步提高自动化检验，减轻了劳动强度，减少了检验误差，从而保证了检验质量。 生化检验趋向用酶做为检验试剂如:酶法测定Glu,已在全国范围内广泛采用；。 酶法测定已延伸到了免疫学领域如： ELLSA 检测多种病毒性疾病；放射免疫法测定激素等。 免疫学检测发展迅速如：检测体液和血液中的IgG,已成为检验的常 规项目； 如：用血凝、对流电泳、免疫电泳等检测抗原 抗体，特异性高、灵敏度好。 酶学检验测定项目不断增加； 检测的样本由体液向细胞方面扩展。2. 兽医临床检验的发展趋势 项目多 检验的项目将会越来越多； 要求高 对检验工作的要求将会越来越高； 如：心血管疾病、骨科疾病、胚胎移植、癌症等的诊 断与治疗，都有求于实验室的检验；如:药物的监测、监控；B-兴奋剂的检测等。 结论快 报告检验结果要快。也就是说检验方法不但要求操 作简单、结果准确，而且报告检验结果要快。3. 兽医临床检验的研究方向 改进检验方法，提高检验的准确性； 建立新的检验项目； 协助临床对疾病作深层次的研究； 对治疗进行监测、监控； 对预后进行监测等。第二节血液学检验一、造血器官与造血1. 造血器官及功能1.1 骨髓 幼畜骨髓均呈红色，说明造血功能旺盛， 胞生成多； 高龄畜只有肋骨、颅骨、盆骨才有红骨髓 其他部位则为黄骨髓，表明造血功能已下降。功能：骨髓制造 RBC 、WBC、 M 、 Pt。1.2 淋巴结功能：制造L&组织细胞；吞噬细胞和异物； 破坏衰老的 RBC； 产生抗体等。1.3 脾脏功能： 制造 L&M；粒巨噬祖细胞淋巴系祖细胞多能造血干细胞贮藏血液：收缩f使血中RBC增多； 处理衰老的RBC和异物； 由Hbf胆红素； 贮存Fe,并参与Fe的代谢； 产生抗体等。不经过胸腺经过胸腺在胸腺素的刺激下胸腺依赖l (T细胞)细胞免疫 骨髓来原性L (B细胞)体液免疫(Lymphocyte) f原粒f单幼f中幼粒f晚幼f粒细胞(granuloyte) f原单核f 幼单核f 单核C (Monooyte)巨核系祖Cf原巨核f幼巨核f颗粒型f产板型f血小板(Platelets)红系祖Cf原红f原幼f中幼f晚幼f网质红f红细胞(Erythrocyte)、血细胞发育演变规律1细胞体由大变小；2细胞浆数量 由少变多；颜色 由深变浅：RBC 深兰f兰红f桔红; L深兰f天兰；M深兰f烟灰色。胞浆颗粒 从无到有3细胞核大小：由大到小, RBC 核最终消失形状：圆形椭圆f凹陷、分叶(粒细胞)f折叠(M)f破裂消失(RBC)核仁：从有到无原始细胞均有核仁，随着细胞的成 熟，核仁逐渐模糊，最终消失。三、血细胞的代谢与破坏1. RBC1.1 成熟红细胞代谢的特点1.1.1 糖原无氧酵解经路成熟 RBC 的主要能量来源是血浆葡萄糖。由于 RBC 内没有线粒体有氧氧化径路， 酵解是RBC获得能量的基本过程lmol的Glu通过酵解产生乳酸的过程可获得2mol的ATP。 酵解过程中某些酶的缺乏，可引起贫血。1.1.2 磷酸己糖通路通过这条代谢路径，RBC中的谷胱甘肽维持在还原状态，能防止氧化剂对巯基的破 坏作用，从而保护细胞膜中含巯基蛋白和含巯基的酶不被氧化。磷酸己糖通路产物还原型辅II（NADPH）能使红细胞中氧化型谷胱甘肽（GSSG） 还原成还原型谷胱甘肽（GSH）。这条路径功能低下，可因RBC还原型辅II （NADPH）含量减少而产生溶血而导致 贫血， RBC 中便出现海恩茨小体。1.1.3高铁血红蛋白（MHb）还原径路：通过这条径路使血红蛋白变成还原状态，而还原型Hb对于氧的运输则是不可缺少的。 由于某种酶的缺乏，形成高铁Hb,使RBC失去携带氧的能力，引起动物呼吸困难（发绀）1.1.4 2， 3二磷酸甘油酸支路（2， 3DPG）RBC糖酵解与其他细胞不同，RBC糖酵解能生成2, 3二磷酸甘油酸。2, 3DPG 具有调节RBC运输氧的功能。当2, 3DPG升高时，Hb对氧的亲和力降低，促进氧由RBC向组织细胞释放。此 乃是一种代偿机制，有利于业已降低了的Hb运送更多的氧给组织器官。1.1.5 维生素对 RBC 成熟的影响RBC是体内更新较快的细胞，各种动物RBC的寿命从45160天不等。RBC分 裂增殖的基本条件是DNA的合成，而叶酸、VB 12对其合成均具有重要的影响。当叶酸缺乏时，核苷酸特别是胸腺嘧啶脱氧核糖核苷酸减少，致使RBC中DNA 合成受阻，细胞分裂增殖速度下降，细胞体积增大，核内染色质疏松，引起巨红细胞性贫血。 当 VB 12缺乏时，转甲基反应受阻，从而影响胸腺嘧啶脱氧核糖核酸的合成， 同样可引起巨红细胞性贫血。其他某些营养物质，如铜、VB6、VE等缺乏，均会对RBC的正常代谢产生影 响。1.2 RBC的破坏RBC在动物体内是担负着一定生理功能的生命体，它不停地进行新陈代谢，因 此不断地产生、衰老乃至破坏。随着RBC日龄的增加，其酶的含量与膜的结构相应地发生 着变化，使其变形能力降低，脆性增加，易于在脾肝中被破坏和清除。清除途径主要是通过巨噬细胞吞噬径路被清除；其次是通过血管内溶血而清除：RBC - Hb （游离胆红素、球蛋白、Fe）； 溶血性贫血的患病动物主要是取第二条路径。1.3 RBC 的平均寿命：畜种红细胞平均寿命（d）牛160绵羊（成年）70153绵羊（3 月）45山羊125马140150猪62狗107猫68人类120兔5759大鼠55小鼠20302. 白细胞2.1 白细胞分类BBasophilLeukocyteEEsinophilLeukocyteLeukocyteNNeutrophilLeukocyteMMonocyteL Lymphocyte2.2 各类白细胞的功能及动力学2.2.1 BBasophilLeukocyte功能：目前尚不十分清楚。一般认为嗜碱粒细胞和肥大细胞是诱生炎症介导物的源泉，是产生肝素和血浆脂蛋白 激活剂的唯一场所。动力学：B 在大多数动物体内是稀少的,而某些几乎没有组织肥大细胞的动物则具有较多的 B。肥大细胞并非从B衍生而来，而是来源于骨髓中的所谓“持续细胞”B 在骨髓中总是和 N 同时相伴产生，然而 B 在骨髓中的贮存却是很少见的。2.2.2 EEsinophil Leukocyte功能： 解毒E 它能抑制一些诸如组织胺之类的化学介导物.这些化学介导物通常是由速发型过敏 反应或迟发型过敏性疾病中的肥大细胞所释放，因此E常常会出现在抗原一抗体反应的部 位而起解毒作用。 具有杀死某些寄生虫的特性E含有血纤维蛋白溶酶原激活物，它的吞噬和杀菌特性与N相似，但对细菌则不具有 保护性抗感染的能力。动力学：在骨髓中E的产生过程和N相类似，酸性定向细胞能促进E生成素的产生；此 外， 敏感化了的淋巴细胞对此也有作用。在骨髓中贮存的E是很少的，E随干细胞数量的增加而增加，在骨髓中存在的时间比N 短，在血液中保留的时间也很短，一般为数分钟至数小时。E 主要存在于边缘池中，只有极少的再循环现象。2.2.3 NNeutrophil Leukocyte功能： 具有吞噬和杀灭微生物的作用对二个过程起作用：一是对纤维蛋白原和补体、复合物的细胞外消化过程； 二是刺激产生炎症介质过程。 在某些病理发生过程中起作用 如风湿性关节炎，肾小球性肾炎等。动力学：在毛细血管后小静脉里，N的移动速度比RBC和血浆要慢，因此N在血管内分 布是极不均匀，毛细血管后小静脉内N的数量较血管内N多。N粘附在血管内皮细胞并构 成边缘N池；通常白细胞总数计数不包括边缘N池中的白细胞。在动脉和静脉管内，N的移动速度与血浆和RBC的移动速度相同，这部分N构成了 循环N池，因此，常规的白细胞计数与分类计数之结果大致代表了循环N库的状态。在健康动物，衰老的N被肝、脾、骨髓和巨噬细胞所破坏，其中有些通过粘膜的分 泌和排泄而被排出体外。2.2.4 MMonocyte功能：M由骨髓而来，它们在循环血中逗留，运抵组织时能变成巨噬细胞。 吞噬和消化外源性的颗粒物质和衰老、死亡的细胞； 合成某些补体、转铁蛋白、白细胞介素、溶酶等所以人们认为M是干扰素的主要来源，在免疫反应的许多环节中起作用.如诱导免疫反应、刺激B淋细胞等。 单核巨噬细胞还具有抗肿瘤的作用。动力学：M在血液中的分布和N 样，是不均匀的，亦有循环M池和边缘M池之分。 人的比率为1 ： 3.5；M在血液中的平均停留时间：人约为12h，牛可能会稍长些。多数动物尚无上述数据，尚待测定。2.2.5 LLymphocyte分布：L 通常分布在淋巴结、脾脏、胸腺、扁桃体、胃肠道的淋巴组织，支气管的淋巴 组织、骨髓和血液中。循环：在各类白细胞中，L是唯一能反复循环的一种白细胞。绝大多数T淋细胞是反复 循环的，反复循环的基本路径是：淋巴结的传出管一胸导管一右侧淋巴管一血液一经淋巴皮 质的小静脉移行一再回到传出管。而血液中大部B淋巴细胞只是循环淋巴细胞群体中的暂时组成成员，因为主要部分 的 B 淋巴细胞存在于淋巴组织中。功能：T淋巴细胞一细胞介导免疫B淋巴细胞一体液免疫四、血液学检验1.血常规ESR Erythrocyte Sedimetation RateHb HemoglobinRBC Red Blood CellsWBC White Blood Cells DC Differential Counte1.1 RBC + Hb：了解机体贫血的严重程度； 判断贫血的性质。1.1.1 RBC.Hbf临床少见（属于相对性） 见于各种原因引起的脱水；1.1.2 RBC.Hb ；见于各种贫血。 下降的程度与贫血成正比。RBC计数结合Hb含量的测定求出其血色指数，诊断意义更大。被检动物Hb克数/健康动物Hb数血色指数 = 被检动物RBC数/健康动物RBC数正常值为 1.0（0.81.2）若1.2，即为高色素性贫性，说明每个RBC携带Hb多； 3.9-6.7mmol/L有氧氧化无氧酵解合成糖原转化为甘油氨基酸和其,图9-1血糖的来源与去路III3糖的生理功能（能量资源和结构材料） 氧化供能：分解代谢提供机体75%能量; 机体组成成分之一糖占机体干重的2%;形成糖原储存在肝脏与肌肉中； 形成糖蛋白和蛋白多糖（激素、酶、受体等）、糖脂（神经组织和细胞膜重要组分）； 转变作用 其它糖及糖衍生物（核糖、脱氧核糖、氨基多糖） 等；非糖物质（脂肪、氨基酸核酸）。 糖代谢紊乱-供能障碍-一系列代谢变化。4. 血糖水平恒定的生理意义保证重要组织器官的能量供应，特别是某些依赖葡萄糖供能的组织器官 脑组织不能利用脂酸，正常情况下主要依赖葡萄糖供能； 红细胞没有线粒体，完全通过糖酵解获能； 骨髓和神经组织代谢活跃，经常利用葡萄糖供能。5. 血糖浓度的调节 肝脏调节 转运调控：肝细胞膜 G 载体可允许 G 快速转运，达到平衡 时，肝内外 G 浓度几乎相等。酶的双向调控：通过神经-激素的作用，使肝细胞内各种糖 代谢的酶活性改变。葡萄糖-6-磷酸酶，可促进肝糖原水解， 补充和升高血糖。促进组织摄取葡萄糖，促进肝糖原合成、抑制肝糖原分解、 抑制糖异生而降糖。 神经调节 主要通过下丘脑和自主神经（交感和副交感）直接作用 于肝脏获调节激素的分泌而影响血糖。 激素调节降糖激素：胰岛素胰岛素样生长因子升糖激素：胰高血糖素肾上腺素生长激素皮质醇 甲状腺激素二. 糖代谢紊乱1. 高血糖症与糖尿病高血糖症:空腹血浆血糖（FPG）7.3mmol/L （130mg/dl）高糖饮食；见于糖尿病内分泌腺生理性：情绪紧张；病理性： 功能亢进；颅内压升高肾上腺分泌f刺激血糖中枢脱水。尿糖：若血糖浓度高于肾糖阈值9.0mmol/L，即超过了肾 小球滤过率，出现尿糖。糖尿病（ diabetes mellitus,DM）定 义： 是一种慢性、复杂的代谢紊乱性疾病，系胰岛素 相对或绝对不足，或利用缺陷引起。临床特征：血糖持续升高，甚至出现糖尿。“三多一少”：多尿、多饮、多食、体重减轻。发病机制 胰腺B细胞的自身免疫性损伤 机体对胰岛素的作用产生抵抗2. 低血糖症低血糖症 是指血糖浓度低于 2.2mmol/L 时临床出现一系列 因血糖浓度过低引起的症候群。发病原因来源V去路 激素效应：升血糖激素缺乏，降血糖激素过剩。 肝脏疾病：肝功严重损伤致肝糖原减少和糖异生严重障碍 长期饥饿或剧烈运动时代谢率增加，血糖消耗过多。3. 酮血症：酮体形成过多引起血中含量增高，称为酮血症。酮体：乙酰乙酸（20%）、B-羟丁酸（78%）、丙酮（2%）三者统称为酮体原因： 糖尿病 糖摄入不足：脂肪动员 糖原储存过多：脂肪动员 碱中毒：代偿酮体的生成糖代谢障碍脂肪酸分解00 NADH+H+ NAD+ OH0CH3（!CH丙胡CH35CH2（!OH 亠厶 CH36HCH2COOH乙酰乙酸D卜）书氓丁酸I脫氢酶丿_ 辺叵回临床意乂：如有酮体存在，需确定酮酸中毒状态； 酮血症的诊断对指导胰岛素治疗最有价值。三. 体液葡萄糖的测定方法1. 无机化学法Folin-Wu法，基于葡萄糖醛基的还原性Cu2+ - Cu+； 特异性差。2有机化学法：邻甲苯胺法、联苯胺法、氨基联苯法等邻甲苯胺+ Glu 葡萄糖基胺希夫氏碱（蓝绿色） 影响因素多。3. 酶法测定 己糖激酶法（HK法）葡萄糖+ATP HK 葡萄糖-6 -磷酸+ADP葡萄糖-6-磷酸+NADP+ G-6-PD 6-磷酸葡萄糖内酯+NADPHNADPH在340nm有吸收峰，其吸光度增加与标本中的葡萄糖 浓度成正比。本法特异性高，灵敏度高，干扰因素少，适用于自动化分析，为葡萄糖测定的参考方法，但是试剂较贵。 葡萄糖氧化酶法(GOD)葡萄糖+ O2 + H2O GOD 葡萄糖酸内酯+ H2O2 2H2O2 + 4-氨基安替比林+酚一红色醌类化合物+H2O +O2操作简单，特异性较高，是血糖测定的首选方法.但溶血、GSH、Vc、胆红素等可引 起测定结果负偏差。4. 自动生化分析仪测定四. 血糖测定的临床应用反应机体对Glu的利用情况：了解机体胰岛的功能，了解肝脏糖原分解和糖元异生情 况。BS f：糖尿病；肾上腺皮质机能亢进; 垂体机能亢进； 反刍兽氨中毒； 牛生产瘫痪； 用胰岛素过量； 绵羊肠毒血症等BS ；：肾皮质功能不全；胰岛素分泌过多 肝功能不全； 牛的酮病； 新生幼畜低血糖等。【血浆脂类】血脂：胆固醇、胆固醇脂、甘油三脂、磷脂等。1. 测定方法：移量法： 老方法，现已不用； 化学方法： 硫磷铁反应法强酸试剂显色法 薄层析法： 酶法测定： 70 年开始，需紫外分光光度计、氧电极 等，昂贵，少用。自动生化分析仪： 多采用酶法测定，试剂盒较贵。2. 临床应用：动物原发性血脂症较少 主要是了解继发性疾病如： 内分泌障碍；肝脏疾病；胰腺疾病；肾脏病等血中有机物】包括尿素痰(BUN)、尿酸、肌酸、肌肝等1.测定方法：半定量试纸法；色谱试纸法； 定量比色法； 自动生化分析仪测定。2. 临床应用： 诊断泌尿系统疾病：氮血症时BUN f,肾功能障碍时肌肝f； 肾炎时尿酸f。 鉴别肝脏疾病：肝病、肝硬化等，BUN； 判断疾病的预后：肌肝50mg/L，提示严重肾损伤，预后不良； 肌肝100mg/L，动物即可死亡。【血清无机离子测定】 包括 K、 Na、 Ca、 Pi、 Cl、 Mg 等1. 测定方法：火焰光度法： 离子选择电极法； 化学法：仍常用 原子吸收分光光度法：较理想，仪器较贵；2. 临床应用 了解机体离子的代谢状况。【微量元素测定】 包括 Cu、 Fe、 Mn、 Zn、 Se、 Co、 Mo 等1. 测定方法： 原子吸收分光光度法； 极谱仪法。2. 临床应用 微量元素与生长发育的关系 Cu、 Fe、 Mn、 Zn、 Co、 I 等促生长； 缺乏其中一种，可引起发育停滞。给发育不良的动物补Mn、Co,可加速生长，增加体 重。 微量元素能影响内分泌： 铅、镉、汞过多会干扰内分泌的功能。缺Fe：出现糖尿病；生殖器官发育不全； 性功能紊化。缺Mn：胰岛数目少； Glu利用（； 精子数目（；缺Zn：性功能（；睾丸缩小； 精子生成停顿。c.微量元素与疾病： 缺 Se ： 人的克山病； 动物白肌病； 幼畜腹泻等。缺 Zn： 影响组织的愈合过程； Cu、Fe、Zn 缺乏：可降低机体的免疫力。 多数有致畸作用：如: Cu、Fe、Mn、Zn、Se、I、镉 镍、砷、铟、汞、碲等。镍、Fe、能致癌；镉与前列腺癌有关；长期接触砷：能引起急性粒性白血病、皮肤癌、肺癌、胰腺癌等8.血气分析与酸碱平衡：（1）检测项目： 血液 pH血氧分压（Po2）二氧化碳分压（Pco2） 血氧饱和度血浆 CO2CP （ 2） CO2CP 测定：范氏量积法：求体积，现已少用； 微量滴定法：自动生化分析仪测定（ 3） CO2CP 测定的意义： 了解机体酸碱平衡情况。CO2CP ；：代谢性酸中毒： NaHCO3 缺乏所致； 呼吸性碱中毒： CO2 缺乏所致（换气过度）CO2CP f：代谢性碱中毒： NaHCO3 过度所致；呼吸性酸中毒：CO2 f, H2CO3 f所致