摇瓶发酵优化

摇瓶发酵优化正交实验实验方案实验内容：运用实验室摇瓶发酵技术，研究不同的镁盐、钾盐、钠盐及碳源用量对铜绿假单胞菌摇瓶发酵的影响。实验材料：铜绿假单胞菌Pseudomonasaeruginosa仪器设备：超净工作台；高压蒸汽灭菌锅；旋转式摇床；磁力搅拌器；纯水机；三角摇瓶；三角瓶封口膜；塑料培养瓶；1mL和5mL移液枪；酒精灯；电子天平；药匙；1000mL烧杯；玻璃棒等。试剂耗材：蛋白胨；牛肉膏；NaCI；NaNO3；K2HPO4;KH2PO4；MgSO4;CaCI2;KCI；NaCI;酵母粉；大豆油。实验因素和水平：本实验研究镁盐、钾盐、钠盐及碳源用量四个因素及不同用量三个水平。因素水平MgSO4(g/L)KCl(g/L)NaCl(g/L)大豆油（mL）10.111020.2250.330.33100.9L9（34）正交表实验数因素MgSO4KClNaCl大豆油实验结果10.111020.1250.330.13100.940.2150.950.2210060.2310.370.31100.380.3210.990.3350均值1均值2均值3极差具体实验方法：1种子培养基及母液的配制种子培，养基（g/L）:蛋白胨10,牛肉膏10,NaCI5,pH7.0按种子培养基配方配制100mL培养基装入250mL三角烧瓶，塞上瓶塞。（50mL/瓶，2瓶）母液：各1000mL，于试剂瓶中。K2HPO440g/LKH2PO440g/LMgSO420h/LCaCI21g/LKCI10g/L共9个实验，为简便起见，只做2个平行，共18个摇瓶，每个摇瓶装液量30mL，共540mL，考虑到分装时的损耗，可以配600mL含共有成分的培养基。2、器具及种子培养基高压蒸汽灭菌培养皿、接种针和移液管用报纸包好，和配好的种子培养基一起高压蒸汽灭菌，121C,20min.3、菌种的活化将种子培养基分装于塑料培养瓶中，将铜绿假单胞菌从冰箱中取出，在超净工作台上，用接种针接种于种子培养基中，使其活化。4、按预定方案配制培养基发酵培养基（g/L）:NaNO32.5,K2HPO44,KH2PO44,MgSO40.2,CaCl20.1,KCl1,NaCl1,酵母粉1,炸货油5%,pH6.5按发酵培养基的配方，结合正交表，配制相应的发酵培养基各200mL,然后分装于150mL二角瓶中，每瓶30mL。5、发酵培养基的灭菌将三角摇瓶用三角瓶封口膜封好，于121C灭菌20min。6、接种于超净工作台上用移液枪各接种2mL活化的铜绿假单胞菌于各三角瓶中。7、培养将接种好的三角瓶放在旋转式摇床上培养，设定好温度与转速。8、测定4C冰箱保发酵3天后，进行排油圈和表面张力的测试。测定剩下的发酵液收集起来置存备用。9、数据整理和分析用正交设计助手整理数据和作图，得出结论。疑问:1、哪种用量的镁盐、钾盐、钠盐及碳源最适宜于铜绿假单胞菌摇瓶发酵?2、铜绿假单胞菌菌种怎样保存？