牛结核病防治技术规范.doc

牛结核病防治技术规范牛结核病（Bovine Tuberculosis）是由牛结核分枝杆菌（Mycobacterium bovis）引起的一种人兽共患的慢性传染病。世界动物卫生组织（WORLD ORGANIZATION FOR ANIMAL HEALTH，简称OIE）将其列为B类动物疫病，我国将其列为二类动物疫病。 为了预防、控制和净化牛结核病，根据中华人民共和国动物防疫法和其他相关的法律法规，制定本技术规范。 1. 适用范围 本规范适用于中华人民共和国境内一切从事牛、羊、猪、鹿、犬等易感动物的饲养、经营及其产品的生产、经营，以及从事动物防疫活动的单位和个人。 2.诊断 本病依据流行病学、临床症状、病理变化可做出初步诊断。确诊需进一步做病原分离鉴定或免疫学诊断。 2.1 流行特点 本病为人兽共患传染病，其中奶牛最易感，其次为水牛、黄牛、牦牛。结核病患牛是本病传染源，牛结核分枝杆菌随鼻汁、痰液、粪便和乳汁等排出体外，污染饲料、饮水、空气等周围环境。成年牛多因与病牛、病人直接接触，犊牛多因吃了病牛奶而感染。 2.2 临床症状： 潜伏期一般为1045天，有的更长。 通常呈慢性经过。分为以下几种类型： 肺结核：以长期顽固的干咳为特征，且以清晨最明显。患畜容易疲劳，逐渐消瘦，病情严重者可见呼吸困难。 乳房结核：一般先是乳房淋巴节肿大，继而后方乳腺区发生局限性或弥漫性硬结，硬结无热无痛，表面凹凸不平。泌乳量下降，乳汁变稀，严重时乳腺萎缩，泌乳停止。 肠结核：消瘦和持续下痢或与便秘交替出现，粪便常带血或脓汁。 2.3 病理变化： 病变是在肺脏形成特异性白色或黄白色结节。结节大小不一，切面干酪样坏死或钙化，有时坏死组织溶解和软化，排出后形成空洞。胸膜和肺膜可发生密集的结核结节，形如珍珠状。 2.4 实验室诊断 2.4.1病原分离鉴定 开放性牛结核病诊断，采取病牛的病灶、痰、尿、粪便、乳及其它分泌物样品，作抹片或集菌处理（见附件一）后抹片，用抗酸染色法染色镜检，以及分离培养和动物接种等。2.4.2结核菌素皮内变态反应试验 牛型提纯结核菌素皮内变态反应试验（见附件二） 3疫情报告 3.1 任何单位和个人发现患有本病或者疑似本病的动物，都应当及时向当地动物防疫监督机构报告。 3.2 当地动物防疫监督机构接到疫情报告后，按动物疫情报告管理办法及有关规定及时上报。 4疫情处理 当发现牛结核病时要按下列要求处理： 4.1 扑杀病牛和阳性牛. 4.2 划定疫点、疫区、受威胁区 疫点：是指患病动物的同群畜所在的畜场（户）或其他有关屠宰、经营单位。 疫区：是指以疫点为中心，半径35公里范围内的区域。疫区划分时注意考虑当地的饲养环境和天然屏障（如河流、山脉等）。 受威胁区：是指疫区外顺延30公里范围内的区域。 4.3 封锁 呈暴发流行时（一个乡镇、场10天内检出阳性或发病10头以上），要对疫区实施封锁。在封锁期间，禁止染疫和疑似染疫动物、易感动物出入疫区疫区周围设置警示标志交通要道建立临时性检疫消毒站，对进出人员、车辆进行消毒；停止疫区内易感动物及其产品的交易活动；对易感动物实行圈养或指定地点放养，役用动物限制在疫区内使役。4.4 隔离 可采用圈养和固定草场放牧方式,对病畜同群畜实施隔离。 隔离用草场，应远离交通要道、居民点或人畜密集的地区，场地周围最好有自然屏障或人工栅栏。 4.5 无害化处理 病死和扑杀的病畜，要采取焚烧或/和深埋等方式无害化处理。 4.6 检测 疫区和受威胁区的全部牛只进行检测，每3个月检测一次，若连续两次检测全部阴性，则转入正常监测。 4.7 消毒 饲养场的金属设施、设备等可采取火焰、蒸熏等方式消毒；饲养场的圈舍、场地、车辆等可选用氯制剂、酚制剂等消毒剂喷雾消毒。如10%漂白粉、1030%石灰乳、13%来苏儿、0.3%新诺灵等有效消毒药；墙壁可用20%生石灰乳粉刷；对饲养用具、牛栏（床）等以3%苛性钠溶液、35%来苏儿溶液进行洗刷消毒26 小时；家畜运动场可在除去杂草后，用2%苛性钠溶液或生石灰进行消毒；饲养场的饲料、垫料等可采取深埋发酵或焚烧处理；污染的粪便应堆积在距离牛舍较远的地方，采取堆积密封发酵方式进行生物热发酵消毒。 4.8 封锁的解除 封锁的疫区内最后1头染疫动物被扑杀之后，经45天以上监测，没有发现新病例；并对所污染场所、设施设备和受污染的其他物品彻底消毒后，经动物防疫监督机构检查合格后，由原发布封锁令的机关解除封锁。 5. 预防与控制 采取“监测、检疫、扑杀、消毒和净化”相结合的综合性防治原则。 5.1 检疫 从异地引进种牛、奶牛时，须经当地经动物防疫监督机构的检疫，检疫合格并签发有效检疫证明后方可引进。入场后，隔离、观察45天以上，再经牛结核病皮内变态反应试验阴性者，方可混群饲养。如发现阳性反应牛，应立即扑杀。 5.2 监测 牛结核病净化群每年春秋各进行1次结核病监测，按种牛、奶牛100%、规模场的肉牛10%、其他牛5%、疑似病牛100%的比例监测。如在牛结核病净化群中（包括犊牛群）检出阳性反应牛时，应及时扑杀阳性牛，其他牛按假定健康群处理。初生犊牛，应于42日龄时，用牛结核病皮内变态反应试验进行第1次监测。 凡在奶牛场内饲养的其它牲畜，也要进行结核病监测。牛奶必须具有牛结核病净化场（群）监测合格证明方可出售。 5.3 人员 对牛场内工作人员，特别是奶牛场的职员，每年定期进行体格检查。对发现患结核病的工作人员，应及时调离岗位，隔离治疗。工作人员的工作服、用具要保持清洁，经常清洗消毒，不得带出牛舍。 5.4 环境 牛饲养场生产区应与生活区隔离，奶牛场内不应饲养猫、狗、猪、鸡、鸭等动物，并应禁止其它动物出入。消灭鼠、蝇等传播媒介，以免传播病原。 5.5防疫监督 当地动物防疫监督机构要对辖区内实施耳标编号管理，并为辖区内牛建档，记录结核病监测结果及牛流通、检疫等情况，同时对实施监测的奶牛发放奶牛档案卡（见附件二），实行一牛一卡，如实记录牛结核病监测结果。 5.5.1 对牛结核病监测合格的奶牛场，由当地动物防疫监督机构核发奶牛场（户）结核病监测合格证，该证有效期1年。当地动物防疫监督机构对取得奶牛场（户）结核病监测合格证的场（户）要及时备案，并向同级卫生防疫部门、相关牛奶收购企业通报。5.5.2 鲜奶收购点（站）需凭奶牛场（户）牛结核病监测合格证收购鲜奶，严禁收购无证场（户）的鲜奶。 5.6净化措施 凡被确诊为结核病牛的牛群（场），为牛结核病污染群（场），均应进行牛结核病净化。 5.6.1 结核阳性牛的处理 凡属患结核病死亡或淘汰的牛，应在动物防疫监督人员监督下，进行扑杀，尸体进行焚烧、深埋等无害化处理。 5.6.2牛结核病净化群（场）的建立 阳性牛群应用提纯牛结核菌素皮内变态反应进行反复监测，每次监测间隔6个月，发现阳性牛及时扑杀，并按照4.3、4.4、4.5规定处理。健康牛群的犊牛除隔离饲养外，还应于42日龄时进行第一次监测，100120日龄时，进行第二次监测。假定健康牛群连续两次以上监测结果均阴性时，可认为是牛结核病净化群。疑似反应者，于3045日后进行复检，复检为阳性牛按4.5规定处理复检3次，每次间隔3045天后，结果仍为可疑反应者，视同阳性牛处理。 5.6.3 隔离 疑似结核病牛或牛结核菌素皮内变态反应可疑畜需隔离复检。凡调进的并有调出地动物防疫监督机构检疫证明的牛，入场后进行隔离饲养、观察、检疫。隔离牛舍与健康牛舍相隔的距离在50米以上。 5.6.4 消毒 5.6.4.1临时消毒：奶牛群中检出并剔出结核病牛后，有关牛舍、用具及运动场所等按照4.7规定进行紧急性处理. 5.6.4.2定期消毒：每年应进行24次消毒，养牛场至少春秋两季各进行一次。消毒方法同临时消毒。 5.6.4.3经常性消毒：牧场及牛舍出入口处，应设置消毒池，内置35%来苏儿溶液或生石灰粉等。消毒药要定期更换，以保证一定的药效。牛舍内的一切用具应定期消毒产房每月进行一次大消毒，分娩室在临产牛生产前及分娩后各进行一次消毒。 6.5 控制、净化标准 （一）县（市、区）净化标准 1、全县（市、区）范围内连续两年对牛进行100%监测，提纯牛结核菌素皮内变态反应阳性率0.05%以下。 2、检出的奶牛结核阳性牛全部就地扑杀，并作无害化处理。 具备上述二项标准的为净化县（市、区）。 (二)地（市、盟）净化标准 全地（市、盟）所有县（市、区）达净化标准。 (三)省（区、市）净化标准 全省（区、市）所有县（市、区）达到净化标准。 (四)全国净化标准 全国所有省（区、市）均达到净化标准。 附件1 样品集菌方法 痰液或乳汁等样品，由于含菌量较少，如直接涂片镜检往往是阴性结果。此外，在培养或作动物试验时，常因污染杂菌生长较快，使病原结核分枝杆菌被抑制。下列几种消化浓缩方法可使检验标本中蛋白质溶解、杀灭污染杂菌，而结核分枝杆菌因有蜡质外膜而不死亡，并得到浓缩。 1、硫酸消化法 用46硫酸溶液将痰、尿、粪或病灶组织等按1:5之比例加入混合，然后置37作用12小时，经30004000rpm离心30分钟，弃上清，取沉淀物涂片镜检、培养和接种动物。也可用硫酸消化浓缩后，在沉淀物中加入3氢氧化钠中和，然后抹片镜检、培养和接种动物。 2、氢氧化钠消化法 取氢氧化钠3540g，钾明矾2g，溴麝香草酚兰20mg（预先用60酒精配制成0.4浓度，应用时按比例加入），蒸馏水1000mL混合，即为氢氧化钠消化液。 将被检的痰、尿、粪便或病灶组织按1:5的比例加入氢氧化钠消化液中，混匀后，37作用23小时，然后无菌滴加510盐酸溶液进行中和，使标本的pH调到6.8左右（此时显淡黄绿色），以30004000rpm离心1520分钟，弃上清，取沉淀物涂片镜臁嘌徒又侄铩? 在病料中加入等量的4氢氧化钠溶液，充分振摇510分钟，然后用3000rpm离心1520分钟，弃上清，加1滴酚红指示剂于沉淀物中，用2N盐酸中和至淡红色，然后取沉淀物涂片镜检、培养和接种动物。 在痰液或小脓块中加入等量的1氢氧化钠溶液，充分振摇15分钟，然后用3000rpm离心30分钟，取沉淀物涂片镜检、培养和接种动物。 对痰液的消化浓缩也可采用以下较温和的处理方法：取1N（或4）氢氧化钠水溶液50mL，0.1mol/L柠檬酸钠50mL，N乙酰L半胱氨酸0.5g，混合。取痰一份，加上述溶液2份，作用2448小时，以3000rpm离心15分钟，取沉淀物涂片镜检、培养和接种动物。 3、安替福民（Antiformin）沉淀浓缩法 溶液A：碳酸钠12g、漂白粉8g、蒸馏水80mL。 溶液B：氢氧化钠15g、蒸馏水85mL。 应用时A、B两液等量混合，再用蒸馏水稀释成1520后使用，该溶液须存放于棕色瓶内。 将被检样品置于试管中，加入34倍量的1520安替福民溶液，充分摇匀后37作用1小时，加12倍量的灭菌蒸馏水，摇匀，30004000rpm离心2030分钟，弃上清沉淀物加蒸馏水恢复原量后再离心一次，取沉淀物涂片镜检、培养和接种动物。 附件2 1、牛型提纯结核菌素皮内变态反应试验 出生后20天的牛即可用本试验进行检疫。 1.1操作方法如下： 1.1.1 注射部位及术前处理：将牛只编号后在颈侧中部上1/3处剪毛（或提前一天剃毛），三个月以内的犊牛，也可在肩胛部进行，直径约10cm。用卡尺测量术部中央皮皱厚度，作好记录。注意，术部应无明显的病变。 1.1.2注射剂量：不论大小牛只，一律皮内注射0.1mL（含2000 IU）。即将牛型提纯结核菌素稀释成每毫升含2万IU后，皮内注射0.1mL。冻干PPD稀释后当天用完。 1.1.3注射方法：先以75酒精消毒术部，然后皮内注射定量的牛型结核分枝杆菌PPD，注射后局部应出现小胞，如对注射有疑问时，应另选15cm以外的部位或对侧重作。 1.1.4注射次数和观察反应：皮内注射后经72小时判定，仔细观察局部有无热痛、肿胀等炎性反应，并以卡尺测量皮皱厚度，作好详细记录。对疑似反应牛应立即在另一侧以同一批PPD同一剂量进行第二回皮内注射，再经72小时观察反应结果。对阴性牛和疑似反应牛，于注射后96和120小时再分别观察一次，以防个别牛出现较晚的迟发型变态反应。 1.2 结果判定如下： 阳性反应：局部有明显的炎性反应，皮厚差大于或等于4.0 mm 。 疑似反应：局部炎性反应不明显，皮厚差大于或等于2.0 mm，同时小于4.0 mm 。 阴性反应：无炎性反应。皮厚差在2.0 mm以下。 凡判定为疑似反应的牛只，于第一次检疫60天后进行复检，其结果仍为疑似反应时，经60天再复检，如仍为疑似反应，应判为阳性。 2、牛型提纯结核菌素与禽型提纯结核菌素皮内变态反应对比试验 2.1 操作方法 与牛型提纯结核菌素皮内变态反应试验相同，只是禽型提纯结核菌素的剂量为每头0.1mL，含0.25万IU。即将禽型提纯结核菌素稀释成每毫升含2.5万IU后，皮内注射0.1毫升。 2.2 结果判定如下： 2.2.1对牛型提纯结核菌素的反应为阳性（局部有明显的炎性反应，皮厚差大于或等于4.0 mm），并且对牛型提纯结核菌素的反应大于对禽型提纯结核菌素的反应，二者皮差在2.0 mm以上，判为牛型提纯结核菌素皮内变态反应试验阳性。 对已经定性为牛型结核分枝杆菌感染的牛群。其中即使少数牛的皮差在2.0 mm以下，甚至对牛型提纯结核菌素的反应略小于对禽型提纯结核菌素的反应（反应差小于或等于2.0 mm），只要对牛型提纯结核菌素的反应在2.0 mm以上，也应判定为牛型提纯结核菌素皮内变态反应试验阳性牛。 2.2.2 对禽型提纯结核菌素的反应大于对牛型提纯结核菌素的反应，两者的皮差在2.0 mm以上，判为禽型提纯结核菌素皮内变态反应试验阳性。 对已经定性为副结核分枝杆菌或禽型结核分枝杆菌感染的牛群。其中即使少数牛的皮差在2.0 mm以下，甚至对禽型提纯结核菌素的反应略小于对牛型提纯结核菌素的反应（不超过2.0 mm），只要对禽型提纯结核菌素的反应在2.0 mm以上，也应判为禽型提纯结核菌素皮内变态反应试验阳性牛。 2.3对进出口牛的检疫，以上任何一种菌素皮差超过2mm以上（或局部有一定炎性反应），均认为不合格。