医学基础技能操作汇总

一、观察人的口腔上皮细胞（一）、制作临时装片的操作顺序1用洁净的纱布或擦片纸等把载玻片和盖玻片擦拭干净。2. 注意一定要漱口3在载玻片的中央滴一滴生理盐水。4用消毒牙签在自己漱净的口腔内侧壁上轻轻地刮几下。5把牙签上附有碎屑的一端，放在载玻片上的生理盐水滴中涂抹几下。6用镊子夹起盖玻片，使它的一边先接触载玻片上的生理盐水滴，然后缓缓地盖在水滴上。 注意避免盖玻片下面出现气泡。7在盖玻片的一侧滴加稀碘液，用吸水纸从盖玻片的另一侧吸引，使染液浸润标本的全部。（二）、用显微镜观察1、先在低倍镜下观察找到希望观察的目标2、将其移到视野的中央如何移动3、观察细胞的结构4、绘图：左眼看目镜，右眼画绘图形（注意：名称规范的标识二、分光光度计的使用方法主体内容： 1使用仪器前，使用者应该首先了解本仪器的结构和工作原理。以及各个操 作旋钮之功能。在未接通电源前，应该对仪器的安全性进行检查，电源线接线应牢固。通地 要良好，各个调节旋钮的起始位置应该正确，然后再接通电源开关。仪器在使用前先检查一 下，放大器暗盒的硅胶干燥筒（在仪器的左侧），如受潮变色，应更换干燥的蓝色硅胶或者倒出原硅胶，烘干后再用。2将灵敏度旋钮调置“1”档（放大倍率最小）。3开启电源，指示灯亮，选择开关置于“T”波长调至测试用波长。仪器预热20分钟。4.打开试样室盖（光门自动关闭），调节“ 0”旋钮，使数字显示为“ 00.0”，盖上试样室盖，将 比色皿架置与蒸馏水校正位置，使光电管受光，调节透过率“100%”旋钮，使数字显示为“100.0”。5.如果显示不到“100.0”，则可适当增加微电流放大器的倍率档数，但尽可能置低倍率档使用，这样仪器将有更高的稳定性。但改变倍率后必须按（4）重新校正“ 0” 和“100%”。6.预热后，按（4）连续几次调整“0”和“100%”，仪器即可进行测定工作。7.吸光度A的测量按调整仪器的“00.0”和“100%”将选择开关置于“A”调节吸光度调零旋钮，使得数字显示为“ .000”，然后将被测样品移入光路，显示值即为被 测样品的吸光度值。8.浓度C的测量：选择开关由“A”旋置“C”将已标定浓度的样品放入光路，调节浓度旋钮，使得数字显示为标定值，将被测样品放入光路，即可读出 被测样品的浓度值。9.如果大幅度改变测试波长时，在调整“0”和“100%”后稍等片刻，（因光能量变化急剧，光电管受光后响应缓慢，需一段光响应平衡时间），当稳定后， 重新调整“0”和“100%”即可工作。10.每台仪器所配套的比色皿，不能与其它仪器上的比色皿单个调换。11 .本仪器数字表后盖，有信号输出01000MV,插座1脚为正，2脚为负接地线。吸收池（即比色杯）使用注意事项：要彻底清洗，尤其是盛过蛋 白质等溶液，干后形成一层膜，不易洗去，通常杯子不用时可放在 1洗洁净液中浸泡，去 污效果好，使用时用水冲洗干净，要求杯壁不挂水珠，还可以用绸布丝线或软塑料制作一个 小刷子清洗杯子。 严禁用手指触摸透光面，因指纹不易洗净。严禁用硬纸和布擦拭透光面，只能使用镜头纸 和绸布。严禁加热烘烤。急用干的杯子时，可用酒精荡洗后用冷风吹干。决不可用超声波 清洗器清洗。吸收池的校正：要固定参比杯和样品杯，可在杯的毛玻璃面上写上记号。用 盛有参比液的参比杯和样品杯测定吸光度“A0”样品杯换上样品液后测定的吸光度为“A1” 则校正后的实际吸光度A为：A= A1-A0分光光度计的使用方法一、实验原理吸光光度法是根据物质对光选择性吸收而进行分析的方 法。其理论基础是光的吸收定律朗伯-比尔定律：A=Kdc当液层厚度d以cm,吸光物 质浓度c以mol?L1为单位时，系数就以表示，称为摩尔吸光系数。朗伯-比尔定律表 示为：A= dc二、仪器介绍吸光光度法具有较高的灵敏度和一定的准确度，特别适合于微 量组分的测量。吸光光度法操作简便、快速、适用范围广，在分析化学中占有重要的地位。 吸光光度法的主要仪器是分光光度计，其主要结构如下：光源单色器比色皿光电元件输出装 置 7220型分光光度计是较为常用的一种数字显示分光光度计。以碘钨灯为光源，光栅为色 散元件。可用波长范围是330800nm，波长精度2nm，波长重现性为0.5nm,单色光带宽 6nm，吸光度显示范围为01.999,吸光度的精度为0.004（A=0.5），试样架可置四个吸收池。 1、样品室门 2、显示窗 3、波长显示窗 4、波长调节旋钮 5、电源开关 6、操作键区 7、 样品池拉手操作键区面板从左至右： 1、方式选择打印三、仪器使用方法 1、开机安装好仪 器后，检查样池位置，使其处在光路中（拉动拉手应感应到每档的定位），关好样品室门， 打开仪器电源开关，预热10分钟，即可进行测量。 2、打开样品室门，将方式定于透过率 档，按 0%T 进行机械调零。 3、从蒸馏水中取出比色皿，擦干。注意拿比色皿的时候拿毛 玻璃面。向比色皿内注入少量试液，润洗三次，然后注入3/4至4/5的试液，用滤纸片擦干 外壁所挂水珠。将比色皿按顺序放入样品池。注意光面对光源。 4、在样品池中放置空白液 与样品 5、按需要调节波长旋钮，使显示窗显示所需波长。 6、使空白溶液位于光路中，按 方式选择键使吸光度指示灯亮，按100%T键调100%,至窗口显示100%。7、打开样品室 门，将功能调于透射比档，观察显示是否为0.0,若否则按0%T键调零。调零后再放回吸光 度档。 8、重复上两步，直至仪器稳定。 9、将样品置入光路，从显示屏上读取吸光度。用 7220 型分光光度计可以直接测出样品浓度。测定采用工作曲线法，曲线由仪器自动生成， 并自动给出样品浓度。注意事项 拿比色皿时，手指只能捏住比色皿的毛玻璃面，不要碰比色皿的透光面，以免沾污。 清洗比色皿时，一般先用水冲洗，再用蒸馏水洗净。如比色皿被有机物沾污，可用盐酸- 乙醇混合洗涤液(1 : 2)浸泡片刻，再用水冲洗。不能用碱溶液或氧化性强的洗涤液洗比色 皿，以免损坏。也不能用毛刷清洗比色皿，以免损伤它的透光面。每次做完实验时，应立即洗净比色皿。 比色皿外壁的水用擦镜纸或细软的吸水纸吸干，以保护透光面。 测定有色溶液吸光度时，一定要用有色溶液洗比色皿内壁几次,以免改变有色溶液的浓度。 另外，在测定一系列溶液的吸光度时，通常都按由稀到浓的顺序测定，以减小测量误差。 在实际分析工作中，通常根据溶液浓度的不同，选用液槽厚度不同的比色皿，使溶液的吸 光度控制在0.20.7。三吸量管的使用使用移液管或吸量管移取溶液的方法是： (1) 洗涤。使用前移液管和吸量管都要洗涤，直 至内壁不挂水珠为止。方法与洗涤滴定管一样，先用洗液洗，再用自来水冲洗，最后用蒸馏 水洗涤干净。 (2) 润洗。为保证移取溶液时溶液浓度保持不变，应使用滤纸将管口内外水 珠吸去，再用被移溶液润洗三次，置换移液管或吸量管内壁的水分。润洗后的溶液应该弃去。(3) 吸取溶液。吸取溶液时，用右手大拇指和中指拿在管子的刻度上方，插入溶液中，左手 用吸耳球将溶液吸入管中(预先捏扁，排除空气)。吸管下端至少伸入液面1cm，不要伸入 太多，以免管口外壁沾附溶液过多，也不要伸入太少，以免液面下降后吸空。用洗耳球慢慢 吸取溶液，眼睛注意正在上升的液面位置，移液管应随容器中液面下降而降低。当液面上升 至标线以上，立即用右手食指按住管口。(一般不用大拇指操作，大拇指操作不灵活。)随后 右手食指稍稍抬起，让液面缓慢下降到凹液面与刻度正好相切即可。 (4)放出整管溶液。 将移液管放入锥形瓶或容量瓶中，将锥形瓶或容量瓶略倾斜，管尖靠瓶内壁，移液管垂直。 管尖放到瓶底是错误的。松开食指，液体自然沿瓶壁流下，液体全部留出后停留15 秒(移 液管上标有“快”，应该不停留)，取出移液管。留在管口的液体不要吹出，因为校正时未将 这部分体积计算在内(移液管上标有“吹”，应该将留在管口的液体吹出)。使用吸量管放出 一定量溶液时，通常是液面由某一刻度下降到另一刻度，两刻度之差就是放出的溶液的体积， 注意目光与刻度线平齐。实验中应尽可能使用同一吸量管的同一区段的体积。注意事项 1、移液管使用后，应洗净放在移液管架上； 2、移液管和吸量管在实验中应与溶液一一对应 不应串用以避免沾染四蟾蜍坐骨神经-腓肠肌标本的制备坐骨神经干标本的制备、缝匠肌神经标本制备一、实验目的 1、急性动物实验（与慢性动 物实验的区别） 2、离体标本实验（与在体标本实验的区别） 3、掌握锌铜弓导致生物电产 生的原理 4、掌握离体标本的制备及手术训练 5、掌握剪刀的技用和双毁髓的意义二、实验 原理 1、急性动物实验与慢性动物实验，在体实验与离体实验急性动物实验可分为离体和 在体实验两种方法。离体实验：是从活着的或刚处死的动物身上取出所需要的器官、组织、 细胞或细胞中的某些成分。置于一个能保持其正常功能活动的人工环境中，观察某些人为的 干预因素对其功能活动的影响。例如，对离体蛙心或动物血管条进行灌流，可用于研究某些 生物活性物质或药物对心肌或血管平滑肌收缩力的影响；应用膜片钳技术可研究细胞小片膜 上单个离子通道的电流特性。在体实验：是在动物麻醉条件下，手术暴露某些所需研究的部 位，观察和记录某些生理功能在人为干预条件下的变化。例如，以动脉插管记录动物血压， 可用于观察某些神经或体液因素对血压的影响；将玻璃微电极插入脑内某些部位进行细胞外 或细胞内记录，观察神经元在接受某些刺激时放电活动的变化，以了解这些神经元的生理功 能。急性动物实验的优点是实验条件比较简单，条件较易控制，便于进行直接的观察和细致 的分析；离体实验则更能深入到细胞和分子水平，有助于揭示生命现象中最为本质的基本规 律。但急性动物实验的结果可能与生理条件下完整机体的功能活动有所不同，尤其是离体实 验的结果，此时被研究的对象，如器官、组织、细胞或细胞中的某些成分已经脱离整体，它 们所处的环境已发生很大的改变，实验结果与在整体中的真实情况相比，可能会有很大的差 异。慢性动物实验：慢性动物实验以完整、清醒的动物为研究对象，且尽可能保持外界环境 接近于自然，以便能在较长时间内观察和记录某些生理功能的改变。实验前一般需对动物作 某些预处理，待动物康复后再进行观察。例如，研究唾液的分泌调节时，可预先将唾液腺导 管开口移至颊部体表，观察时就能方便地从体表收集到唾液腺分泌的纯净唾液；研究某种内 分泌功能时，常先摘除动物某个内分泌腺，以便观察这种内分泌激素缺乏时以及人为替代后 的生理功能改变，用以了解这种内分泌激素的生理作用。慢性动物实验适用于观察某一器官 或组织在正常情况下的功能以及在整体中的作用地位，但不宜用来分析某一器官或组织细胞 生理功能的详细机制。与急性动物实验相比，慢性动物实验的干扰因素较多，实验条件较难 控制。 2、锌铜弓的作用及原理锌铜弓：在生理学实验中，锌铜弓是检验标本机能活性最 常用而简易的刺激器。由铜片和锌片两种金属制成。锌铜弓具有刺激作用，是因为金属与溶 液之间产生电位差，即电极电位。通常将金属浸入电解质溶液中，如Zn便溶解而成Zn离子。而在Zn的里面则形成负离子。Cu在溶液中则相反，金属与溶液之间便产生了电位差电极电位。如果将Zn和Cu 一端 接触，则在接触部位电流由Cu向Zn方向流动；而在溶液中则相反，由Zn向Cu流动。当 锌铜弓接触组织时（注意：表面必须湿润），电流便沿Zn可兴奋组织一Cu方向流动，而产 生流动作用。这样，锌铜弓好像一个电池，Zn如同其阳极，Cu好像阴极而发挥作用。神经 或肌肉的电刺激阈值非常小，所以仅用锌铜弓接触，即可构成刺激，以便检验组织的机能活 性。 3、蟾蜍作为生理学实验模式生物的优点蛙或蟾蜍等两栖类动物的一些基本生命活动和 生理功能与温血动物相似，而其离体组织生活条件易于掌握，在任氏液的浸润下，神经肌肉 标本可较长时间保持生理活性，因此，在生理学实验中常用蛙或蟾蜍坐骨神经腓肠肌离体标 本来观察神经肌肉的兴奋性、兴奋过程以及骨骼肌收缩特点等。 4、蟾蜍的毁髓及单毁髓和 双毁髓及双毁髓的意义蟾蜍破坏脑脊髓：取蟾蜍一只，用自来水冲洗干净。右手握住蟾蜍， 用食指压住头部前端使头前俯，中指、无名指捏住两前腿，无名指以及小指捏住两后腿，左 手持针，当触及到两耳中间的凹陷处时，持针手即感觉针尖下陷，此处即是枕骨大孔的位置。 左手持针从枕骨大孔向前刺入颅腔，左右搅动捣毁脑组织，然后将刺蛙针退到枕骨大孔，不 拔出而是将其尖转向后插入脊柱管中捣毁脊髓，插入椎管时，蟾蜍后肢立即失去紧张性，多 数情况出现尿失禁。若脑脊髓破坏完全，可见蟾蜍四肢松弛，呼吸消失。单毁髓：如毁髓针 确在颅腔内，实验者可感到针尖触及颅骨。双毁髓：再将毁髓针退至枕骨大孔，针尖转向后 方，与脊柱平行刺入椎管，以捣毁脊髓。彻底捣毁脊髓时，可看到动物的后肢突然蹬直，而 后瘫软如棉。双毁髓的意义：这个实验主要是探讨神经纤维冲动产生、兴奋传递和肌肉收缩 之间的关系，与神经中枢无关。为了制备这个标本需要首先处死青蛙，双毁髓的意义就在于 此，这种双毁髓的处死方法，简单易行，关键是相对比较人道。5、蟾蜍坐骨神经腓肠肌 标本的制备（1）剪除上肢和内脏：在骶髂关节上0.51.0cm处用粗剪刀剪断脊柱。用镊子 夹住后端脊柱，以剪刀沿脊柱两侧剪除所有内脏及头胸部，留下后肢、骶骨、后端脊柱及紧 贴于脊柱两侧的坐骨神经。（2）剥皮：左手用镊子或直接用手捏住脊柱断端（注意不要压迫 神经），右手捏住断端边缘皮肤，向下剥去全部后肢皮肤，将标本置于盛有任氏液的培养皿 中。（3）分离两腿：用玻璃分针沿脊柱两侧游离出两条坐骨神经，并于近脊柱处各扎一细线， 然后在扎线与脊柱之间剪断神经。提着神经上的细线，将两条坐骨神经分别置于两条大腿上， 左手持脊柱，将骶骨翘起，将下位脊柱全部剪除。捏着两侧髂骨向反方向分离，使耻骨联合 脱臼后，沿耻骨联合正中将两下肢剪开，将一条腿浸于任氏液中备用，另一条置于浸有任氏 液的玻璃板上。（2）、（3）两步可变为一手捏住脊柱后端，一手抓着蟾蜍头部向两侧拉开， 可直接分离两腿，蟾蜍皮肤仍留在蟾蜍上身部。若试验中当堂进行坐骨神经-腓肠肌兴奋性 实验，则不需浸泡入任氏液）（4）游离坐骨神经和剪断股骨：认清坐骨神经沟和腓肠肌的部 位，用剪刀剪断梨状肌及其周围的结缔组织，左手提着神经上的细线，右手持剪刀或玻璃分 针沿坐骨神经沟细心剥离，直至将坐骨神经剥离到腘窝。将游离干净的坐骨神经放在下腿上，沿膝关节的周围将大腿的所有肌腱剪断，并用剪刀刮净股骨下段附着的肌肉， 在股骨上 1/3 处剪去上段股骨及所附的肌肉，这样制成的称为坐骨神经下腿标本。（6）游离腓肠肌：在坐骨神经下腿标本的基础上，用剪刀将跟腱的下端剪断，在跟腱与肌 肉交界处扎一条细线，左手提线，右手用剪刀游离腓肠肌，直到膝关节。做好的标本用锌铜 弓的两极轻轻接触坐骨神经，腓肠肌立即收缩，表示标本的兴奋性良好。 6、坐骨神经干 标本的制备和缝匠肌神经标本制备坐骨神经干标本的制备：蟾蜍下肢背面向上置于蛙板上， 剪去尾椎；标本腹面向上，用玻璃分针分离脊柱两侧神经丛，用线在近脊柱处结扎，剪断神 经；将神经干从腹面移向背面。标本背面向上固定，从大腿至跟腱分离坐骨神经。坐骨神经 标本置任氏液中备用。缝匠肌神经标本制备：缝匠肌：位于股部腹内侧面，起于耻骨联合， 止于胫骨，为一肌纤维平行排列的长条肌肉（图 2-4）。缝匠肌受坐骨神经的分支支配。此 分支起于梨状肌的尾骨侧下面，沿途又向半膜肌、半腱肌等发出分支。并由内大收肌和股内 直肌之间穿过，到达股部腹面。在缝匠肌内侧面下1/3处进入肌肉。由于该神经在走行沿途 中一再分支，到达缝匠肌时已很纤细，解剖时需倍加小心以免伤及神经。制备过程：取一侧 下肢，腹位置于蛙板上。找到梨状肌，将其在尾骨的附着处剪断。小心分离其下的坐骨神经， 认清坐骨神经在此处发出的 3 个分支。在分支的中枢端结扎坐骨神经，并在结扎线的中枢端 以及3 个分支的外周端剪断坐骨神经。轻轻提起结扎线，细心地对3 个分支略加分离，确认从内直肌和半腱肌之间进入大腿腹面的一支，注意：此分支为支配缝匠肌的神经。再将其它 两个分支自坐骨神经起始处剪断，将保留的一支神经置于由任氏液湿润的棉球下以保护之。翻转下肢 标本，将其背位置于蛙板上，找到缝匠肌。用尖镊子在其胫骨附着点腱膜下开一小孔，穿线 结扎。提起结扎线，用手术剪将结扎线外侧的腱膜剪断。轻轻提起结扎线，用眼科剪沿缝匠 肌外侧缘仔细剪开肌膜，直至缝匠肌在耻骨联合的附着处。为保护肌纤维，可在附着处剪下 少量耻骨。用玻璃解剖针将缝匠肌以内侧缘为轴翻转180，使其内表面向上，即可清楚地 看到支配肌肉的神经在其下1/3 的内侧缘进入肌肉。随后将肌肉翻正复原，用眼科剪沿内侧 缘由前向后剪开肌膜。注意：留下约2mm神经进入处的肌膜，以便在下一步操作中保护神 经不被牵拉。用玻璃解剖针分离内大收肌和股内直肌，将在背面已分离的神经由分离处穿至 腹面，在此过程中需将支配其它肌肉的神经分支一一剪断。注意：勿伤及支配缝匠肌的神经， 这样即可把坐骨神经-缝匠肌分离出来。用镊子分别夹住耻骨和结扎线。将标本移至盛有任 氏液的培养皿内，用锌铜弓检查标本。 7、手术剪的分类及剪刀的技用手术剪的分类：根据 其结构特点有尖、钝，直、弯，长、短各型。据其用途分为组织剪、线剪及拆线剪。组织剪 多为弯剪，锐利而精细用来解剖、剪断或分离剪开组织。通常浅部手术操作用直剪，深部手 术操作用弯剪。如图 17。线剪多为直剪，用来剪断缝线、敷料、引流物等。如图18。线 剪与组织剪的区别在于组织剪的刃锐薄，线剪的刃较钝厚。所以，决不能图方便、贪快，以 组织剪代替线剪，以致损坏刀刃，造成浪费。拆线剪是一页钝凹，一页直尖的直剪，用于拆 除缝线，如图19。正确持剪刀法为拇指和第四指（无名指）分别插入剪刀柄的两环，中指 放在第四指环的剪刀柄上，食指压在轴节处起稳定和向导作用。正确持剪刀法：为拇指和第 四指（无名指）分别插入剪刀柄的两环，中指放在第四指环的剪刀柄上，食指压在轴节处起 稳定和向导作用。三、实验器材 1、实验动物：蟾蜍 1 只/组 2、实验设备：低等动物手 术器械，锌铜弓，解剖盘等四、实验步骤 1、掌握单毁髓和双毁髓的方法及生理意义 2、 掌握坐骨神经-腓肠肌标本的制备 3、缝匠肌神经标本的制备 4、坐骨神经干标本的制备 5、 掌握剪刀的技用和标本的检验 6、掌握动物尸体的处理方法和保护方法五、结果与分析 1、 蟾蜍坐骨神经-腓肠肌标本制作如下图： 锌铜弓刺激坐骨神经，则能感到用细线结扎的腓肠肌的肌肉收缩。 2、试验中应注意的事项： （1）、避免蟾蜍体表毒液和血液污染标本，不可用金属器械触碰神经干。（2）、操作过程中 避免污染、损伤、过度牵拉神经和肌肉。（3）、在操作过程中，应防止标本表面干燥，用水 或任氏液润湿，以免影响标本的兴奋性。（4）、标本制成后放在任氏液中浸泡数分钟,使标本 兴奋性稳定,再开始实验效果会较好。（5）、锌铜弓使用前应适当润湿，但锌、铜两极不可直 接或间接接触，形成闭合回路。（6）、如需定量测量神经纤维传导速度，则每次刺激后必须 让标本有相同的休息时间。