蛋白质电泳相关试剂及缓冲液.doc

说明：如下常规试剂配制方法仅供参考一， 蛋白质电泳相关试剂及缓冲液（一）30（W/V）丙烯酰胺溶液组分浓度 30（W/V） Acrylamide配制量 100ml配制方法 1称取下列试剂，置于250ml烧杯中。Acrylamide 29gBIS 1g2向烧杯中加入约80ml的去离子水，充分搅拌溶解；最后定容至100ml，用0.45m滤膜过滤除杂。3置于棕色瓶中4保存。（注意：丙烯酰胺具有强烈的神经毒性，可通过皮肤吸收并具有累积性。配制时应戴手套操作）（二）40（W/V）丙烯酰胺溶液组分浓度 40（W/V） Acrylamide配制量 100ml配制方法 1称取下列试剂，置于200ml烧杯中Acrylamide 38gBIS 2g2向烧杯中加入约80ml的去离子水，充分搅拌溶解；最后定容至100ml，用0.45m滤膜过滤除杂。3置于棕色瓶中4保存。（注意：丙烯酰胺具有强烈的神经毒性，可通过皮肤吸收并具有累积性。配制时应戴手套操作）（三）10（W/V）过硫酸铵组分浓度 10（W/V） 过硫酸铵配制量 10ml配制方法 1称取1g过硫酸铵。2加入10ml的去离子水后搅拌溶解，贮存于4。（注意：10过硫酸铵溶液在4保存能使用两周左右，过期会失去催化效果）（四）5X TrisGlycine Buffer组分浓度 0.125M Tris，1.25M Glycine，0.5（W/V） SDS配制量 1L配制方法 1称取下列试剂，置于1L的烧杯中Tris 15.1gGlycine 94gSDS 5.0g2加入约800ml的去离子水，搅拌溶解。3加入去离子水定容至1L后，室温保存。（五）2X SDSPAGE Loading Buffer组分浓度 100mM TrisHCl （pH 6.8）4（W/V） SDS0.2（W/V） 溴酚蓝20（V/V） 甘油2（W/V） 巯基乙醇配制量 5ml配制方法 1称取下列试剂，置于15ml塑料离心管中 1M TrisHCl （pH 6.8） 0.5mlSDS 0.2g溴酚蓝 10mg甘油 1ml2加入去离子水溶解定容至5ml。3小份分装，0.5ml一管，室温保存。4使用前将25l的巯基乙醇加入混匀。（六）5X SDSPAGE Loading Buffer组分浓度 250mM TrisHCl （pH 6.8）10（W/V） SDS0.5（W/V） 溴酚蓝50（V/V） 甘油5（W/V） 巯基乙醇配制量 5ml配制方法 1称取下列试剂，置于15ml塑料离心管中 1M TrisHCl （pH 6.8） 1.25mlSDS 0.5g溴酚蓝 25mg甘油 2.5ml2加入去离子水溶解定容至5ml。3小份分装，0.5ml一管，室温保存。4使用前将25l的巯基乙醇加入混匀二，核酸电泳相关试剂及缓冲液（一）50X TAE Buffer （pH8.5）组分浓度 2M Tris醋酸，100mM EDTA 配制量 1L配制方法 1称取下列试剂，置于1L烧杯中Tris 242.2gNa2EDTA2H2O 37.2g2加入约800ml的去离子水，充分搅拌溶解，再加入57.1ml的醋酸，充分搅匀3加去离子水将溶液定容至1L后，室温保存。（二）10X TBE Buffer （pH8.3）组分浓度 890mM Tris醋酸，20mM EDTA 配制量 1L配制方法 1称取下列试剂，置于1L烧杯中Tris 108gNa2EDTA2H2O 7.44g硼酸 55g 2加入约800ml的去离子水，充分搅拌溶解。3加去离子水将溶液定容至1L后，室温保存。（三）10X MOPS Buffer组分浓度 200mM MOPS，20mM NaAc，10mM EDTA 配制量 1L配制方法 1称取41.8g MOPS，置于1L烧杯中，加入约800mlDEPC处理水，搅拌溶解。 2用1M NaOH调节pH至7.0。3再加入一下试剂1M NaAc（DEPC处理） 20ml0.5M EDTA（pH8.0）（DEPC处理） 20ml4用DEPC处理水将溶液定容至1L。5用0.45m滤膜过滤除杂，室温避光保存。（注意：溶液见光或高温灭菌后会变黄，仍可以使用，但变黑则不能使用） （四）溴化乙锭（10mg/ml）组分浓度 10mg/ml 溴化乙锭配制量 100ml配制方法 1称取1.0g溴化乙锭，加入到200ml容器中。2加入去离子水100ml，充分搅拌数小时完全溶解溴化乙锭。3将溶液转入棕色瓶，室温避光保存。4溴化乙锭最终工作浓度为0.5g/ml。（五）6X DNA Loading Buffer（单染料）组分浓度 0.25（W/M） 溴酚蓝30（W/M） 甘油配制量 10ml配制方法 1称取下列试剂，置于15ml塑料离心管中 溴酚兰 25mg2向离心管中6ml去离子水，充分搅拌溶解。3加入3ml甘油混匀，最终用去离子水定容至10ml，室温保存。 （六） 6X DNA Loading Buffer（双染料）组分浓度 0.25（m/M） 溴酚蓝0.25（m/M） 二甲苯腈蓝FF30（m/M） 甘油配制量 10ml配制方法 1称取下列试剂，置于15ml塑料离心管中溴酚兰 25mg二甲苯腈蓝FF 25mg2向离心管中6ml去离子水，充分搅拌溶解。3加入3ml甘油混匀，最终用去离子水定容至10ml，室温保存。（七）10X RNA Loading Buffer（单染料）组分浓度 10mM EDTA 0.25（m/M） 溴酚蓝50（m/M） 甘油配制量 10ml配制方法 1称取下列试剂，置于15ml塑料离心管中0.5M EDTA（pH 8.0） 200l溴酚兰 25mg 2向离心管中4mlDEPC处理水，充分搅拌溶解。3加入5ml甘油混匀，用DEPC处理水定容至10ml，室温保存。 （八）10X RNA Loading Buffer（单染料）组分浓度 10mM EDTA 0.25（W/V） 溴酚蓝0.25（W/V） 二甲苯腈蓝FF50（V/V） 甘油配制量 10ml配制方法 1称取下列试剂，置于15ml塑料离心管中0.5M EDTA（pH 8.0） 200l溴酚兰 25mg 二甲苯腈蓝FF 25mg2向离心管中4mlDEPC处理水，充分搅拌溶解。3加入5ml甘油混匀，用DEPC处理水定容至10ml，室温保存。三，分子生物学常用试剂 （一），氨苄青霉素组分浓度 100mg/ml 氨苄青霉素配制量 50ml配制方法 1称取5g Ampicillin置于50ml塑料离心管中。2加入40ml灭菌水，充分混合溶解之后定容至50ml。30.22m滤膜过滤除菌，小份分装（1ml一管）后，置于20保存。（二），卡那霉素组分浓度 50mg/ml卡那霉素配制量 50ml配制方法 1称取2.5g 卡那霉素置于50ml塑料离心管中。2加入40ml灭菌水，充分混合溶解之后定容至50ml。30.22m滤膜过滤除菌，小份分装（1ml一管）后，置于20保存。（三）RNase A组分浓度 10mg/ml RNase A 配制量 50ml配制方法 1取0.5g RNase A置于50ml塑料离心管中。2加入40ml灭菌水，充分混合溶解之后定容至50ml。3100煮沸15min,缓慢冷却至室温，小份分装（1ml一管）后，置于20保存。（四）IPTG组分浓度 24mg/ml IPTG 配制量 50ml配制方法 1称取1.2g IPTG置于50ml塑料离心管中。2加入40ml灭菌水，充分混合溶解之后定容至50ml。3用0.22m滤膜过滤除菌，小份分装（1ml一管）后，置于20保存。（五）X-Gal组分浓度 20mg/ml X-Gal 配制量 50ml配制方法 1称取1g X-Gal置于50ml塑料离心管中。2加入40mlDMF（二甲基甲酰胺），充分混合溶解之后定容至50ml。3小份分装（1ml一管）后，置于20保存。（六）DTT组分浓度 1M DTT 配制量 10ml配制方法 1称取1.54g DTT置于15ml塑料离心管中。2加入8ml的10mM NaAc（pH5.2），充分混合溶解之后定容至10ml。3用0.22m滤膜过滤除菌，小份分装（1ml一管）后，置于20保存。（七）EDTA溶液组分浓度 0.5M EDTA配制量 1L配制方法 1 称取186.1g Na2EDTA2H2O置于1L烧杯中。2 加入800ml的去离子水，置于磁力搅拌器上充分搅拌。3 用NaOH调节调节pH值至8.0（约20gNaOH），当pH接近8.0时， EDTA方可完全溶解，加入去离子水定容至1L。4小份分装后，高温高压灭菌，室温保存。四，于定量PCR检测的SYBRGreen I 核酸染料 采用琼脂糖电泳或聚丙烯酰胺电泳方法检测双链DNA时，SYBRGreen I最灵敏的荧光染料，当其结合到核酸上时，会产生很强的荧光及高量子产额，DNA/SYBRGreen I复合物的量子产额约为0.8。由于与核酸结合后能产生很强的信号，背景极低，并且对核酸的亲和力高，因此SYBR染料可在低浓度条件下使用。SYBRGreen I的最低检出限：20pg DNA（254nm）；60pg DNA（300nm 紫外透射）；此外，SYBRGreen I还可以用于检测寡核苷酸（1-2ng，300nm紫外透射），比EB灵敏20至100倍。 SYBRGreen I用于电泳检测DNA时，既可预染，也可电泳后再进行染色。SYBRGreen I用于琼脂糖电泳检测DNA后，可直接将DNA转移至膜上，进行后续核酸印迹杂交反应。此外，SYBRGreen I与DNA的结合对多种常用的限制性内切酶活性无抑制作用，可直接进行消化或连接。 SYBRGreen I主要用于溶液中DNA的定量，特别适用于荧光定量PCR检测（即实时PCR）。SYBRGreen I原液是无水DMSO配制10,000倍浓缩液。配制工作液时需用TAE、TE或TBE缓冲液。 SYBRGreen I应避光存放，原液保存于20；工作液保存于4，最好存于密封聚丙烯容器。 图示为DNA分子量标准电泳SYBR GREEN I染色图。本品为美国MP公司生产 规格、价格如下：编号品名规格价格PB11141SYBR Green I Loading buffer500ul100PB11142SYBR Green I 10000,DMSO500ul450PB11143SYBR Green I 10000,DMSO100ul800PB11144SYBR Green I 10000,DMSO1ml5400*注：本产品后三种均为原液，第一种为普博实验室所配工作液，只需5-8ul样品加1ul工作液（含溴酚兰）混合即可上样。