植物叶发育的分子机理

植物叶发育的分子机理严松，严长杰，顾铭洪扬州大学农学院，江苏省作物遗传生理重点实验室，教育部植物功能基因组学重点实验室，扬州225009摘要：叶是植物进行 光合作用和蒸腾作用 的主要场所，对植物的生长发 育具有重要的作用。叶的发育包括 叶原基 的形成和极性的建立，大量研究表明，叶发 育建成受到众多转录因子、小分子RNA以及生长素等 因子的调控。文章综述了近年来 叶发育和形态建成的分子机制 研究进展,以期了解叶发育的调控网络。关键词：叶发育；形态建成；基因调控Molecular mechanismYAN Song, YAN Cha ng-Jie, GU Min g-H ongThe Key Laboratory for Plant Functional Genomics, Ministry of Education; The Jiangsu Province KeyLaboratory of Crop Physiology and Genetics; Agricultural College, Yangzhou University , Yangzhou 225009,Jia ngsuAbstract: Leaf plays important roles during plant development for their function of photosynthesis an d tran spirati on. Leaf developme nt in eludes in itiati on of leaf primordium and establishme nt of leaf polarity. Various studies in dicate that leaf developme nt is con trolled through the in teractio n of tran scripti on factors, small RNAs and aux in. This review focuses on recent adva nces in study ing on leaf development and morphogenesis, and provides information on the regulation network in the process.Keywords: leaf developme nt; morphoge nesis; gene regulati on叶是植物进行光合作用的主要器官 ，对植物的生命活动起着重要的作用。叶的发育是 植物形态建成的一个重要方面，与 植物株型的形成 密切相关。探明叶的发育机 理，不仅能使我们更多地了解植物叶的发育机制，而且能帮助我们通过生物 设计对株型进行改良 。因此，对叶发育机理进行深入的研究具有重要的理论意义和应 用价值。叶的形态构造看起来很简单，但其发育的调控机理却十分复杂。决定叶的发育进程主 要有两个因素： 环境因素和植物体内严格的遗传调控，但这些 因素的作用并不是孤立的，它们之间有着错综复杂的关系，共同影响叶的发育。从发育进程看，叶的发育包括 叶原基在茎顶端分生组织（Shoot apical meristem, SAM）形成和分化，以及之后从叶原基分化出来的 叶片的发育 。叶片的形态包括 叶形、叶尖、叶缘、叶基和 叶脉 等外部特征。典型的成熟单叶（相对于复叶而言）有3个不对称轴： 基-顶轴 （由 叶的基部指向尖部 ）;腹-背轴 （亦称近-远轴，面向茎的为近轴面，背向茎的为远轴面） 和中-边轴（从叶的主脉指向边缘）1。体内的遗传机制和体外的环境因子正是沿着这 3个轴向 来调控 叶的发育和形态建成的生近年来，随着分子生物学手段和突变体研究技术的广泛应用，各国科学家借助于双子叶植物拟南芥、金鱼草和单子叶植物玉米等一些模式植物广泛地进行了叶发育的研究，取得了一系列重要进展。1叶原基的发育SAM是叶和茎组织的发源地3, 4。在SAM的中央,有一团缓慢分裂的细胞,组成SAM 的中心区。这些细胞始终处于 非分化的状态 ,具有持续分裂能力，是植物生长发 育的干细胞。在SAM中心区的外围，细胞分裂的速度明显加快，这些快速分裂的细胞，组 成了 SAM的周边区。在周边区里，有一些成簇的细胞性质开始发生变化，这些细胞称之为起始细胞”(Founder cell)。起始细胞的分裂速度非常快，侧生器官的原基就是通过起始细胞 的分裂形成的5。目前，拟南芥、玉米和金鱼草的分子遗传学研究，已经揭示了叶原基发育的两个机制(图 1)。图1叶原基发育的调控因子示意图28PIN1信号分布在分生组织(m)勺外表皮细胞中，引导生长素向分生组织的顶端运输(虚线箭头所示)。KNOX基因在整个SAM中表达,而且受生长素调节在叶原基形成过程中,生长素和 AS1共同抑制 KNOX基因家族的 BP基因,促进叶的发育。此外AS1负调控KNOX基因家族的 KANT2和KANT6的表达，但这两个 KNOX基因与生长素活性的关系仍不大清楚。KNOX基因家族的STM负调控AS1的表达。T标识表示负调控。Fig. 1 A cartoon depicting the factors controlling leaf initiation 28PIN1 is localized in the epidermal cells of the meristem (m) and involved in the transport of auxin flux to the apical cells of the meristem. KNOX genes are expressed throughout the SAM and down-regulated in resp onse to aux in. BP gene is one of KNOX family and its expressi on is repressed by Auxin and AS1, and leaf development is promoted through this repression. Other two KNOXgenes, KANT2 and KANT6 , are also n egatively regulated by AS1, however, the regulati on of these two genes with aux in is to be clarified. T bars in dicate n egative regulati on.第一个机制是 KNOX(KNOTTED1-like homeobox )家族的基因对 SAM的维持，这个过程 牵涉到 KNOX 与含 MYB 结合域的 ARP 蛋白ASYMMETRIC LEAVES1(AS1), ROUGH SHEATH2 (RS2), PHANTASTICA(PHAN)的相互抑制I611L。在单子叶和双子叶植物中 ， KNOX基因都参与了 SAM的维持。拟南芥中在 SAM中表达的KNOX基因有4个：KNAT1、 KNAT2、KNAT6和 STM12。水稻中已报道的 KNOX 基因有 10个:Oskn2、Oskn3、OSH1(Oryza sativa Homeobox1)、OSH3、OSH6、OSH10、OSH15、OSH16、OSH43和 OSH71113迴。女口 果这些基因 持续表达 ,SAM的特征将会一直保持下去，但是在随后的叶原基发育和 叶片发育过程中， KNOX基因在SAM中一直处于沉默状态, 因为它们受到了 ARP蛋白以及它们的辅助因子蛋白，即LATERAL ORGAN BOUNDARIES(LOB) 一类的AS2蛋白的抑制。另一个机制是，PIN-FORMED1 (PIN1)和 PINOID (PID)控制叶边界的形成，但它们并不是 SAM形成和维持所必需的基因。利用吲哚类生长素处理叶原基局部的顶端分生组织时，生长素的运输受到 PIN1和PID的调节，从而引起叶的分界(Leaf delimitation)胆231。拟南芥 pin1突变体的子叶常融合在一起或表现其它变形、部分叶片宽大、叶序紊乱而且花序呈针 状排列，它的表型是由生长素极性运输过程中的外运载体PIN1失活所造成的 瓯。在pin1花原基的分生组织侧面点施IAA,该处能够长出一个新的花原基；在分生组织中心点施IAA,花原基会以此为中心形成一个环状分界21,22。 PID在子叶原基的边界表达，它的转录受外源生长素诱导影响。pid突变体子叶表型与 pinl相似，但与pinl不同的是,pid子叶融合的情形较少，突变体大多表现子叶数目增加或减少，从而破坏子叶的对称发育。pin 1pid双突变体子叶完全消失，但SAM的功能正常,能够形成叶原基,然而这些叶原基 却表现叶序异常，而且多彼此融合23。这两个基因的功能研究表明，PIN1和PID作用冗余， 它们不仅控制叶的边界形成，而且调控子叶的生长发育。最近的研究发现,生长素和ARP/KNOX蛋白在叶发育中的作用途径是相互联系的。在 器官特化早期,PIN1和KNOX基因在SAM中表达的区域几乎互为补充19。此外,生长素信 号或PIN1活性受 KNOX基因家族的 BP(BREVIPEDICELLUS )基因表达的负调控,说明 KNOX基因的表达调节生长素的极性运输24, 25;亦有研究表明,生长素的积累会抑制KNOX基因，女口 SHOOT MERISTEMLESS(STM)基 因26,因而推测，KNOX蛋白和生长素 通过相互作用建立了一个反馈环，两者之间的平衡关系影响了叶分生组织的分界。近来研 究发现，STM基因的表达直接受到 PcG(Polycomb group)家族蛋白 CURLY LEAF(CLF)和 SWINGER(SWN)的抑制，而这两个蛋白具有组蛋白转甲基酶活性，说明KNOX的表达调控也存在表观遗传因素27L。2 基-顶轴(Proximo-distal axis)发育在双子叶植物烟草和拟南芥中，营养叶包括远端的叶片和靠近基部的叶柄。在单子叶 植物玉米和水稻中，叶包括远端的叶片和靠近基部的叶鞘。玉米、水稻的叶片与叶鞘的分界是叶环，以对应于该位置生长的叶舌及其两边的叶耳为显著标志。玉米中已发现了不少叶舌不发育或发育不正常的突变体，liguleless1 (lg1)突变体在苗期叶舌发育与野生型没有显著差异，成熟叶片的叶舌显著变短甚至完全消失29,它的表型是细胞自发的30L。 LG1 编码一个 SPL(SQUAMOSA promoter-binding protein-like)蛋白， 主要在刚发育叶的叶舌区表达31。水稻中的同源基因 OsLG1与LG1具有相似的功能32。玉米liguleless2 (lg2)突变体一般没有叶舌和叶耳，或叶环发育不正常、叶舌和叶耳异位发育。LG2编码一个碱性亮氨酸拉链蛋白，它的表达时间比LG1早，可能决定幼叶原基的叶环的正确起始33。Ig2的表型是非细胞自发的，对lg1lg2双突变体的分析表明，两者 可能在同一个代谢途径中发挥功能34。尽管KNOX基因在SAM中表达，在叶原基中不表达，但它们能影响叶片基-顶轴的发 育空。玉米Iiguleless3-O (Ig3-O)是一个半显性突变体,其叶片的中脉区域异化成了叶鞘。 LG3是KNOX基因家族成员之一,在早期叶发育过程中发生异位表达而使叶片发育成叶 鞘35。水稻中 KNOX 的同源基因有 OSH1、OSH6、OSH15、OSH16、OSH43、OSH71、Oskn2 和Oskn3,它们的突变体表型都发生叶鞘向叶片的延伸；或者叶耳/叶舌也发生移位，出现在叶片的腹面1318。目前关于 KNOX基因在叶片与叶鞘分界处发生异常表达的具体通路 尚不清楚。3 腹-背轴(Adaxial-abaxial axis)发育叶的腹-背轴非对称发育是叶发育中非常关键的过程之一。第一个与腹-背轴分化有关的突变体是金鱼草突变体 phantastica (phan) 96。 phan突变体在较早生长的叶片(叶位较低 的叶)腹面出现一些成簇的带有背面特征的细胞；在后期生长出来的一些叶中，叶的细胞特征完全背面化，形成针状叶。PHAN基因编码一个MYB转录因子，在叶原基中表达。但 是PHAN本身并不提供腹-背轴信息，而是在建立腹-背轴极性的基因调控网络中，同其他 蛋白(如AS2)相互作用形成空间限制性表达模式。近年来，通过遗传学方法研究发现，腹-背轴极性的建立受到多层调控网络的作用，这个网络涉及了众多的转录因子、小分子 RNA(microRNA, miRNA; trans-acting short-intefering RNA, ta-siRNA)、生长素以及26S蛋白酶体降解的作用,它们之间的互作十 分复杂，而且这些互作在不同种属间的差异仍不大明了。目前的研究表明，叶的腹-背轴发育受到以下5种通路或因子的调控。3.1miRNA165/166调控HD-ZIP山基因的表达HD-ZIP川(ClassM Homeodomain-leucine Zipper)基因是叶腹向发育的关键基因,它们在叶的腹面表达，并在转录后受到miRNA的调控3742。拟南芥中获得功能型突变体 PHABULOSA(PHB), PHAVOLUTA (PHV)和 REVOLUTA(REV)的侧生器官都表现腹面化，PHB、PHV和REV基因都编码HD-ZIP川蛋白,它们最初在SAM和整个叶原基中表达,随 后在叶原基的腹面区域表达37, 38。这些基因都有一段与miRNA165/166互补的序列41, 42,它们的显性突变都破坏了miRNA的结合位点37, 39, 43, 44。玉米中的不完全显性卷叶突变体Rolled leafl-Origi nal (Rld1-O),其叶片表现内卷；Rld1-0 是 REV的同源基因,编码 HD-ZIP川蛋白。在突变体中，由于Rld1-0与miRNA166的匹配序列中发生了一个单核苷酸 突变(GA),导致miRNA166不能正常介导 Rld1-O mRNA的切割,使得rld1编码的蛋白在 叶背面持续表达，从而引起叶片向腹面卷曲39, 45。除了发现HD-ZIP川家族成员与miRNA结合的靶位点发生突变,使miRNA不能调控靶基 因，导致叶的腹-背轴极性发生变化外，人们还发现参与 miRNA剪接复合体形成的相关蛋白 的变化也会影响叶的极性发育。例如,拟南芥ARGONAUTE1(AGO1)基因突变后,miRNA165 在叶的腹面发生了异位表达，导致PHB基因表达的空间特征也发生了变化，从而使得叶的轴性发生改变46 o 此外有研究表明，某些基因的突变如果干扰了miRNA的合成和积累，也会影响叶的腹背轴发育。拟南芥SERRATE(SE)基因编码锌指环蛋白,它通过调控miRNA166的合成来影响 HD-ZIP川家族的PHB基因的表达。SE基因突变后能破坏 miRNA165/ 166的生物合成,从 而导致分生组织增大、叶片腹向化47,可见miRNA对HD-ZIP川的调控也有助于协调 SAM 的发育和叶原基的分化。3.2 KANADI与HD-ZIP山相互抑制并调控 YABBY的表达KANADI(KAN)和YABBY(YAB)基因是叶背向发育所必需的基因,它们分别编码 GARP和HMG转录因子,KAN和YAB都属于小的基因家族I4852Lo KAN和决定腹面属性的 HD-ZIP川基因的表达具有相互抑制的作用43, 49,并调控YAB基因的表达50 o目前,KAN家族已经报道了四个成员，其中KAN1、KAN2和KAN3与叶背面的极性分化 有关43,51, KAN4只影响子叶的发育，kan4突变体的胚珠发育异常49, 53。kanl或kan2突变体 植株没有明显的表型变化51,但是kan 1kan2双突变体的花器官明显腹向化，而且叶片的背 面出现一些类似叶片的器官 ，kan 1ka n2ka n3三突变体除叶片远端的末梢正常外，整个叶片呈辐射状，表现为完全腹向化画，表明KAN1、KAN2和KAN3作用冗余。kan 1kan2kan4E突 变体叶的表型与kan 1kan2双突变体相似，与kan 1kan2kan3三突变体不同，另外, kan 1kan2kan3kan43突变体的表型是 kan 1kan2kan3和 kan 1kan2kan4两个三突变体表型的结合， 表明KAN4与KAN1KAN2作用部分重叠,而KAN3与KAN4具有不同的功能,且作用不重叠49。在拟南芥中,YAB家族有六个紧密相关的转录因子,其中的YAB2、YAB3和 FILAMENTOUS FLOWER(FIL)3个基因参与双子叶的叶背面属性的建立48。但是,比较单子叶和双子叶植物中 YAB基因的表达模式发现，单子叶植物中的YAB基因表达不同于双子 叶。玉米中两个 YAB基因yabby9(zyb9)和zyb14在叶原基的腹面区域表达 回；水稻中已经 报道了 4个 YAB 基因：下垂叶基因 DROOPING LEAF(DL)、YAB1、YAB3和 OsYAB4,它们 都不参与叶片的极性发育5558, DL调控心皮的同一性并通过促进水稻叶片中央区域的细 胞增殖来调控中脉的形成，dl突变体的心皮转化成了雄蕊而且叶片的中脉缺失55, YAB1的共抑制植株表现颖花发育异常而且叶片背向卷曲成筒状56, YAB3参与叶片发育但不影响极性，YAB3的RNA干涉植株叶片表现扭曲、多节,而且叶舌叶耳缺失57, OsYAB4主要在维 管组织中表达58;小麦中的TaYAB1也不参与叶片的极性发育，但是它在拟南芥中的异位 表达能引起叶片发生部分背向化59。由此看出，丫AB基因在双子叶植物中的表达模式保守,而在单子叶植物中，YAB基因只影响侧生器官的生长但不决定细胞的轴性分化。3.3 ta-siRNA通过 AGO7的作用调控 ARF3/ARF4的表达生长素活性组分不仅决定叶原基的起始，而且也参与了叶片极性的建立。生长素响应因子 ARF3 (AUXIN RESPONSE FACTOR 3,亦称 ETTIN)和 ARF4 (ARF3的同源基因)的功能与 KAN家族基因的功能相似,都在叶的背面表达。拟南芥ARF3的突变抑制了 KAN1过量表达 植株中花瓣的背向化60。在突变体 arf3中，腹-背轴性的转变仅出现于花器官中，而在arf3arf4双突变体的叶和花都发生了背面向腹面的转化,双突变体的表型类似于kan突变体。单独过量表达 ARF3和ARF4不能恢复 kan的表型,而且 ARF3或ARF4的表达与 KAN 没有相关性,表明ARF3和ARF4仅仅是促进了 KAN对PHB的抑制。ARF是生长素反应中 激活或抑制转录的关键蛋白,ARF3和ARF4与KAN蛋白的相互作用可能将生长素动态梯度 和叶片腹背性发育联系了起来60。在拟南芥中，除了一些调控叶腹-背发育基因表达的 miRNA之外，还发现了一类新的 小分子RNA也影响叶发育基因的表达，称之为反式作用干扰小分子RNA(trans-actingshort-interfering RNA, ta-siRNA)。ta-siRNA 跟 miRNA 样来自基因组中特定基因的转录,但与miRNA不同的是，ta-siRNA的前体与普通的 mRNA相同,不像miRNA的前体那样 形成 发夹”结构。这种ta-siRNA的转录本不翻译产生蛋白质，只能在一些酶的参与下被加 工形成小分子 RNA,加工后的ta-siRNA会像miRNA那样作用于与之碱基配对的靶基因 mRNA61,62。目前,在拟南芥已鉴定出 5个编码ta-siRNA 的基因：TASIa、TASIb、TASIc、TAS2和 TAS36167L,其中仅 TAS3产生的ta-siRNA 参与叶的极性发育。由 TAS3 ta-siRNA衍生的 ta-siR2141 和 ta-siR2142(后称为 tasiR-ARF)调控 ARF3 和 ARF4 的表达62, 67。Ade not 等64研 究发现,TAS3 ta-siRNA控制叶的极性发育是通过 AGO7蛋白的作用来实现的,ago7(zip)突 变体叶片表现背向卷曲。 水稻中的卷叶基因 0sAG07,是拟南芥AGO7的同源基因，过量表 达0sAG07能引起叶片腹向卷曲68o玉米LEAFBLADELESS1(LBL1)是ta-siRNA生物合成所必需的基因，Ibl1突变体叶片表 现为显著背向化的针状叶69,它在拟南芥中的同源基因SUPPRESSOR OF GENE SILENGING(SGS3,同样是ta-siRNA生物合成所必需的基因，但是SGS3的突变却没有引 起叶片极性的变化70 o最新的研究发现，ta-siRNA也调控miRNA165/166的表达,由此提出了一种新的轴型形成 机制(mechanism of axial patterning),即HD-ZIP川基因的表达需经历连续两次小分子RNA的调控:ta-siRNA miRNA165/166 HD-ZIP 川69。3.4 AS1/AS2调控 HD-ZIP 山和 YABBY在叶原基中表达的AS1/AS2除了具有抑制KNOX基因表达的功能，它们也正调控HD-ZIP川基因，并抑制YAB基因的表达，从而促进叶的腹向发育1711。另外，RNA-dependent RNA polymerases RdRPs)在真核生物的转录和转录后基因沉默过程中起着重要的作用，但其在植物发育过程中的作用却知之甚少。拟南芥RNA-Depe ndent RNA Polymerase 6 (RDR6)基因(或称为 SDE1和 SGS2)与 AS1/AS2通过抑制 BREVIPEDICELLUS (BP)和 miRNA165/166 的表达来共同调控叶的发育 ” 73 o3.5 26S蛋白酶体的蛋白降解作用近来研究发现，26S蛋白酶体的蛋白降解功能也是叶的腹面属性建立所必需的。Hua ng等旦在拟南芥中筛选到一个能加重as1/as2突变表型的突变体ae3, ae3突变体表型略显畸形一些出现早的叶片表现为背面化的细长莲座叶,ae3as1和ae3as2两个双突变体表型相似,叶片的腹面属性均部分丧失，表现为严重背面化的莲座叶或针状叶，这种双突变体和单突变体表型的差异说明这3个基因或蛋白之间存在着相互作用的关系。AE3编码26S蛋白酶体的亚基RPN8a,进一步研究发现26S蛋白酶体的其他部分亚基突变后也可加重as2的表型,说明26S蛋白酶体的蛋白降解功能影响叶片腹面发育，因而揭示了翻译后水平的调控在叶形态建成中具有重要作用。4 中-边轴(Centro-lateral axis)发育中-边轴发育的特征是叶片沿中脉向两侧发育，中-边轴的非对称性在玉米叶片发育早期就很明显，即在环状分生组织的一侧形成中脉初始原基，在另一侧形成边缘初始原基75,目前对于中-边轴发育的机理研究还较少。玉米窄叶鞘ns(narrow sheath)突变体叶片边缘部分缺失固，但长度没有变化75, 77。ns 的表型是一个重复因子性状(Duplicate factor trait),它受控于两个不连锁的位点：ns1和ns278,只有这两个位点同时发生突变的纯合株才出现突变表型。NS在侧生器官原基的边缘区域持续表达，NS与拟南芥 PRS(Pressed flower)蛋白高度同源75, PRS编码一个类 WUSCHEL的同源异型盒蛋白79L, prs突变体无叶托，ns和prs突变引起的表型差异完全符 合叶片分区和组织发生的模型(Leaf zon ation and histoge nesis model)1751，该模型将被子植物的叶分为上下两个区域。在双子叶植物中，叶的上部区域生长成叶片和叶柄，下部区域长成叶基和叶托，而单子叶植物的叶下部区域长成叶鞘和叶片，上部区域生长成极简化的尖端末梢75。根据这个模型，NS和PRS这两个基因的作用部位并不矛盾，都是在叶的下部区域表达，说明它们在单子叶和双子叶植物中的功能保守。5结语近年来，叶形态建成的分子机理研究取得了重大进展，许多叶发育相关的关键基因、小分子RNA和生长素等调控因子被研究揭示出来(表1),它们之间复杂的相互作用也得到了 初步分析和阐述。我们发现，调控叶原基及轴性发育因子间的信号转导通路没有一种是专 有的，比如在SAM中表达的KNOX家族基因也影响叶基-顶轴的发育，调控腹-背发育的HD-ZIP m- KAN通路也受到叶原基中 AS1基因表达的影响,以及生长素信号转导影响叶片发育的全过程等等，这些结果表明各个通路之间存在着相互而紧密的联系，它们共同调控叶的发育。目前，拟南芥中叶发育机理的研究较为深入 ,单子叶植物玉米的叶发育研究也有了一些出 色的进展。根据这些结果，已经初步明确了叶发育的分子调控网络，而作为主要粮食作物的水稻等植物的叶发育研究还相当薄弱，这在一定程度上阻碍了通过分子调控叶形来达到理想株型的设想的实施。另外，已发现的叶发育相关调控因子在不同植物中功能的保守 性，以及它们之间更清晰的作用网络仍不十分明了，这是摆在我们面前的一个任务和挑战。随着基因组测序的完成、各种植物丰富的叶形遗传材料的积累以及叶发育调控网络 的逐步明晰，将有力地推动众多植物的叶发育机理研究，相信随着研究的不断深入 ,复杂的叶发育调控网络将逐渐被理清。表1 决定叶的3种极性发育的因子Table 1 Determinants of the three polarity fate of leaves3个不对称轴Three axes of asymmetry蛋白家族、蛋白酶体或小分子 RNAProteins, proteasome orsmall RNA families代表成员Notable members基-顶轴命运SPL玉米(Maize): LG1 空、LG21331Proximo-distal fate水稻(Rice): OsLG132KNOX玉米(Maize): LG335水稻(Rice): OSH1 16、 OSH618、 OSH1517、目SMd人swdop 一 qe)敢脛語csn03lsn)snarNel/l)州_1山 HosnMr - 99LEE 99LeRTIzd人swdop 一 qe)敢脛語,(Ne乞)州SSO，刘 28A ，岭_1匚 人swdop 一 qe)敢脛語 ，朝cozmv 人 swdop 一 qe)敢脛語 団寸NVX，园 ENVX，团 2NVX ，扌LNVX 人swdop 一 qe)敢脛語可co山 人swdop 一 qe)敢脛語 劭zm上一 S2人swdop 一 qe)敢脛語 团卜O0VSO0)0)農系 渤卜OQV ，創 LO0V 人 swdop 一 qe)敢脛語 ls人swdop 一 qe)敢脛語 园 LP 正o?Nel/l)山比，囲Hd ，创8Hd 人swdop 一 qe)敢脛語回ESO，回e&so ,目 LHSO ,可0寸HSO ,回 9LHSOVNEEA88VAzmQVNVX luose od S90002SV 三 dNGH9国-e9el0lu。9eJ-exeq9eJ-exep9国亘x eqeexepv参考文献(References):1 QU Li-Jia, DENG Xing-Wang. 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