PEG法检测循环免疫复合物.ppt

PEG法检测循环免疫复合物,免疫研究所 梁亚玲,【实验目的】,掌握PEG法测定循环免疫复合物(CIC)的实验步骤、影响因素，结果判断标准和计算方法；了解循环免疫复合物测定的临床意义。,【实验原理】,低浓度（2 5%)的聚乙二醇（PEG) 能选择性沉淀免疫复合物。在受检血清中加入PEG，使最终浓度为3.5%，可将血清中免疫复合物沉淀下来，需用分光光度计测定沉淀量，用光密度(OD)表示其相对量。 本法简便易行，国内己广泛应用。,【试剂与材料】,1、0.1mol/L硼酸缓冲液： 称取硼砂0.4g，硼酸0.51g， 溶于100ml蒸馏水中，调PH至8.6。 2、4.166%PEG溶液：用硼酸缓冲液配制。PEG的分子量为6000。 3、受检血清，试管，721分光光度计。,实验方法,1.吸待检血清0.2ml，用硼酸缓冲液0.4ml稀释（血清稀释3倍）。 2.分对照管和测定管： 对照管：硼酸缓冲液2ml稀释血清0.22ml； 测定管：4.166PEG2ml+稀释血清0.22ml（此时PEG最终浓度为3.75） 混匀后两管均放4 C冰箱1h后取出，室温放置1015min。 用0.51cm比色杯在分光光度计上测两管A495nm值，以硼酸缓冲液调零。,结果判断,待测血清浊度值 （测定管A对照管A)100,实验讨论,注意在本试验中要求的PEG终浓度为何为3.75。 受检查血清为何要一定保持新鲜，放冰箱保存不得超过一周（因为即使没有污染，也因血清中聚合IgG的形成而出现假阳性）。,