果德安植物油脂和提取物标准增修订内容介绍.ppt

中华人民共和国药典2010年版 一部 植物油脂和提取物 标准增修订内容介绍 果德安 中药标准化技术国家工程实验室 中国科学院上海药物研究所,中药提取物的概念,中药提取物的概念,中药提取物的概念,中药提取物的分类,中药提取物的分类,中药提取物的特点,1.优质、可控的原料 原药材可在符合GAP的条件下进行生产，对于中药材生产的基地选定、品种、栽培技术、采收与加工、质量控制等都可制定相应的严格规定。,中药提取物的特点,中药提取物的特点,中药提取物的特点,中药提取物的特点,中药提取物的应用,中药提取物的应用,中药提取物的应用,2010版药典中药提取物,2010版药典中药提取物,2010版药典中药提取物,2010版药典中药提取物,主要特点,质量标准普遍提高 完善或建立了鉴别、检查、特征图谱或指纹图谱，含量测定等项目，根据提取物的特点，更全面地控制了其质量。增加指纹图谱或特征图谱项的品种大大增加，尤其在新增品种中所占比例更高。且分析方法趋于专属、准确，更具可操作性。参照国际标准修订了相关品种的质量标准，如银杏叶提取物，参照欧美等标准，修改了产品的检查项目，可有效防止掺伪情况发生，使产品更安全可靠。,2010版药典中药提取物,主要特点,2010版药典中药提取物,主要特点,质量标准普遍提高 含量测定除个别品种外，绝大多数均有含量测定项。指标性成分也出现了从单指标向多指标测定发展的趋势，如三七总皂苷，测定的指标成分包括：人参皂苷Rg1、Re、Rb1、Rd、 三七皂苷R1，共五种。另外，较多出现2种或3种成分之和不少于某量的含量要求方法。 对代表性成分或有效成分进行了质量控制，并尽可能地控制了上下限。,2010版药典中药提取物,主要特点,2010版药典中药提取物,重金属、有害元素及农药残毒,1)重金属：附录 E，指在规定实验条件下能与硫代乙酰胺或硫化钠作用显色的金属杂质。方法：为纳氏比色管法，与标准铅溶液对比。 三七三醇皂苷、丹参总酚酸提取物、丹参酮提取物、丁香罗勒油、八角茴香油、连翘提取物、银杏叶提取物、牡荆油、莪术油、桉油、黄芩提取物用此法。（肉桂油的重金属用独自方法）,2)铅镉砷汞铜采用附录 B，采用仪器法，A、原子吸收分光光度法；B、电感耦合等离子体质谱法。薄荷脑、人参茎叶总皂苷、人参总皂苷、灯盏花素（注射）、茵陈提取物、积雪草总苷、三七总皂苷用此法,3）农残：附录 Q，三大类有机氯（六六六的型，4种；滴滴涕，4种；五氯硝基苯）、有机磷（12种）、拟除虫菊酯（3种） ，共24种。有机氯-人参茎叶总皂苷、人参总皂苷用此法,2010版药典中药提取物,主要特点,2010版药典中药提取物,主要特点,2010版药典中药提取物,正文 1)正文项下的各项内容，由17项增加到19项，即增加了特征图谱或指纹图谱以及附注项。 名称与编排 1)油脂、提取物，成方制剂、单味制剂不设拉丁名。（加入了英文名） 2005版： 中文名、汉语拼音、拉丁名 2010版： 中文名、汉语拼音、英文名 项目与要求 1)制法项不等于生产工艺，只要求规定工艺中的主要步骤和必要的技术参数，一般只明确提取溶剂的名称和提取、分离、浓缩、干燥等步骤及必要的条件。 需注意，不同的生产企业，具体工艺可能不同，有可能影响提取物的质量。,凡例,2010版药典中药提取物,新增品种,2010版药典中药提取物,基源品种,原品种中，共13种的鉴别项进行了修订。 广藿香油 TLC法： 修订百秋李醇；增广藿香酮 当归流浸膏 增TLC法： 阿魏酸、藁本内酯 肉桂油 增TLC法： 桂皮醛 牡荆油 增TLC法： 油对照提取物 松节油 增TLC法： 油对照提取物、a-蒎烯； 增GC法： -蒎烯、莰烯 刺五加浸膏 增TLC法： 紫丁香苷 姜流浸膏 增TLC法： 6-姜辣素 莪术油 TLC法： 修订莪术醇、牻牛儿酮； 增莪术二酮；减莪术油对照提取物 黄芩提取物 TLC法: 删黄芩对照药材 蓖麻油 增TLC法： 蓖麻油酸甲酯 薄荷素油 修订TLC法：正己烷为无水乙醇 颠茄流浸膏 删显色反应：增HPLC法：氢溴酸东莨宕碱、 左旋山莨宕碱、硫酸阿托品 颠茄浸膏 删显色反应；增HPLC法：氢溴酸东莨宕碱、 左旋山莨宕碱、硫酸阿托品,2010版药典中药提取物,鉴 别,原品种,原品种中，共7种的检查项进行了修订。 水牛角浓缩粉 增总灰分、酸不溶性灰分 肉桂油 增醇不溶物 松节油 增酸值；删重金属 银杏叶提取物 修槲皮素与山萘素的峰面积比值 0.8-1.5为0.8-1.2；增异鼠李素与 槲皮素的峰面积比值大于0.15 薄荷脑 增GC法检查有关物质； 增重金属及有害元素检查： 铅、镉、砷、汞、铜 颠茄流浸膏 增总固体 颠茄浸膏 增干燥失重,2010版药典中药提取物,检查,原品种,2010版药典中药提取物,新增品种制法、性状、鉴别项情况,新增品种制法、性状、鉴别项情况,2010版药典中药提取物,原品种中，共2种的浸出物项进行了修订。 水牛角浓缩粉 增浸出物项（水） 刺五加浸膏 修订方法（水、醇）,2010版药典中药提取物,浸出物,原品种,原品种中，共4种增加了特征图谱或指纹图谱。 连翘提取物 特征图谱 莪术油 指纹图谱 满山红油 特征图谱 薄荷素油 指纹图谱,2010版药典中药提取物,特征图谱或指纹图谱,原品种,原31个品种中，共16种的含量测定项进行了修订。其中： 新增含量测定项6品种 八角茴香油 新增含量测定，GC法： 反式茴香脑（80.0%） 当归流浸膏 新增含量测定，HPLC法: 阿魏酸(0.016%) 牡荆油 新增含量测定，GC法： -丁香烯（20.0%） 蓖麻油 新增含量测定，GC法： 蓖麻油酸甲酯（50.0%） 满山红油 新增含量测定，GC法： 牻牛儿酮（20.0%） 薄荷脑 新增含量测定，GC法： 薄荷脑（95.0%-105.0%）,2010版药典中药提取物,含量测定,原品种,新增含量测定指标性成分4个品种 甘草浸膏 HPLC法：修甘草酸铵含量(8.0%7.0%); 增甘草苷（0.5%）； 连翘提取物 HPLC法：连翘苷(0.5%)； 增连翘酯苷A（6.0%）; 刺五加浸膏 HPLC法：紫丁香苷(原0.50%水膏0.60%,醇膏0.50%)； 增刺五加苷E（水膏、醇膏均0.30%）、异嗪皮啶 （水膏0.10%,醇膏0.12%）; 莪术油 HPLC法：修牻牛儿酮含量(10.0%7.5%); 增呋喃二烯 （10.0%）；,2010版药典中药提取物,含量测定,原品种,修改含量测定方法、测定条件或调整指标性成分及其含量6个品种 广藿香油 修订含测GC法的测定条件参数 肉桂油 修订含测GC法的测定条件(固定相等) 松节油 修订含测GC法: 修测定条件(固定相等), -蒎烯含量(70.0%80.0%) 薄荷素油 修订含量测定GC法：修测定条件(固定相等)； 删去（-）-薄荷酮，保留薄荷脑（28.0%-40.0%） 颠茄流浸膏 修滴定法为HPLC法，改对照品莨菪碱为硫酸阿托品 （6.6mg/ml） 颠茄浸膏 修滴定法为HPLC法，改对照品莨菪碱为硫酸阿托品 （9.7mg/ml）,2010版药典中药提取物,含量测定,原品种,2010版药典中药提取物,新增品种浸出物、含量测定、其它项情况,新增品种浸出物、含量测定、其它项情况,2010版药典中药提取物,2010版药典中药提取物,特征图谱或指纹图谱,原品种,2010版药典中药提取物,2010版药典中药提取物,1.中药品种基源与药材规格 不同基源的中药、同一基源而不同生长条件、产地、采集季节、加工、贮藏条件等，其提取物的质量可能会有一定、甚至较大的差别，但也有的能够达到质量控制范围之内（如茵陈提取物的两种基源植物滨蒿与茵陈蒿）。,2010版药典中药提取物,影响提取物质量及质量检验检测的相关问题,2010版药典中药提取物,连翘老翘与青翘,连翘中连翘酯苷A是连翘提取物当中最具代表性的成分，具有明显的生物活性。2005版药典中仅以连翘苷A作为含量测定的指标性化学成分是不甚合理的，故增加连翘提取物中连翘酯苷A的含量测定。研究发现，青翘中连翘酯苷A和连翘苷的含量明显高于老翘，不同产地青翘与青翘之间，老翘与老翘药材之间连翘酯苷A和连翘苷的含量也有一定差距，通常情况下受药材产地、采收季节、贮藏条件等因素的影响造成的。而连翘提取物，影响其内在质量的因素还受到生产厂家工艺条件的制约。,2.制备工艺 从观念层面，要正确认识提取物质量标准与生产工艺、生产技术之 间的关系：提取物的生产工艺、生产技术决定提取物的质量，提取 物的质量标准能够监督提取物的生产工艺、生产技术能否得到严格 执行和充分发挥作用。,2010版药典中药提取物,影响提取物质量及质量检验检测的相关问题,在保证现有药品品种的质量上，从药品监督和检验检测角度，应重 视生产企业的产品是否达到了制定的标准；从生产企业的角度，更 应重视药品的生产过程是否严格执行了生产工艺，以及保证提取分 离技术生产设备、技术，能最大限度地从药材中获取有用成分，工 艺稳定； 收率、效率问题，是否节能、低成本。,但是，如果要真正从本质上提高提取物的质量，则需要药品监督 管理部门的政策引导，也更需要生产企业更从药材源头开始，对提取 物的生产工艺进行有效的改进。,2.制备工艺 从技术层面上，应重视不同中药中的指标性成分，或有效成分，有的比较稳定，有的可能容易受提取、纯化、分离、干燥、光照等条件(如提取溶剂、提取温度、提取时间、干燥温度与时间等具体工艺参数)的影响，其含量或产品质量可能会产生较大的变化。这个问题不仅需要企业在工业化生产中倍加注意，也需要在产品质量检验检测过程中予以高度关注，以免因此出现对合格产品产生的误判。,2010版药典中药提取物,影响提取物质量及质量检验检测的相关问题,2.制备工艺连翘酯苷A 中性条件下连翘酯苷A对热不稳定：在pH值为6.86、温度为80条件下，连翘酯苷A紫外吸收光谱随着时间延长，326nm和262nm处吸收峰强度和位置都有较大的变化，且溶液颜色变深。4小时后产物与标准咖啡酸溶液用同一块聚酰胺薄膜板进行层析，薄层层析鉴别表明有咖啡酸斑点出现，证明在此条件下，连翘酯苷A可发生水解。当环境温度为60时，同样测定4小时，连翘酯苷A的水解趋势很小。在4小时内，紫外吸收光谱变化很小。在中性条件下，温度为80时，连翘酯苷A也不稳定；温度为60时，较稳定。,2010版药典中药提取物,影响提取物质量及质量检验检测的相关问题,2.制备工艺连翘酯苷A 弱酸性条件下连翘酯苷A较稳定：在pH值为4.03、环境温度为80时，连续保温4小时，连翘酯苷A紫外吸收光谱和最大吸收波长的吸收光强度都未发生显著变化。表明：连翘酯苷A在弱酸性条件下对热稳定。,2010版药典中药提取物,影响提取物质量及质量检验检测的相关问题,2.制备工艺连翘酯苷A 碱性条件下极其不稳定： pH值为9.40，无论环境温度是80还是60，连翘酯苷A紫外吸收光谱形状和最大吸收峰位置在很短时间内（15分钟）均发生了很大变化，且连翘酯苷A溶液颜色随时间加长逐渐加深，变为棕黄色。这表明连翘酯苷A在pH值为9.40时，结构发生了变化，连翘酯苷A的酯键可能发生了水解，水解产物为咖啡酸。 也有文献报道：在常温下，氢氧化钠可将连翘酯苷A水解。,2010版药典中药提取物,影响提取物质量及质量检验检测的相关问题,通过上述对连翘酯苷稳定性的分析，可见现行的连翘提取方法（水煎提取法）不合理，水煎温度高，使其中的主要有效成分连翘酯苷A损失大。建议今后应研究新的提取工艺，避免高温，最好将温度控制在60左右，保证有较高的提取效率；在含有连翘的复方中药提取中，要考虑与连翘配伍的其它中药有效成分的性质，若提取液呈弱酸性，提取温度可适当提高，若提取液呈中性或呈弱减性，此时提取温度也最好控制在60左右。同时，提取连翘酯苷A时，要避免使用强碱处理；在含有连翘的复方中药提取制备时，尽量不要使用强碱除杂或精制，若一定要使用碱性溶剂处理其它中草药，最好将连翘与其它药材分开，单独提取。,2010版药典中药提取物,影响提取物质量及质量检验检测的相关问题,2.制备工艺 刺五加浸膏 水浸膏：紫丁香苷 0.60%； 刺五加苷E 0.30%； 异嗪皮啶 0.10% 醇浸膏：紫丁香苷 0.50%； 刺五加苷E 0.30%； 异嗪皮啶 0.12%,2010版药典中药提取物,影响提取物质量及质量检验检测的相关问题,2.制备工艺 丹参酮提取物 醇浸膏（醇提水沉法） ：醇提水洗（沉）法是丹参酮提取物的传统制备方法，由于各个厂家的生产工艺均属于保密范围，因此，2010版药典并未对生产工艺强行统一 。 目前市售丹参酮提取物仅以丹参酮IIA含量为质量评价标准，而另一重要活性成分隐丹参酮含量在提取物制备过程中往往急剧减少，对该成分的监测显得极为重要。 因此，要求丹参酮提取物产品中，隐丹参酮所占比例力求与原药材保持一致，根据与对照药材及对照图谱的比较，故2010版药典规定隐丹参酮在指纹图谱中的峰高至少不得低于丹参酮的峰高，并在含量测定项增加了隐丹参酮的含量标准。,2010版药典中药提取物,影响提取物质量及质量检验检测的相关问题,丹参酚酸提取物HPLC指纹图谱,丹参总酚酸提取物HPLC色谱图（2：原儿茶醛；5：迷迭香酸；6：紫草酸；7：丹酚酸B）。,混标,提取物,HPLC色谱条件的建立,不同批丹参总酚酸HPLC图谱，经中药指纹图谱相似度评价软件生成对照图谱。,对照图谱,对照图谱的生成,与对照药材比较，其成分组成应当一致,对照药材S2,提取物对照图谱S1,丹参酮提取物HPLC指纹图谱,HPLC色谱条件的建立,丹参酮提取物HPLC指纹图谱（8：15,16-二氢丹参酮I；10：隐丹参酮；11：丹参酮I；13：丹参酮IIA）,对照图谱的生成,选择十批丹参酮提取物HPLC色图谱，经中药指纹图谱相似度评价软件生成对照图谱。,与对照药材比较，其成分组成应当一致,对照药材S2,提取物对照图谱S1,丹参总酚酸和丹酚酸B的稳定性研究,探讨丹酚酸B水溶液在不同条件下的稳定性; 对比丹参总酚酸中丹酚酸B的稳定性; 推断酚酸类成分的体外降解过程; 以期指导丹参相关制剂的工艺过程; 辅助酚酸类成分体内代谢产物的推测;,不同温度的影响,丹酚酸B水溶液,丹参总酚酸水溶液,丹酚酸B纯品水溶液对温度的影响更为敏感,不同pH值的影响,丹参总酚酸水溶液,丹酚酸B水溶液,丹酚酸B纯品水溶液和其在丹参总酚酸水溶液中的差异不显著,人工胃液及人工肠液中的稳定性,丹参总酚酸水溶液,丹酚酸B水溶液,人工胃液丹酚酸B稳定性良好,人工肠液丹酚酸B稳定性有所下降,胃蛋白酶/胰蛋白酶抑制或减缓丹酚酸B的降解过程,UV,UV,UV,UV,TIC,TIC,TIC,TIC,丹酚酸B,Sal B stock solution,100-8h,pH7.0-18h,SIF-30h,HPLC-MSn鉴定12个成分,UV,TIC,UV,TIC,UV,TIC,UV,TIC,TPA stock solution,100-18h,pH7.0-10h,SIF-30h,HPLC-MSn鉴定15个成分,Sal B,酯键/呋喃环断裂,样品的收集:共收集了105个样品（包括丹参药材和四种制剂）,Liaoning (辽宁),Shanxi (山西),Henan (河南),部分不同产地丹参药材色谱图,Salvianolic acids,Tanshinones,Shanxi (陕西),部分不同厂家复方丹参片色谱图,Salvianolic acids,Tanshinones,同一厂家不同批号的复方丹参片样品的色谱图,Salvianolic acids,Tanshinones,软件分析法,monomers,polymers,tanshinones,A：23个标准品色谱图， B：丹参药材的色谱图， C：复方丹参片的色谱图,丹参指纹图谱中主要峰的指认,丹参丹酚酸类成分HPLC/ESI-MSn分析,42个丹酚酸类成分得到指认，其中有16个是新检测到的化合物.,AH Liu, M Xu, M Yany, D Guo. J Chromatogr. A, 2007, 1161(1-2):170-182,M Yang, AH Liu, SH Guan, JH Sun, M Xu, D Guo. Rapid Commun Mass Sp, 2006, 20:1266-80,HPLC-UV,ESI-MS,丹参丹参酮类成分HPLC/ESI-MSn分析,27个丹酚酸类成分得到指认，其中有5个是新检测到的化合物.,3.检验检测条件 药品标准的提高，一方面体现在高标准的测定指标上，同时，也体现在一个重要检验检测方法与手段的先进与严格。这也对实际检验检测工作提出了更高的要求。特别是如特征图谱和指纹图谱等检测指标，不仅需要检测仪器先进，更需要药检工作者具有良好的专业素养和严格遵守检验检测的SOP。,2010版药典中药提取物,影响提取物质量及质量检验检测的相关问题,2010版药典中药提取物,影响提取物质量及质量检验检测的相关问题 4.重金属、有害元素及农药残毒问题,问题之一：重金属限量标准不统一，如：丹参酮、丁香罗勒油不超过百万分之十，八角茴香油不超过百万分之五，连翘提取物、银杏叶提取物不超过百万分之二十。 问题之二：限量标准制定的依据缺乏，基础数据不足，一直是学术界讨论的话题。国际食品法典委员会CAC：农残建立在可接受的日摄入量，综合分析世界各地的消费习惯，以危险性评估为依据。WTO也强调基于危险性评估的科学结果和适当的健康保护水平制定安全水平。,提取物或标准提取物代替中药材直接应用的基础研究问题：缺乏与中医临床疗效相关联的基础研究、质量标准研究，较少体现中药本身的特色和优势。以天然药物和化学药物的研究思路来研究中药，可能会失去中药原有的良好的临床疗效与较高的安全性等诸多优势。,2010版药典中药提取物,影响提取物质量及质量检验检测的相关问题 5. 提取物的基础研究问题,2. 体例上，还需统一，如满山红油，相对密度、折光率列在检查项，而其他品种列在性状项下；新版中大多写明提取物的植物来源，但是，个别品种有未注明；灯盏花素提取原料灯盏细辛与植物来源名称不符；灯盏花素条中“大孔吸附树脂有机残留物”项用名又与直接写明“树脂残留”的写法不一致,3.内容上需进一步规范：如山楂叶条，“收集相应的洗脱液”，未予以指明何种洗脱液；有的在液相测定参数上还需进一步修订；三七总皂苷分离上未署明树脂型号。,2010版药典中药提取物,1.进一步补充标准相关项目内容：如增加水分、灰分、重金属、农药残 毒、溶剂残留等安全项目检查内容，定性方面应增加指纹图谱(特征性图 谱) 内容，保证每个品种都有含量测定项目等等。,影响提取物质量及质量检验检测的相关问题 5. 其它问题,2010版药典中药提取物,提取物质量标准的提高，为中药建立安全稳定，可控的质量标准，提供了示范。 2010版药典中提取物项下质量标准有较大的提高，指标限度科学、合理，既参照了国际标准又符合中国实际情况。,欢迎加入世界中医药联合会中药分析专业委员会 成为会员！,世界中联中药分析专业委员会组织机构： 会长：果德安 副会长：钱忠直，林瑞超，罗国安，王峥涛, Rudolf Bauer (奥地利), Ikhlas Khan (美国), Rohit Khanna(美国)等 秘书长：陈万生 联系人：屈华 ,欢迎参加2010中药分析学术研讨会,6月18-20日在长春召开专业委员会成立大会 和中药分析学术报告会 报告人：杜晓羲, 钱忠直, 林瑞超, 姚新生, 任德权, 屠鹏飞, 罗国安, 王峥涛, 梁鑫淼, 王喜军, 徐宏喜, Rudolf Bauer等 会议不收注册费, 其他费用自理。,The End,谢谢！,