气相色谱法检测BHA、BHT、TBHQ的疑难详解

广州市涂华生的楮rti肓眼公司广州市谦华其骗保器设雷有眼!a司气相色谱法检测BHA、BHT、TBHQ的疑难详解BHA（丁基羟基茴香醚），BHT（2,6-二叔羟基对甲酚），TBHQ（特 丁基对苯二酚）是常用的加于植物油中的酚类抗氧化剂。GB/T5009.30-2003介绍了 BHA、BHT的检测方法，但这个方法 真的用起来却使人一头雾水，不仅步骤复杂，而且效果很差，漏洞很 多，堪称最“使人困惑不解”的国标方法。该方法用石油醚溶解油样，过硅胶-弗罗里矽土 （6+4）层析柱，再 用100ml二氯甲烷分五次淋洗，减压挥干，用二硫化碳定容后开机进 样。仪器分析方面无懈可击，问题出在样品前处理上。首先层析柱如何装填就是一个问题。按照方法，需使用者自行装 填层析柱，而手工装填的层析柱松紧不一，很难控制质量。填的松了 怕吸附不够，填的紧了淋洗速度奇慢，1小时也滴不出几滴，一个样 品可能要淋洗几天。洗脱时问题也有一个大漏洞，按照方法操作，无论如何小心都会 洗出一部油分，这些油分可怎么挥干呢。难道用二硫化碳只是为了连油带抗氧化剂一起溶解后进样吗?如果油分进了柱子，可能进不了几 个样就污染到无法继续的地步。而且二硫化碳挥发性极强，用它定容 本身就不可靠。如果按GB/T5009.30-1996，几乎不可能做成实验，且工作量大， 接触毒物多，然而既得不到准确的结果，色谱柱也会很快报废。其实，植物油中的抗氧化剂检测可以相当简单，甚至可以作为色 谱初学者的入门功课。前处理方法是：称取1至2克油样，用10ml 甲醇分三次萃取液（三次比例为4, 3, 3ml），合并萃取液上机。就这 么点步骤，而且实际效果彳艮好，气相液相都可以做，同时还可用于处 理TBHQ，回收率一般都在90%以上。因此，笔者实在不理解为什么有人放着简单的方法不用，而偏要 用如此“使人困惑不解”的方法。关于国标处理方法就讨论到这里，下面只讨论用甲醇萃取的方 法。由于油样的组成相当复杂，与常用的有机试剂多少有一些混溶。甲醇提取液中也会有一小部分的油分，不信的话可以加一些水，纯甲醇溶液无变化，而油样的甲醇提取液一加水立刻混浊。这一小部分的油分对于检测没有什么太大影响，但对于色谱柱污 染较大。因此在不影响回收率的前题下如何排除油分的影响是该实验 的一个重点。试过用各种吸附剂、层析填料，其效果都不如一张普通的滤纸。 因为滤纸能吸收油分。最好先把甲醇提取液放于冰箱冷冻层冰冻几小 时，再趁凉过滤。这是笔者目前发现的最好的驱油方法。BHA、BHT需配合使用才会有较好的抗氧化效果，因此有BHA 就会有BHT,而TBHQ 一般是单独使用。这一点对我们非常有用， 无论在气相色谱还是液相色谱，BHA、BHT的分离都相当好，但是 TBHQ与BHT的峰形可能会有一部分重叠，很难完全分开;因此我们 可以将BHA、BHT配为一个标准，TBHQ单独作一个标准，分别进 样，分别定量。当使用气相色谱时，如用填充柱，填料为10%SE-30或10%QF-1， 如使用毛细管柱，可选用10m以上，0.53mm的非极性柱。当使用液相色谱仪时，流动相为92:8的甲醇水溶液，紫外检测器，检测波长280nm，当降低甲醇含量时，出峰时间会延迟，BHT尤其 显著。为什么要用三次萃取呢。如果只针对BHA、TBHQ, 一次萃取就 够了，而BHT在甲醇中的溶解性稍弱，因此用三次萃取增大回收率。如果对人身防护彳艮看重，可以用乙醇代替甲醇，但它与油分的互 溶程度更大些，提取液似乎没有那么“干净”。当处理某些轻质油如 代可可脂时，会有完全混溶现象，这时只能用甲醇。如果要检测糕点类食品中的BHA、BHT、TBHQ，旧国标中有用 乙醚提取出油脂，再对油脂进行检测的方法。这样做费时费力，且提 取回收率不高。可以直接用甲醇对食品进行提取，提取液直接进样。如果要得到比较准确的结果，应在冰箱的冷冻层存有固体的标准 物质。因为BHA、BHT、TBHQ的标准溶液虽然在一般情况下较稳 定，但有时也会出现爆发式的衰减就是高浓度的贮备液也难以幸免， 尤其是TBHQ。标准物质的准确是实验的根本所在，因此我们要提防 这一情况，如果标准峰面积较前一段实验的峰面积明显减小，则应引 起重视。如有条件，可用紫外光度计扫描标准溶液，每次记录吸收值。为实验方便计，BHA、BHT、TBHQ的标准溶液可以按以下方法 配制。先各称取0.025克固体标准物质分别溶于25ml容量瓶中（溶剂： 甲醇），得浓度为1.00g/L的贮备液，再各吸取1.0ml于50.0ml容量瓶 中，定容，得浓度为0.02g/L的使用液。BHA、BHT的使用液可以也 最好配在一起，TBHQ单列。这个浓度的标准峰与实际的样品峰面积 接近，适于做单点定量法。此文章由广州深华生物技术有限公司编辑修改。