专题21微生物分离培养及在传统发酵技术中的应用

专专题题2121晨背关键语句晨背关键语句导练感悟高考导练感悟高考热热点点透透析析高高考考考点一考点一考点二考点二拾遗自主补给拾遗自主补给冲刺直击高考冲刺直击高考考点三考点三请根据当地教学实际和高考要求选用请根据当地教学实际和高考要求选用纤维素分解菌纤维素分解菌纤维素酶纤维素酶 8三种常用的灭菌方法有：三种常用的灭菌方法有：灼烧灭菌，如接种环、接灼烧灭菌，如接种环、接种针；种针；干热灭菌，如玻璃器皿和金属用具等；干热灭菌，如玻璃器皿和金属用具等；高压蒸汽高压蒸汽灭菌，如培养基等。灭菌，如培养基等。9土壤中分解尿素的细菌的分离与计数过程：土壤取样土壤中分解尿素的细菌的分离与计数过程：土壤取样样品的稀释样品的稀释将稀释液涂布到以尿素为唯一氮源的培养基将稀释液涂布到以尿素为唯一氮源的培养基上上筛选能生长的微生物菌落。筛选能生长的微生物菌落。1(2012北京高考北京高考)高中生物学实验中，在接种时不进行严高中生物学实验中，在接种时不进行严格格无菌操作对实验结果影响最大的一项是无菌操作对实验结果影响最大的一项是 ()A将少许干酵母加入到新鲜的葡萄汁中将少许干酵母加入到新鲜的葡萄汁中B将毛霉菌液接种在切成小块的鲜豆腐上将毛霉菌液接种在切成小块的鲜豆腐上C将转基因植物叶片接种到无菌培养基上将转基因植物叶片接种到无菌培养基上D将土壤浸出液涂布在无菌的选择培养基上将土壤浸出液涂布在无菌的选择培养基上命题立意命题立意本题主要考查几种常见生物学实验的无菌操本题主要考查几种常见生物学实验的无菌操作要求。作要求。知识依托知识依托无菌操作对实验结果影响大小决定于杂无菌操作对实验结果影响大小决定于杂菌对实验结果的影响。菌对实验结果的影响。植物组织培养成功的关键在植物组织培养成功的关键在于无菌操作，否则将导致实验失败。于无菌操作，否则将导致实验失败。解析解析选选 A项，将少许干酵母加入到新鲜的葡萄汁中进行项，将少许干酵母加入到新鲜的葡萄汁中进行酿酒时，在缺氧、酸性环境下其他杂菌不能生长，故不严格灭酿酒时，在缺氧、酸性环境下其他杂菌不能生长，故不严格灭菌对其影响不大；菌对其影响不大；B项，腐乳制作中将毛霉菌液接种在切成小项，腐乳制作中将毛霉菌液接种在切成小块的鲜豆腐上，毛霉生长繁殖快且抗杂菌能力强，故不严格灭块的鲜豆腐上，毛霉生长繁殖快且抗杂菌能力强，故不严格灭菌对实验结果影响不大；菌对实验结果影响不大；C项，进行植物组织培养时，植物材项，进行植物组织培养时，植物材料体积小、抗性差，而微生物繁殖快、生长迅速、会争夺培养料体积小、抗性差，而微生物繁殖快、生长迅速、会争夺培养基中的营养，产生的代谢废物还会毒害培养材料，故培养材料基中的营养，产生的代谢废物还会毒害培养材料，故培养材料一旦被微生物一旦被微生物(如细菌如细菌)污染，将严重影响实验结果；污染，将严重影响实验结果；D项，选择项，选择培养基中已经加入了某种化学物质，以抑制不需要的微生物生培养基中已经加入了某种化学物质，以抑制不需要的微生物生长，促进所需要的微生物生长，另外土壤浸出液本身也含有一长，促进所需要的微生物生长，另外土壤浸出液本身也含有一定量的微生物，因此将土壤浸出液涂布在无菌的选择培养基上定量的微生物，因此将土壤浸出液涂布在无菌的选择培养基上时不进行严格的无菌操作，对实验结果影响不大。时不进行严格的无菌操作，对实验结果影响不大。C学车问答 http:/ 学车问题回答驾驶员模拟考试2016 http:/ 科目一 科目二 科目三 科目四2(2012江苏高考江苏高考)下列关于制作果酒、果醋和腐乳的叙述，下列关于制作果酒、果醋和腐乳的叙述，合理的是合理的是(多选多选)()A在果酒发酵后期拧开瓶盖的间隔时间可延长在果酒发酵后期拧开瓶盖的间隔时间可延长B条件适宜时醋酸菌可将葡萄汁中的糖分解成醋酸条件适宜时醋酸菌可将葡萄汁中的糖分解成醋酸C果酒发酵过程中发酵液密度会逐渐减小果酒发酵过程中发酵液密度会逐渐减小D将长满毛霉的豆腐装瓶腌制时，底层和近瓶口处需加大将长满毛霉的豆腐装瓶腌制时，底层和近瓶口处需加大 用盐量用盐量命题立意命题立意本题主要考查果酒、果醋和腐乳制作的知识。本题主要考查果酒、果醋和腐乳制作的知识。知识依托知识依托传统发酵技术操作中，要提供适合所用微生传统发酵技术操作中，要提供适合所用微生物生长发育的适宜条件，同时严格进行无菌操作，抑制其物生长发育的适宜条件，同时严格进行无菌操作，抑制其他杂菌生长。他杂菌生长。实验操作过程中减少不安全因素的发生。实验操作过程中减少不安全因素的发生。解析解析选选 果酒发酵后期，因营养物质的消耗、果酒发酵后期，因营养物质的消耗、pH改改变等原因，酵母菌呼吸产生变等原因，酵母菌呼吸产生CO2的量变少，所以可延长拧松瓶的量变少，所以可延长拧松瓶盖的间隔时间，盖的间隔时间，A项正确；当氧气、糖源充足时，醋酸菌可将项正确；当氧气、糖源充足时，醋酸菌可将葡萄汁中的糖分解成醋酸，葡萄汁中的糖分解成醋酸，B项正确；果酒发酵过程中不断消项正确；果酒发酵过程中不断消耗葡萄糖产生酒精，导致发酵液的密度逐渐减小，耗葡萄糖产生酒精，导致发酵液的密度逐渐减小，C项正确。项正确。制作腐乳时，对长满毛霉的豆腐加盐腌制时，需逐层加盐，制作腐乳时，对长满毛霉的豆腐加盐腌制时，需逐层加盐，并随层数加高而增加用盐量，在近瓶口表面要铺得厚一些，并随层数加高而增加用盐量，在近瓶口表面要铺得厚一些，D项错误。项错误。ABC3(2012浙江自选模块浙江自选模块)幽门螺杆菌幽门螺杆菌(Hp)感染是急慢性胃炎和消感染是急慢性胃炎和消化性溃疡的主要致病因素。在患者体内采集样本并制成菌液化性溃疡的主要致病因素。在患者体内采集样本并制成菌液后，进行分离培养。实验基本步骤如下：后，进行分离培养。实验基本步骤如下：请回答：请回答：(1)在配制培养基时，要加入尿素和酚红指示剂，这是因为在配制培养基时，要加入尿素和酚红指示剂，这是因为Hp含有含有_，它能以尿素作为氮源；若有，它能以尿素作为氮源；若有Hp，则菌，则菌落周围会出现落周围会出现_色环带。色环带。(2)下列对尿素溶液进行灭菌的最适方法是下列对尿素溶液进行灭菌的最适方法是_灭菌。灭菌。A高压蒸汽高压蒸汽 B紫外灯照射紫外灯照射 C70%酒精浸泡酒精浸泡 D过滤过滤(3)步骤步骤X表示表示_。在无菌条件下操作时，先将菌液。在无菌条件下操作时，先将菌液稀释，然后将菌液稀释，然后将菌液_到培养基平面上。菌液稀释的到培养基平面上。菌液稀释的目的是为了获得目的是为了获得_菌落。菌落。(4)在培养时，需将培养皿倒置并放在在培养时，需将培养皿倒置并放在_中。若不中。若不倒置培养，将导致倒置培养，将导致_。(5)临床上用临床上用14C呼气试验检测人体是否感染呼气试验检测人体是否感染Hp，其基本原理，其基本原理是是Hp能将能将14C标记的标记的_分解为分解为NH3和和14CO2。命题立意命题立意本题考查微生物的分离与培养的知识。本题考查微生物的分离与培养的知识。知识依托知识依托微生物分离是根据微生物的营养需求及生长微生物分离是根据微生物的营养需求及生长条件，人为控制这些条件，适合目的微生物生长、抑制其他条件，人为控制这些条件，适合目的微生物生长、抑制其他微生物生长的方法。微生物生长的方法。微生物培养操作过程中要严格无菌操微生物培养操作过程中要严格无菌操作。作。运用特定的染色或化学试剂与微生物代谢产物的特定运用特定的染色或化学试剂与微生物代谢产物的特定反应，检验或检测目的微生物。反应，检验或检测目的微生物。解析解析(1)幽门螺杆菌幽门螺杆菌(Hp)含有脲酶，能以尿素为氮源，在加入尿含有脲酶，能以尿素为氮源，在加入尿素和酚红指示剂的培养基中培养素和酚红指示剂的培养基中培养Hp，由于尿素经脲酶的降解可产，由于尿素经脲酶的降解可产生碱性的生碱性的NH3，NH3能使培养基中的酚红由红黄色变成红色，故菌能使培养基中的酚红由红黄色变成红色，故菌落周围会出现红色环带。落周围会出现红色环带。(2)由于尿素加热会分解，对尿素溶液进由于尿素加热会分解，对尿素溶液进行灭菌最好用行灭菌最好用G6玻璃砂漏斗过滤。玻璃砂漏斗过滤。(3)微生物的分离和培养步骤是：微生物的分离和培养步骤是：配制培养基配制培养基灭菌、倒平板灭菌、倒平板接种接种培养。为获得单菌落，接种培养。为获得单菌落，接种操作前应先将菌液稀释，然后将菌液涂布到培养基平面上即可。操作前应先将菌液稀释，然后将菌液涂布到培养基平面上即可。(4)微生物培养时需将培养皿倒置并放在恒温培养箱中，若不倒置培微生物培养时需将培养皿倒置并放在恒温培养箱中，若不倒置培养，则无法形成单菌落。养，则无法形成单菌落。(5)幽门螺杆菌能将幽门螺杆菌能将14C标记的尿素分解为标记的尿素分解为NH3和和14CO2，故临床上常用，故临床上常用14C呼气试验检测人体内幽门螺杆菌的呼气试验检测人体内幽门螺杆菌的存在。存在。答案答案(1)脲酶红脲酶红(2)D(3)接种涂布单接种涂布单(4)恒温培养箱恒温培养箱无法形成单菌落无法形成单菌落(5)尿素尿素 1从考查内容上看，主要考查微生物的纯化培养操作与从考查内容上看，主要考查微生物的纯化培养操作与应用、传统发酵技术。应用、传统发酵技术。2从考查角度上看，联系生产生活实际考查微生物的计从考查角度上看，联系生产生活实际考查微生物的计数、分离和纯化培养；结合发酵食品制作过程考查传统发酵技数、分离和纯化培养；结合发酵食品制作过程考查传统发酵技术原理及基本操作。术原理及基本操作。3从命题趋势上看，预计从命题趋势上看，预计2013年高考命题仍以对微生物年高考命题仍以对微生物培养与应用考查为热点，主要是和生产生活实际相联系或与实培养与应用考查为热点，主要是和生产生活实际相联系或与实验结合对实验原理、实验操作进行综合命题考查。验结合对实验原理、实验操作进行综合命题考查。例例1(2012青岛调研青岛调研)在农田土壤的表层自生固氮菌较多，在农田土壤的表层自生固氮菌较多，用表层土制成的稀泥浆接种到特制的培养基上培养，可将自生用表层土制成的稀泥浆接种到特制的培养基上培养，可将自生固氮菌与其他细菌分开，对培养基的要求是固氮菌与其他细菌分开，对培养基的要求是()加抗生素加抗生素不加抗生素不加抗生素加氮素加氮素不加氮素不加氮素加葡萄糖加葡萄糖不加葡萄糖不加葡萄糖37恒温箱中培养恒温箱中培养2830温度下培养温度下培养 AB C D微生物的营养微生物的营养 解析解析细菌对抗生素敏感，故培养基中应不加抗生素；细菌对抗生素敏感，故培养基中应不加抗生素；自生固氮菌有固氮功能，故培养基中不需要加氮素；自生固自生固氮菌有固氮功能，故培养基中不需要加氮素；自生固氮菌是异养的，应该加葡萄糖，其生长繁殖的适宜温度是氮菌是异养的，应该加葡萄糖，其生长繁殖的适宜温度是2830。答案答案C 1微生物的营养微生物的营养 (1)微生物生长所需五大营养素即碳源、氮源、生长因子、微生物生长所需五大营养素即碳源、氮源、生长因子、水和无机盐。水和无机盐。(2)微生物最常用的碳源是糖类，尤其是葡萄糖；最常用微生物最常用的碳源是糖类，尤其是葡萄糖；最常用的氮源是铵盐、硝酸盐。的氮源是铵盐、硝酸盐。(3)对异养微生物来说，含对异养微生物来说，含C、H、O、N的有机物既是碳的有机物既是碳源、又是氮源。源、又是氮源。2培养基的类型及作用培养基的类型及作用划分标划分标准准培养基种类培养基种类特点特点用途用途物理性物理性质质液体培养基液体培养基不加凝固剂不加凝固剂工业生产工业生产半固体培养基半固体培养基加凝固剂，如琼脂加凝固剂，如琼脂观察微生物的运动、分类、鉴定观察微生物的运动、分类、鉴定固体培养基固体培养基微生物分离、鉴定、活菌计数、保微生物分离、鉴定、活菌计数、保藏菌种藏菌种化学成化学成分分天然培养基天然培养基含化学成分不明确的天含化学成分不明确的天然物质然物质工业生产工业生产合成培养基合成培养基培养基成分明确培养基成分明确(用化学用化学成分已知的化学物质配成分已知的化学物质配成成)分类、鉴别分类、鉴别用途用途选择培养基选择培养基允许特定种类的微生物允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止生长，同时抑制或阻止其他微生物生长其他微生物生长培养、分离出特定微生物，如培养培养、分离出特定微生物，如培养酵母菌和霉菌，可在培养基中加入酵母菌和霉菌，可在培养基中加入青霉素；培养金黄色葡萄球菌，可青霉素；培养金黄色葡萄球菌，可在培养基中加入高浓度食盐在培养基中加入高浓度食盐鉴别培养基鉴别培养基根据微生物的代谢特点，根据微生物的代谢特点，在培养基中加入某种指在培养基中加入某种指示剂或化学药品示剂或化学药品鉴别不同种类的微生物，如用伊鉴别不同种类的微生物，如用伊红红美蓝培养基鉴别饮用水或乳制美蓝培养基鉴别饮用水或乳制品中是否有大肠杆菌品中是否有大肠杆菌(若有，菌落若有，菌落呈深紫色，并带有金属光泽呈深紫色，并带有金属光泽)1下表为某培养基的配方，有关叙述正确的是下表为某培养基的配方，有关叙述正确的是()成分成分牛肉牛肉膏膏葡萄葡萄糖糖K2HPO4伊伊红红美蓝美蓝青霉青霉素素琼琼脂脂蒸馏蒸馏水水含量含量10 g10 g2 g0.4 g0.065 g1万万单位单位适适量量1 000 mLA能在此培养基上生长的大肠杆菌，拟核上有抗青霉素的能在此培养基上生长的大肠杆菌，拟核上有抗青霉素的 基因基因B此培养液是天然鉴别培养基此培养液是天然鉴别培养基C此培养基可以用来检测自来水中细菌含量是否符合饮用此培养基可以用来检测自来水中细菌含量是否符合饮用 水标准水标准D此培养基可以用于选育转基因大肠杆菌菌种的基因工程此培养基可以用于选育转基因大肠杆菌菌种的基因工程 的操作过程中的操作过程中解析：解析：选选 此表表示鉴定大肠杆菌的合成培养基；能在此表表示鉴定大肠杆菌的合成培养基；能在此培养基上生长的大肠杆菌，其抗性基因位于质粒上。此培养基上生长的大肠杆菌，其抗性基因位于质粒上。D2判断选择培养基是否起到了选择作用需要设置的对照是判断选择培养基是否起到了选择作用需要设置的对照是()A未接种的选择培养基未接种的选择培养基B未接种的牛肉膏蛋白胨培养基未接种的牛肉膏蛋白胨培养基C接种了的牛肉膏蛋白胨培养基接种了的牛肉膏蛋白胨培养基D接种了的选择培养基接种了的选择培养基解析：解析：选选 将菌液稀释相同的倍数后接种，在牛肉膏蛋将菌液稀释相同的倍数后接种，在牛肉膏蛋白胨培养基上生长的菌落数目应明显多于选择培养基上的白胨培养基上生长的菌落数目应明显多于选择培养基上的数目，因此应以牛肉膏蛋白胨培养基作为对照。对照遵循数目，因此应以牛肉膏蛋白胨培养基作为对照。对照遵循的原则是单一变量原则，所以应与选择培养基一样接种、的原则是单一变量原则，所以应与选择培养基一样接种、培养。培养。C 例例2 请回答下列有关微生物的一些问题。请回答下列有关微生物的一些问题。(1)微生物的分布：微生物主要分布在富含微生物的分布：微生物主要分布在富含_的土的土壤表层；不同微生物对壤表层；不同微生物对pH的要求不同，细菌常生活在酸碱度的要求不同，细菌常生活在酸碱度_的潮湿土壤中。的潮湿土壤中。(2)微生物的消毒和灭菌：在菊花组织培养中，对外植体微生物的消毒和灭菌：在菊花组织培养中，对外植体常用酒精和常用酒精和_进行消毒。在微生物培养中，对培养基进行消毒。在微生物培养中，对培养基常用常用_方法进行灭菌。静止空气中的细菌可用紫外线方法进行灭菌。静止空气中的细菌可用紫外线杀灭，其原因是紫外线能使蛋白质变性，还能杀灭，其原因是紫外线能使蛋白质变性，还能_。如果要检测灭菌是否彻底，可以采用的方法是：如果要检测灭菌是否彻底，可以采用的方法是：_。微生物培养的基本技术微生物培养的基本技术 (3)微生物的应用：在葡萄酒的自然发酵过程中，运用吸附微生物的应用：在葡萄酒的自然发酵过程中，运用吸附在葡萄皮上的野生酵母菌发酵产生酒精，请写出该过程的化学在葡萄皮上的野生酵母菌发酵产生酒精，请写出该过程的化学反应式：反应式：_。在果醋制作时，运用醋。在果醋制作时，运用醋酸菌在酸菌在_和糖源充足时，将糖分解成醋酸。和糖源充足时，将糖分解成醋酸。(4)微生物的接种：微生物接种的方法很多，最常用的是微生物的接种：微生物接种的方法很多，最常用的是_和和_。(5)微生物的计数：根据培养基上出现的菌落数目和稀释倍微生物的计数：根据培养基上出现的菌落数目和稀释倍数计算得出细菌数目往往比实际的数目低，原因是数计算得出细菌数目往往比实际的数目低，原因是_。(6)微生物的鉴定：为检测尿素分解菌的存在与否，在以尿微生物的鉴定：为检测尿素分解菌的存在与否，在以尿素为唯一氮源的素为唯一氮源的_(填填“选择选择”或或“鉴别鉴别”)培养基中加入培养基中加入_指示剂，如果存在尿素分解菌，则指示剂将变指示剂，如果存在尿素分解菌，则指示剂将变_色。色。解析解析(1)微生物主要分布在有机质丰富的土壤表层，微生物主要分布在有机质丰富的土壤表层，细菌常生活在酸碱度接近中性的潮湿土壤中。细菌常生活在酸碱度接近中性的潮湿土壤中。(2)植物组织培植物组织培养时，对外植体常用酒精和氯化汞消毒，对培养基常用高压养时，对外植体常用酒精和氯化汞消毒，对培养基常用高压蒸汽灭菌法灭菌；紫外线能使蛋白质变性，还能损伤蒸汽灭菌法灭菌；紫外线能使蛋白质变性，还能损伤DNA的的结构；可通过在适宜的温度下放置灭菌过的培养基看其是否结构；可通过在适宜的温度下放置灭菌过的培养基看其是否有菌落产生来确定培养基灭菌是否彻底。有菌落产生来确定培养基灭菌是否彻底。(3)醋酸菌为需氧型醋酸菌为需氧型生物。生物。(4)最常用的微生物接种方法有平板划线法和稀释涂布最常用的微生物接种方法有平板划线法和稀释涂布平板法。平板法。(5)因一个菌落可由多个连在一起的细菌形成，所以因一个菌落可由多个连在一起的细菌形成，所以计算得出的细菌数一般低于实际数目。计算得出的细菌数一般低于实际数目。(6)用选择培养基筛选用选择培养基筛选目的菌，加入酚红指示剂检测尿素分解菌，若存在尿素分解目的菌，加入酚红指示剂检测尿素分解菌，若存在尿素分解菌，指示剂变红色。菌，指示剂变红色。1微生物培养技术中的消毒和灭菌微生物培养技术中的消毒和灭菌消毒消毒灭菌灭菌区区别别使用使用手段手段较为温和的物理或化学较为温和的物理或化学方法方法强烈的理化因素强烈的理化因素结果结果杀死表面或内部的部分杀死表面或内部的部分微生物微生物(不包括芽孢和孢不包括芽孢和孢子子)杀死包括芽孢和孢子在杀死包括芽孢和孢子在内的所有微生物内的所有微生物常用常用方法方法煮沸消毒法、化学药剂煮沸消毒法、化学药剂消毒法、巴氏消毒法、消毒法、巴氏消毒法、紫外线消毒法等紫外线消毒法等灼烧灭菌法、干热灭菌灼烧灭菌法、干热灭菌法、高压蒸汽灭菌法等法、高压蒸汽灭菌法等联系联系都借助理化性质，营造微生物难以生存的不良都借助理化性质，营造微生物难以生存的不良环境；环境；作用实质都是通过使蛋白质变性来抑制作用实质都是通过使蛋白质变性来抑制微生物生命活动或杀死微生物微生物生命活动或杀死微生物 2微生物纯化培养的接种方法微生物纯化培养的接种方法 (1)平板划线操作：平板划线操作：平板划线法通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划平板划线法通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。平板划线操作的注意事项：平板划线操作的注意事项：a每次划线之前都需要灼烧接种环灭菌。每次划线之前都需要灼烧接种环灭菌。b灼烧接种环之后，要冷却后才能伸入菌液，以免温度灼烧接种环之后，要冷却后才能伸入菌液，以免温度太高杀死菌种。太高杀死菌种。c划线时最后一区域不要与第一区域相连。划线时最后一区域不要与第一区域相连。d划线用力大小要适当，防止用力过大将培养基划破。划线用力大小要适当，防止用力过大将培养基划破。(3)稀释涂布平板法：先将菌液进行一系列梯度稀释后稀释涂布平板法：先将菌液进行一系列梯度稀释后涂布平板，在稀释度足够高的菌液里，聚集在一起的微生物涂布平板，在稀释度足够高的菌液里，聚集在一起的微生物将被分散到培养基的表面，从而在培养基表面形成单个菌落。将被分散到培养基的表面，从而在培养基表面形成单个菌落。如下图：如下图：3某学者欲研究被石油污染过的土壤中细菌数量，并从中筛某学者欲研究被石油污染过的土壤中细菌数量，并从中筛选出能分解石油的细菌。下列操作错误的是选出能分解石油的细菌。下列操作错误的是()A利用平板划线法对细菌进行计数利用平板划线法对细菌进行计数B以石油为唯一碳源的培养基筛选以石油为唯一碳源的培养基筛选C采用稀释涂布平板法分离菌种采用稀释涂布平板法分离菌种D称取和稀释土壤时应在火焰旁称取和稀释土壤时应在火焰旁解析：解析：选选 平板划线法能对细菌分离纯化，但不能对细菌平板划线法能对细菌分离纯化，但不能对细菌进行计数，而稀释涂布平板法可以分离菌种并进行计数。进行计数，而稀释涂布平板法可以分离菌种并进行计数。A4下图甲、乙是微生物接种常用的两种方法，请回答相关问题：下图甲、乙是微生物接种常用的两种方法，请回答相关问题：(1)图甲是利用图甲是利用_法进行微生物接种，图乙是利用法进行微生物接种，图乙是利用_法进行微生物接种。这两种方法所用的接种工具法进行微生物接种。这两种方法所用的接种工具分别是分别是_和和_；对这两种接种工具进行灭菌；对这两种接种工具进行灭菌和消毒的方法依次是和消毒的方法依次是_和酒精消毒。和酒精消毒。(2)接种操作为什么一定要在火焰附近进行？接种操作为什么一定要在火焰附近进行？_。(3)下图是采用上述接种方法接种后培养的效果图解，其接下图是采用上述接种方法接种后培养的效果图解，其接种方法是种方法是_(填填“图甲图甲”或或“图乙图乙”)。解析：解析：图甲和图乙分别是平板划线法和稀释涂布平板法，这图甲和图乙分别是平板划线法和稀释涂布平板法，这两种方法所用的接种工具分别是接种环和涂布器。由于在酒两种方法所用的接种工具分别是接种环和涂布器。由于在酒精灯火焰附近存在着无菌区域，因此接种常在火焰附近进行。精灯火焰附近存在着无菌区域，因此接种常在火焰附近进行。在微生物培养过程中会产生水，对微生物的生长造成影响，在微生物培养过程中会产生水，对微生物的生长造成影响，故需要倒置培养。故需要倒置培养。答案：答案：(1)平板划线稀释涂布平板接种环涂布器灼烧平板划线稀释涂布平板接种环涂布器灼烧灭菌灭菌(2)火焰附近存在着无菌区域火焰附近存在着无菌区域(3)图乙图乙 例例3(2012海南高考海南高考)回答下列关于腐乳制作的问题：回答下列关于腐乳制作的问题：(1)腐乳是豆腐经微生物发酵后制成的食品。多种微生物腐乳是豆腐经微生物发酵后制成的食品。多种微生物参与了该发酵过程，其中起主要作用的微生物是参与了该发酵过程，其中起主要作用的微生物是_，其产生的蛋白酶可将豆腐中的蛋白质水解为其产生的蛋白酶可将豆腐中的蛋白质水解为_和和_；其产生的其产生的_能将豆腐中的脂肪水解为能将豆腐中的脂肪水解为_和和_。(2)发酵完成后需加盐腌制，加盐还可以抑制发酵完成后需加盐腌制，加盐还可以抑制_生长。生长。(3)腐乳制作的后期可加入由酒和多种香辛料配置而成的卤腐乳制作的后期可加入由酒和多种香辛料配置而成的卤汤。卤汤除具有一定的防腐作用外，还能使腐乳具有独特的汤。卤汤除具有一定的防腐作用外，还能使腐乳具有独特的_。传统发酵技术传统发酵技术 解析解析(1)腐乳制作发酵过程中起作用的微生物有多种，腐乳制作发酵过程中起作用的微生物有多种，如青霉、酵母菌、曲霉、毛霉等，其中起主要作用的是毛霉。如青霉、酵母菌、曲霉、毛霉等，其中起主要作用的是毛霉。毛霉产生的蛋白酶可将豆腐中的蛋白质水解成多肽和氨基酸，毛霉产生的蛋白酶可将豆腐中的蛋白质水解成多肽和氨基酸，产生的脂肪酶能够将豆腐中的脂肪水解为甘油和脂肪酸。产生的脂肪酶能够将豆腐中的脂肪水解为甘油和脂肪酸。(2)发酵过程中加盐腌制，不仅可以调制风味，而且能够抑发酵过程中加盐腌制，不仅可以调制风味，而且能够抑制杂菌等其他微生物的生长。制杂菌等其他微生物的生长。(3)腐乳制作后期加入卤汤，卤汤不仅可以防腐，还可以使腐乳制作后期加入卤汤，卤汤不仅可以防腐，还可以使腐乳具有独特的风味腐乳具有独特的风味(或香味或香味)。答案答案(1)毛霉毛霉(多多)肽氨基酸脂肪酶甘油脂肪酸肽氨基酸脂肪酶甘油脂肪酸 (2)微生物微生物 (3)风味风味微生物在传统发酵技术中的应用微生物在传统发酵技术中的应用项目项目内容内容果酒和果醋的制作果酒和果醋的制作腐乳制作腐乳制作制作泡菜并检测亚硝酸制作泡菜并检测亚硝酸盐含量盐含量原料选择原料选择新鲜、无烂籽粒葡萄新鲜、无烂籽粒葡萄(或或苹果苹果)豆腐豆腐大白菜、花椰菜等新鲜大白菜、花椰菜等新鲜干净的蔬菜干净的蔬菜实验流程实验流程挑选葡萄挑选葡萄冲洗冲洗榨汁榨汁 酒精发酵酒精发酵 果酒醋酸发酵果酒醋酸发酵 果醋果醋豆腐上长出毛霉豆腐上长出毛霉加盐腌制加盐腌制加卤汤加卤汤装瓶装瓶密封腌制密封腌制制泡菜：选材制泡菜：选材配制盐配制盐水水装坛装坛发酵发酵成品成品测亚硝酸盐含量：配制测亚硝酸盐含量：配制溶液溶液制备标准显色液制备标准显色液制备样品处理液制备样品处理液比比色色操作注意操作注意事项事项材料选择与处理材料选择与处理防防止发酵液污染，控制好止发酵液污染，控制好发酵条件发酵条件材料用量材料用量防止杂菌污染防止杂菌污染控制温度及酒精控制温度及酒精含量含量泡菜坛的选择泡菜坛的选择腌制条件腌制条件(无氧无氧)测定亚硝酸盐含量的测定亚硝酸盐含量的操作操作共同点共同点都是天然的发酵，利用了微生物新陈代谢过程中代谢产物的作用或直都是天然的发酵，利用了微生物新陈代谢过程中代谢产物的作用或直接获取代谢产物接获取代谢产物5小李尝试制作果酒，他将葡萄汁放入已灭菌的发酵装置中小李尝试制作果酒，他将葡萄汁放入已灭菌的发酵装置中进行实验进行实验(如右图如右图)，恰当的做法是，恰当的做法是()A加入适量的醋酸菌加入适量的醋酸菌B一直打开阀一直打开阀b通气通气C一直关紧阀一直关紧阀a，偶尔打开阀，偶尔打开阀b几秒钟几秒钟D把发酵装置放到把发酵装置放到4冰箱中进行实验冰箱中进行实验解析：解析：选选 在该发酵装置中有发酵底物在该发酵装置中有发酵底物(葡萄糖葡萄糖)，但没有，但没有发酵生物发酵生物(酵母菌酵母菌)，故应在装置中放入适量的酵母菌。将阀，故应在装置中放入适量的酵母菌。将阀a一直关紧是为了防止氧气进入发酵装置；偶尔打开阀一直关紧是为了防止氧气进入发酵装置；偶尔打开阀b几秒几秒钟，是为了排出发酵产生的过多二氧化碳。如果一直打开阀钟，是为了排出发酵产生的过多二氧化碳。如果一直打开阀b通气，则可使氧气进入发酵装置而影响发酵。酵母菌发酵通气，则可使氧气进入发酵装置而影响发酵。酵母菌发酵需要的最适温度在需要的最适温度在1825，4时温度太低，将影响发时温度太低，将影响发酵的速率。酵的速率。C6下列与果酒、果醋和腐乳制作相关的叙述，正确的是下列与果酒、果醋和腐乳制作相关的叙述，正确的是()A腐乳制作所需要的适宜温度最高腐乳制作所需要的适宜温度最高B果醋发酵包括无氧发酵和有氧发酵果醋发酵包括无氧发酵和有氧发酵C使用的菌种分别是酵母菌、醋酸菌、乳酸菌使用的菌种分别是酵母菌、醋酸菌、乳酸菌D使用的菌种都具有细胞壁、核糖体、使用的菌种都具有细胞壁、核糖体、DNA 和和 RNA解析：解析：选选 果醋制作所需要的适宜温度最高，为果醋制作所需要的适宜温度最高，为3035；果醋制作所用的菌种果醋制作所用的菌种(醋酸菌醋酸菌)为好氧细菌，只进行有氧呼吸；为好氧细菌，只进行有氧呼吸；腐乳制作所用的菌种主要是毛霉；酵母菌、醋酸菌、毛霉等腐乳制作所用的菌种主要是毛霉；酵母菌、醋酸菌、毛霉等菌种都具有细胞壁，都既有菌种都具有细胞壁，都既有DNA又有又有RNA，细胞中都有核，细胞中都有核糖体。糖体。D一、微生物的营养一、微生物的营养营养要素营养要素来源来源功能功能碳碳源源无机无机碳源碳源CO2、NaHCO3、CaCO3等含碳无机物等含碳无机物构成细胞和合成构成细胞和合成一些代谢产物一些代谢产物有些既是碳源又有些既是碳源又是异养微生物的能是异养微生物的能源源有机有机碳源碳源糖、脂肪、蛋白质、有糖、脂肪、蛋白质、有机酸、石油、花生粉饼机酸、石油、花生粉饼等等氮氮源源无机无机氮源氮源NH3、铵盐、硝酸盐、铵盐、硝酸盐、N2等等合成蛋白质、核酸合成蛋白质、核酸及含氮的代谢产物及含氮的代谢产物有机有机氮源氮源牛肉膏、蛋白胨、核酸、牛肉膏、蛋白胨、核酸、尿素、氨基酸等尿素、氨基酸等纤维素分解菌纤维素分解菌 即：可根据是否产生透明圈来筛选纤维素分解菌。即：可根据是否产生透明圈来筛选纤维素分解菌。(2)流程：土壤取样流程：土壤取样选择培养选择培养梯度稀释梯度稀释涂布平板涂布平板挑选菌落。挑选菌落。3鉴定方法鉴定方法 鉴定分解尿素鉴定分解尿素的细菌的细菌含酚红指示剂的尿素为唯一氮源的培养基含酚红指示剂的尿素为唯一氮源的培养基细菌细菌指示剂变红，则该菌能分解尿素指示剂变红，则该菌能分解尿素鉴定纤维素分鉴定纤维素分解菌解菌