蛋白质CD光谱定性解析-总结.doc

蛋白质的圆二色性 (1)由氨基酸通过肽键连接而成； (2)光学活性基团：肽键、芳香氨基酸残基、二硫桥键； (3)蛋白质有多个结构层次，相同的氨基酸序列，因蛋白质的折叠结构不同，基团的光学活性受到影响。蛋白质的圆二色特征 (1)光学活性基团及折叠结构； (2)250nm以下的光谱区，肽键的电子跃迁引起； (3)250300nm光谱区，侧链芳香基团的电子跃迁引起； (4)300700nm光谱区，蛋白质辅基等外在生色基团引起。蛋白质CD光谱的波长范围：远紫外区（185-245nm)、近紫外区（245-320nm)分子构象电子跃迁形式极值的波长*103Deg.cm2/dmol-螺旋（-helix）n221222nm(-)207210nm(-)191nm(+)-38-40-36-407286-折叠（-sheet）n217218nm(-)195197nm(+)-19-212842-转角（-turn）n227nm(-) 弱200205nm(+)192.5(-)强无规卷曲(random coil)230nm(-)215218nm（+）195202nm(-)强-1.612-25-50圆二色谱法分析多肽二级结构圆二色谱是一种特殊的吸收谱，它通过测量蛋白质等生物大分子的圆二色光谱，从而得到生物大分子的二级结构，简单、快捷，广泛应用在蛋白质折叠，蛋白质构象研究，酶动力学等领域。圆二色谱紫外区段（190-240nm），主要生色团是肽链，这一波长范围的CD谱包含了生物大分子主链构象的信息。-螺旋构象的CD谱在222nm、208nm处呈负峰，在190nm附近有一正峰。-折叠构象的CD谱，在217-218nm处有一负峰，在195-198nm处有一强的正峰。无规则卷曲构象的CD谱在198nm附近有一负峰，在220nm附近有一小而宽的正峰。蛋白浓度与使用的光径厚度和测量区域有一定关系，对于测量远紫外区德氨基酸残基微环境的蛋白而言，浓度范围在0.11.0mg/ml，则光径可选择在0.10.2cm之间，溶液体积则在200500ul。而测量近紫外区的蛋白质三级结构，所需浓度要至少比远紫外区的浓10倍方能检测到有效信号，且一般光径的选择均在0.21.0cm，相应的体积也需增加至12mL缓冲液可选50100mmol trs-HCl、PBS等，尽量除去EDTA。远紫外近紫外二硫键一般都是不对称的，它在圆二色性光谱上，于195-200nm和250-260处有谱峰色氨酸、酪氨酸、苯丙氨酸残基的侧链其谱峰在230-310nm之间，色氨酸残基侧链的谱峰一般集中在290- 310nm之间，但有时也会向短波长方向移动从而与酪氨酸残基侧链的谱峰重叠在250-260nm之间，苯环的谱峰又与二流键的谱峰重叠