SYBR一步法荧光定量PCR试剂盒使用说明书

北京厚生博泰科技有限公司Beijing Hooseen Biotech Co., Ltd.步法实时RTPCR检测试剂盒（SYBR 步法荧光定量PCR试剂盒）（目录号 HS0614）产品包装试剂盒组成包装2 x SYBR One Step RT-qPCR Buffer (with ROX)1.4 mlSuper Enzyme Mix50 ulDEPC-HQ2 ml使用说明1份保存条件-20 C避光保存。产品简介本产品是一步法Real-Time qRT-PCR专用试剂盒。所含的SYBR Green I荧光染料可 以与所有的双链DNA相结合，使该产品可以用于多种不同靶序列的检测而不需合成特异性 标记探针。使用本产品进行Real Time qRT-PCR反应，逆转录和定量PCR在同一反应体 系中进行，反应过程中无需添加试剂，无需打开管盖，避免了污染的同时提高了实验效率。 本试剂盒中包含全新高效逆转录酶，具有与RNA高亲和性的特点，能通读GC含量高、二 级结构复杂的RNA模板；所包含的经化学修饰的热启动DNA聚合酶最大限度的减少PCR 扩增全程中的非特异性扩增产物的产生，极大提高了荧光定量PCR反应的精确性；所包含 的缓冲系统使以上两种酶同时发挥最大的功效，提高效率。所含的ROX染料调节PCR反 应过程中管与管之间的加样误差，适用于以ROX作为校正染料的所有荧光定量PCR仪。产品特点1. 反转录和PCR在一个反应管中完成，方便快捷，最大限度的避免污染。2. 与RNA具有高亲和性，能通读GC含量高、二级结构复杂的RNA模板。3. 热启动酶有效抑制非特异性扩增，极大提高了荧光定量PCR反应的精确性。产品应用基因表达分析；拷贝数分析。使用方法1. 将 RNA 模板、引物、2 XUltraSYBR One Step RT-qPCR Buffe (r With ROX)、SuperEnzyme Mix和RNase-Free Water溶解并置于冰上备用。2. PCR反应体系：试捌25讥应应休系逹浓度2xUltraSVBR One Step RT-qPCR Buffer ( With ROX 12,5 yForward Primer, 10 |JM0.5 p0.2 pMReverse Prmer . 100,2 pIMSuperEnzms Mix0.5 pRNA lernph 怕X hI10 pg - IDO ngRNSG-Fre-e Waterupto 25 pl注意：通常引物浓度以0.2 uM可以得到较好结果，可以终浓度0.1 0.5 uM乍为设定范围的参考。 扩增效率不高的情况下，可提高引物的浓度；发生非特异性反应时，可降低引物浓度，由此优化反应体系。3. 涡旋震荡混匀，短暂离心，将溶液收集到管底。4. 将热循环仪预热到45C，将PCR管置于热循环仪中，按以下反应条件进行反应。PCR反应条件：歩骤温度吋司反转录45忙10 minPCR预变性5 min 注意 ）建议采用两步法PCR反应程序，若因使用Tm值较低的引物等原因，得不到良好的实验结果时， 可尝试进行三步法PCR扩增，退火温度请以56 C 64的范围作为设定参考。 ）融解曲线分析请以所使用的荧光定量PCR仪推荐的程序进行设定，本说明是以ABI 7500荧光定 量PCR仪为参照设定。 ：走性10 S i卜北-劎个酋环匚45 s躬聊曲统分祈3195CC15 s60cC1 min95CC15 s60cC15 s