计数培养基适用性检查项目报告.doc

深圳技师学院应用生物系计数培养基适用性检查项目报告 项 目 名 称：计数培养基适用性检查 项 目 完 成 人： 第一大组 班 级： 12生物J4班 指 导 教 师： 余展旺老师 2015年3月27日目 录一、项目介绍及基本信息3二、验证标准5三、项目检验程序6四、计数培养基的适用性检查报告书7五、检验工作日志（进程表）8六、计数培养基的适用性检查备料单11七、计数培养基适用性检查原始记录13八、项目后记25小组成员：许丽銮（组长） 马欢、雷长运、赵萌、宋俊发、刘洁婷、蔡淇因一、项目介绍及基本信息1、 项目介绍培养基质量是影响微生物检验结果的重要环节，计数培养基的促生长能力是微生物限度检查结果判断的重要影响因素。本次验证项目，我们运用专业课上的知识进行学习，整体流程包括课前的标准查阅、制定工作计划，课堂或者课余时间的操作实施，项目结果的记录与报告等。本次验证项目，我们一大组（7人）共同完成，以下是项目任务分析书：项目任务及要求序号任务名称任务要求任务成果备注1接受项目任务明确内容与要求参考资料和文件目录能分析项目要完成的任务完成任务工作流程2查阅相关资料了解能获取资料的途径相关知识查阅培养基适用性验证的相关资料，了解验证关键技术和知识流程图分析项目所涉及的微生物操作技术要点验证方法示意图3制定计划和方案通过多种途径收集两个以上项目案例，进行总结分析工作分工与计划进程表通过案例分析，获得项目工作经验培养基适用性验证方案4实施验证操作备料、灭菌按照验证方案和进程表完成操作并记录纯化、接种、培养观察、记录结果分析和报告验证结果分析和总结补充、纠正工作日志5项目总结和报告学习项目总结的撰写方法撰写验证总结和报告能撰写项目总结制作交流PPT6项目资料汇总与存档学习过程资料的收集以及分类方法文本资料的汇总与装订收集项目资料并存档电子资料的汇总与存档请检单品名营养琼脂批号/编号3102199规格有效期20160427生产单位广东环凯微生物科技有限公司请检部门12生物J4班请检日期2015年3月10日请检人第一大组请检目的计数培养基适用性是否符合要求备注品名营养玫瑰红钠批号/编号3102345规格有效期20160702生产单位广东环凯微生物科技有限公司请检部门12生物J4班请检日期2015年3月10日请检人第一大组请检目的计数培养基适用性是否符合要求备注2、 被检培养基信息1、营养琼脂1）规格/包装规格： 2）批号/编号：31021993）贮藏：拧紧瓶盖，贮存于避光干燥处4）产品标准号：YZB/粤穗0089-20125）有效期： 201604276）生产商：广东环凯微生物科技有限公司7）产品类型： 2、玫瑰红钠琼脂1）规格/包装规格： 2）批号/编号：31023453）贮藏：拧紧瓶盖，贮存于避光干燥处4）产品标准号：Q/HKSJ035）有效期： 201607026）生产商：广东环凯微生物科技有限公司7）产品类型： 二、验证标准2010版中国药典附录XI J：微生物限度检查细菌、霉菌及酵母菌计数计数培养基的适用性检査 细菌、霉菌及酵母菌计数用的培养基应进行培养基的适用性检査，成品培养基、由脱水培养基或按处方配制的培养基均应检査。 菌种 试验用菌株的传代次数不得超过5代（从菌种保藏中心获得的冷冻干燥菌种为第0代），并采用适宜的菌种保藏技术进行保存，以保证试验菌株的生物学特性。 大肠埃希菌（Escherichia coli）CMCC(B) 44 101金黄色葡萄球菌（Sta phylococcus aureus）CMCC(B) 26 003枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）CMCC(B) 63 501白色念珠菌（Candida albicans）CMCC(F) 98 001黑曲霉（Aspergillus niger）CMCC(F) 98 003菌液制备 接种大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌的新鲜培养物至营养肉汤培养基中或营养琼脂培养基上，培养1824小时；接种白色念珠菌的新鲜培养物至改良马丁培养基中或改良马丁琼脂培养基上，培养2448小时。上述培养物用0.9% 无菌氯化钠溶液制成每lml含菌数50100cfu 的菌悬液。接种黑曲霉的新鲜培养物至改良马丁琼脂斜面培养基上，培养57天，加人35ml含0.05%(ml/ml) 聚山梨酯80的0.9% 无菌氯化钠溶液，将孢子洗脱。然后,采用适宜的方法吸出孢子悬液至无菌试管内，用含0.05%(ml/ml)聚山梨酯80的0.9% 无菌氯化钠溶液制成每lml 含孢子数50100cfu的孢子悬液。 菌液制备后若在室温下放置，应在2小时内使用；若保28，可在24小时内使用。黑曲霉孢子悬液可保存在28，在验证过的贮存期内使用。适用性检查 取大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌各50lOOcfu，分别注入无菌平皿中，立即倾注营养琼脂培养基，每株试验菌平行制备2个平皿，混匀，凝固，置3035培养48小时，计数；取白色念珠菌、黑曲霉各50100cfu，分别注人无菌平皿中，立即倾注玫瑰红钠琼脂培养基，每株试验菌平行制备2个平皿，棍匀，凝固，置2328培养72小时，计数；取白色念珠菌50100cfu，注人无菌平皿中，立即倾注酵母浸出粉胨葡萄糖琼脂培养基，平行制备2个平皿，混匀，凝固，置2328；培养72小时，计数。同时，用相应的对照培养基替代被检培养基进行上述试验。结果判定 若被检培养基上的菌落平均数不小于对照培养基上的菌落平均数的70%, 且菌落形态大小与对照培养基上的菌落一致，判该培养基的适用性检查符合规定。三、项目检验程序细菌总数检验程序如图：5种试验菌种复苏菌液制备及计数培养计数，确定含菌数50100cfu 的菌悬液梯度适用性检查1824h4872h30352328培养计算被检培养基菌落平均数与对照培养基菌落平均数的比值报告结果 四、计数培养基的适用性检查报告书营养琼脂&玫瑰红钠琼脂J4327 SORZL327001品名营养琼脂、玫瑰红钠琼脂批号3102199 & 3102345包装规格数量取样日期 2015年3月10日报告日期 2015年3月26日验证依据2010版中国药典附录XI J：微生物限度检查检验项目试验菌种菌落形态回收率%标准规定结论计数培养基的适用性检查大肠埃希菌一致100%被检培养基上的菌落平均数不小于对照培养基上的菌落平均数的70%, 且菌落形态大小与对照培养基上的菌落一致，判该培养基的适用性检查符合规定。符合规定金黄色葡萄球菌一致74%符合规定枯草芽孢杆菌一致100%符合规定白色念珠菌一致107%符合规定黑曲霉一致84%符合规定结论：符合规定备注： 负责人：余展旺 老师 复核人：许丽銮 检验人：小组成员五、检验工作日志（进程表）计数培养基的适用性检查序号日期工作内容操作人备注12015 03 101、接受工作指令，查阅工作依据，制定工作计划，实施检验操作；小组成员2010版中国药典附录XI J：微生物限度检查2、检验操作准备1）菌种复苏的备料2）菌液计数的备料 器皿：清洗、干燥、包扎，灭菌后存放； 培养基/稀释剂：配置、包扎，灭菌后存放。3、试验菌种复苏一代，摇床培养。 分别将试验菌种接种至相应的肉汤中，每100ml培养基接种1ml菌液，150r/min，291摇床振荡培养一天。22015 03 111、试验菌种复苏二代，摇床培养。除黑曲霉外，分别将复苏一次的试验菌种接种至新的相应的肉汤中，每100ml培养基接种1ml菌液，150r/min，291摇床振荡培养一天。32015 03 121、菌液制备及计数1）将各试验菌种新鲜培养物1ml吸至9ml无菌生理盐水中，10倍稀释至10-8的菌悬液备用；2）以无菌吸管吸取适宜3个梯度菌悬液，分别置于2个平皿中，再倒入营养琼脂（细菌）、玫瑰红钠琼脂（霉菌），混匀，待凝固；3）做阴性对照；4）置30培养48h。细菌计数为定量检验，需在第一时间内完成，受污染则导致结果不准确。42015 03 141、菌液计数培养结果观察，点计菌落数；2、阴性异常，分析原因。52015 03 161、菌液计数的备料（第二次）器皿：清洗、干燥、包扎，灭菌后存放； 培养基/稀释剂：配置、包扎，灭菌后存放。62015 03 171、菌液制备及计数（第二次）1）将各试验菌种新鲜培养物1ml吸至9ml无菌生理盐水中，10倍稀释至10-8的菌悬液备用；2）以无菌吸管吸取适宜3个梯度菌悬液，分别置于2个平皿中，再倒入营养琼脂（细菌）、玫瑰红钠琼脂（霉菌），混匀，待凝固；3）做阴性对照；4）置30培养48h。72015 03 191、菌液计数培养结果观察，点计菌落数；注意被检培养基及对照品陪样机的区分与存放。2、适用性检查的备料器皿：清洗、干燥、包扎，灭菌后存放； 培养基/稀释剂：配置、包扎，灭菌后存放。82015 03 201、适用性检查1）制备试验菌菌悬液，取每ml含菌数为50100cfu稀释梯度的菌液1ml置无菌平皿中，细菌倾注营养琼脂培养基，霉菌倾注玫瑰红钠琼脂培养基，每株试验菌平行制备2个平皿；2）倾注相应的对照培养基替代被检培养基进行上述试验；3）分别做阴性对照；4）细菌置3035培养48h，霉菌置2328培养72h。92015 03 221、适用性检查计数培养的结果观察，点计菌落数；2、两种培养基阴性异常，分析原因。102015 03 231、适用性检查的备料（第二次）器皿：清洗、干燥、包扎，灭菌后存放； 培养基/稀释剂：配置、包扎，灭菌后存放。112015 03 241、适用性检查1）制备试验菌菌悬液，取每ml含菌数为50100cfu稀释梯度的菌液1ml置无菌平皿中，细菌倾注营养琼脂培养基，霉菌倾注玫瑰红钠琼脂培养基，每株试验菌平行制备2个平皿；2）倾注相应的对照培养基替代被检培养基进行上述试验；3）分别做阴性对照；4）细菌置3035培养48h，霉菌置2328培养72h。122015 03 261、适用性检查计数培养的结果观察，点计菌落数；2、回收率计算并进行结果判定。132015 03 272015 03 281、数据记录、整理，填写原始记录，报告书等。2、其他培养基适用性检查资料的查阅及理解；3、项目总结及分析。六、计数培养基的适用性检查备料单项目计数培养基的适用性检查检验日期2015年3月10日批号3102199 & 3102345报告日期2015年3月26日/品名规格数量灭菌条件备注第一次菌种复苏刻度吸管1ml/支7180 1h2015 03 10营养肉汤100ml/瓶3121 30min改良马丁液体培养基100ml/瓶2121 30min第二次菌种复苏及菌种备料刻度吸管1ml/支7180 1h2015 03 1020mm EP管10ml/支2121 30min50%甘油支1121 30min营养肉汤100ml/瓶3121 30min改良马丁液体培养基100ml/瓶2121 30min第一次菌液计数空试管支7*5180 1h2015 03 10刻度吸管1ml/支9*5180 1h刻度吸管10ml/支2*5180 1h培养皿套10*5180 1h75%酒精棉球/121 30min0.9%生理盐水100ml/瓶5121 30min营养琼脂250ml/瓶3121 30min玫瑰红钠250ml/瓶2121 30min第二次菌液计数空试管支7*5180 1h2015 03 162015 03 17刻度吸管1ml/支9*5180 1h刻度吸管10ml/支2*5180 1h培养皿套10*5180 1h75%酒精棉球/121 30min0.9%生理盐水100ml/瓶5121 30min营养琼脂250ml/瓶3121 30min玫瑰红钠250ml/瓶2121 30min第一次适用性检查空试管支6*5180 1h2015 03 19刻度吸管1ml/支8*5180 1h刻度吸管10ml/支1*5180 1h培养皿套6*5180 1h75%酒精棉球/121 30min0.9%生理盐水100ml/瓶5121 30min营养琼脂60ml/瓶3121 30min玫瑰红钠60ml/瓶2121 30min对照品营养琼脂60ml/瓶3121 30min对照品玫瑰红钠60ml/瓶2121 30min第二次适用性检查空试管支6*5180 1h2015 03 23刻度吸管1ml/支8*5180 1h刻度吸管10ml/支1*5180 1h培养皿套6*5180 1h75%酒精棉球/121 30min0.9%生理盐水100ml/瓶5121 30min营养琼脂60ml/瓶3121 30min玫瑰红钠60ml/瓶2121 30min对照品营养琼脂60ml/瓶3121 30min对照品玫瑰红钠60ml/瓶2121 30min七、计数培养基适用性检查原始记录（一）试验菌计数结果记录表编号：20150312检验项目试验菌计数消毒时间30min检验日期2015 03 12记录日期2015 03 14检验依据2010版中国药典附录XI J：微生物限度检查细菌总数培养基名称营养琼脂培养温度3035培养时间1824h试验次数10-5稀释10-6稀释10-7稀释阴性备注1231231231大肠埃希菌9298117426743131634654异常金黄色葡萄球菌不可计数成片3463成片2182成片异常枯草芽孢杆菌1721399958成片4470804648异常霉菌总数培养基名称玫瑰红钠培养温度2328培养时间4872h试验次数10-4稀释10-5稀释10-6稀释阴性备注1231231231白色念珠菌不可计数2862512435462563异常黑曲霉-结果阴性结果异常，需查明原因并重新进行检验。结论-备注-复核人：许丽銮 检验人：小组成员编号：20150317检验项目试验菌计数消毒时间30min检验日期2015 03 17记录日期2015 03 19检验依据2010版中国药典附录XI J：微生物限度检查细菌总数培养基名称营养琼脂培养温度3035培养时间1824h试验次数10-5稀释10-6稀释10-7稀释阴性备注1231231231大肠埃希菌264184-106118-1517-0-金黄色葡萄球菌198201-3451-712-0-枯草芽孢杆菌不可计数-109180-20-0-霉菌总数培养基名称玫瑰红钠培养温度2328培养时间4872h试验次数10-4稀释10-5稀释10-6稀释阴性备注1231231231白色念珠菌不可计数-208185-5256-0-黑曲霉1115133543120-结果经检验细菌酵母菌10-6霉菌10-4能用来检验结论符合要求备注复核人：许丽銮 检验人：小组成员（二）菌种传代及试验菌计数结果总表编号：20150319-1试验用菌种菌种传代至菌种接种至稀释用溶液稀释级计数cfu/ml大肠埃希菌CMCC(B)44102第2代营养肉汤培养基0.9%无菌生理盐水10-616金黄色葡萄球菌CMCC(B)26003第2代营养肉汤培养基0.9%无菌生理盐水10-610枯草芽孢杆菌CMCC(B)63501第2代营养肉汤培养基0.9%无菌生理盐水10-654白色念珠菌CMCC(F)98001第2代改良马丁液体培养基0.9%无菌生理盐水10-6黑曲霉CMCC(F)98003第1代改良马丁液体培养基0.9%无菌生理盐水10-4（三）培养基适用性检查结果记录表编号：20150320试验菌株平皿号被检培养基对照培养基回收率%被检培养基与对照培养基菌落形态大小比较大肠埃希菌131成片-一致 不一致22331平均值27-阴性0成片异常金黄色葡萄球菌1136160-一致 不一致2160280平均值148220阴性01异常枯草芽孢杆菌1101105-一致 不一致2120106平均值110.5105.5阴性03异常白色念珠菌16061107.6%一致 不一致26858平均值6459.5阴性00-黑曲霉菌19884%一致 不一致21217平均值10.512.5阴性00-判定标准被检培养基上的菌落平均数不小于对照培养基上的菌落平均数的70%，且菌落形态、大小应与对照培养基上的菌落一致结 论被检培养基符合规定。被检培养基不符合规定。阴性结果异常的试验菌，均需查明原因重新检定。编号：20150324试验菌株平皿号被检培养基对照培养基回收率%被检培养基与对照培养基菌落形态大小比较大肠埃希菌1111491.3%一致 不一致2129平均值10.511.5阴性00-金黄色葡萄球菌1101373.7%一致 不一致246平均值79.5阴性00-枯草芽孢杆菌12118100%一致 不一致21922平均值2020阴性00-白色念珠菌1-一致不一致2-平均值-阴性-黑曲霉菌1-一致不一致2-平均值-阴性-判定标准被检培养基上的菌落平均数不小于对照培养基上的菌落平均数的70%，且菌落形态、大小应与对照培养基上的菌落一致结 论被检培养基符合规定。被检培养基不符合规定。（四）灭菌锅的信息及使用记录仪器名称: 立式压力蒸汽灭菌器 仪器型号:（YXQ-LS-75G） 序号日期灭菌内容灭菌时间&条件/操作人备注12015 03 100.9%生理盐水营养肉汤改良马丁液体培养基营养琼脂培养基玫瑰红钠琼脂50%甘油30min12122015 03 170.9%生理盐水营养琼脂培养基玫瑰红钠琼脂30min12132015 03 190.9%生理盐水营养琼脂培养基玫瑰红钠琼脂对照品营养琼脂对照品玫瑰红钠30min12142015 03 230.9%生理盐水营养琼脂培养基玫瑰红钠琼脂对照品营养琼脂对照品玫瑰红钠30min121仪器名称: 干燥箱 仪器型号:（YXQ-LS-75G）序号日期灭菌内容灭菌时间&条件/操作人备注12015 03 10试管刻度吸管培养皿2h18022015 03 162h18032015 03 192h18042015 03 232h180（五）培养箱的使用记录仪器名称：振荡培养箱 日期培养内容仪器型号BPMJ-250F12015 03 10大肠埃希菌金黄色葡萄球菌枯草芽孢杆菌白色念珠菌黑曲霉培养条件消毒参数操作人培养时间/h培养温度/方式时间/ min242291无无使用时间使用情况开始结束开始结束-正常正常22015 03 11大肠埃希菌金黄色葡萄球菌枯草芽孢杆菌白色念珠菌黑曲霉培养条件消毒参数操作人培养时间/h培养温度/方式时间/ min242291新洁尔灭30使用时间使用情况开始结束开始结束-正常正常仪器名称：生化培养箱日期培养内容仪器型号BPMJ-25F12015 03 12大肠埃希菌金黄色葡萄球菌枯草芽孢杆菌白色念珠菌黑曲霉培养条件消毒参数操作人培养时间/h培养温度/方式时间/ min1824291无无使用时间使用情况开始结束开始结束-正常正常22015 03 17大肠埃希菌金黄色葡萄球菌枯草芽孢杆菌白色念珠菌黑曲霉培养条件消毒参数操作人培养时间/h培养温度/方式时间/ min1824291紫外30使用时间使用情况开始结束开始结束-正常正常32015 03 19大肠埃希菌金黄色葡萄球菌枯草芽孢杆菌白色念珠菌黑曲霉培养条件消毒参数操作人培养时间/h培养温度/方式时间/ min1824291紫外30使用时间使用情况开始结束开始结束-正常正常42015 03 23大肠埃希菌金黄色葡萄球菌枯草芽孢杆菌白色念珠菌黑曲霉培养条件消毒参数操作人培养时间/h培养温度/方式时间/ min1824291紫外30使用时间使用情况开始结束开始结束-正常正常八、项目后记一、结果分析与总结1、由于该项目前期的分析与统筹不够全面，导致第一次备料、第二次备料中有疏忽缺漏，在物品传递过程以及检验过程中没有十分规范进行无菌操作，导致染菌，结果不理想；2、该项目进展中，第一次菌液计数的阴性结果异常，部分菌落菌落蔓延成片，可能存在的原因有：灭菌不彻底，传递过程有污染，操作人员没有严格无菌操作。第二次我们小组在操作过程中有所注意，并在老师的建议下对洁净区以及培养箱进行了灭菌消毒，第二次菌液计数理想。后续第一次适用性检查阴性结果异常，并且对照其他小组结果分析，可能存在的原因有：传递过程有污染，操作人员没有严格无菌操作。第二次适用性检查结果正常。说明操作人员的规范性对结果起了决定性作用；3、存在的不足：1）第一次备料没有考虑到无菌水（100ml/瓶）以及棉球的消毒灭菌，在实训中所用的是洁净区的消毒棉球，可能对结果产生一定影响；2）操作过程不够严谨，不能保证完全的无菌环境；3）对相关资料的查阅不够。二、感想通过本项目的学习，以及最后的分析总结，我们对验证的内容多了几分认识，对一个项目的完整操作多了几分熟练。实践检验理论，也正因为实际动手操作了，我们才更清楚地认识到自己的不足。谢谢老师在实训过程中对我们的指导与考核，让我们在实践中有所获得，有所进步！