岛津高效液相色谱仪的规范操作.doc

岛津高效液相色谱仪的规范操作1 目的：明确岛津高效液相色谱仪的规范操作，确保数据的准确性。2 范围：适用于岛津高效液相色谱仪。3 职责：检验人员对此负责。4 操作规程：4.1 系统组成：本系统由2个LC-10ATvp溶剂输送泵（分主/A泵和副/B泵）、手动进样阀、SPD-10Avp紫外-可见检测器、SCL-10AVP系统控制器、CLASS-VP工作站和电脑等组成。4.2 准备4.2.1使用前应根据待检样品的检验方法准备所需的流动相，用合适的0.45m滤膜过滤，超声脱气20min。4.2.2 根据待检样品的需要更换合适的色谱柱（柱进出口位置应与流动相流向一致）和定量环。4.2.3 配制样品和标准溶液（也可在平衡系统时配制），用合适的0.45m滤膜过滤。4.2.4 检查仪器各部件的电源线、数据线和输液管道是否连接正常。4.3 开机4.3.1接通电源，依次开启不间断电源、B泵、A泵、检测器、系统控制器，待泵和检测器自检结束后，打开电脑显示器、主机。4.3.2启动CLASS-VP工作站4.3.2.1确认仪器、系统控制器启动后，打开计算机电源，并从Windows的任务栏中选择Start Programs Chromatography CLASS-VP以打开CLASS-VP菜单窗口。（可以通过桌面上的快捷方式，迅速打开CLASS-VP主菜单）4.3.2.2 在Main Menu 窗口中双击Instrument图标。4.3.2.3 当SCL-10Avp发出蜂鸣声后，说明已建立与计算机之间的连接，Instrument窗口打开。4.3.2.4 启动色谱图监视器4.3.2.5.1 从Windows任务栏中选择Program Chromatography Chromatogram Monitor 以打开 Chromatogram Monitor 窗口。4.3.2.5.2 根据需要设置受监视项的类型和格式。4.3.2.6 启动脱机处理4.3.2.6.1 在 Main Menu 窗口中双击 Offline Processing 图标。4.3.2.6.2 双击为数据采集而设置的仪器名称，以打开仪器进行脱机处理。4.4 CLASS-VP初始系统设置（设置方法缺省参数）4.4.1 单击“New”按钮，并接着单击 New Method 即可初始化方法参数。4.4.2 从Option 选项卡的Method菜单中选择命令，并在对话框中更改每条命令的参数，以选择常用的选项。4.4.3 选择File Method Save as Default 即可将在此处设置的选项保存成缺省参数。4.5 设置分析参数4.5.1 设置LC参数4.5.1.1 设置新的分析参数时，请从通过单击“New”按钮打开的列表中选择New Method，则将加载缺省方法参数，且方法文件名“Untitled.met”将显示在LC Setup Assistant窗口中，通过单击Open按钮即可打开现有的方法文件。4.5.1.2 通过在LC Setup Assistant窗口中单击泵和检测器的图标来配置LC参数。使用时钟图标输入时间程序命令。4.5.1.3 选择 File Method Save as 并输入方法名称。4.5.2 将方法下载到SCL-10Avp：完成创建方法之后，单击下面的图标即可将该方法下载到SCL-10Avp上。下载完成时，出现一个消息窗口，请单击OK。4.5.3 启动仪器控制：激活SCL-10Avp，将液体流量调整到已下载的方法参数。当所有组分稳定时，出现“Ready”指示灯，且状态栏变为绿色。4.5.4 设置方法（斜率）：4.5.4.1 请在检测器的基线稳定之后选择Control Preview Run或单击工具栏上的 “Preview”按钮。4.5.4.2 单击数据图形之后，再在Integration工具栏上单击“SLOPE”按钮，即可从基线测量斜率的参考值。4.5.4.3 单击SLOPE对话框中的Add to table按钮，即可在Method Integration Events 表中记录此设置。4.5.5 设置方法（自定义报告）：单击工具栏上的“Report”按钮，打开Method Custom Report窗口；单击“Open”按钮，然后选择Open Report Temlate 打开一个模板文件。4.5.6 保存已更改的方法：要当前名称保存方法文件，亦即覆盖原来的名称，请从菜单中选择File Method Save 命令，或单击“Save”按钮，然后单击下拉菜单上的Save Method。4.6 平衡系统4.6.1系统的操作4.6.1.1基线检查4.6.1.2 单击LC Setup Assistant 窗口中 “Baseline Check”按钮。4.6.1.3 指定测量噪音和漂移的起始时间和结束时间，对于Noise 的Threshold值，请输入期望的满刻度值的大约1/100；对于Drift的Threshold值，请输入1/10。单击Start开始测量。测量结束后，测得的噪音值和漂移值将出现在Status区域里。4.6.1.4 采集数据之前要检查基线，如果基线检查检查合格，即可立即开始采集。如果Export on Fail 对话框已经选中，并且在指定的Maximum时间内重复进行基线检查仍然失败，则不会进行数据采集。4.6.1.5 启动和关闭单击LC Setup Assistant 窗口中的Startup/Shut Down 按钮。4.6.1.5.1设置启动条件4.6.1.5.1.1 在Startup窗口中指定启动的Date and Time，当达到指定的日期和时间时即可下载指定的方法文件参数。4.6.1.5.1.2 如果此处未指明方法文件，则使用最近使用的方法文件。如果需要，请在Offline Processing窗口中创建一个用于启动的方法文件，并在此处指定它。4.6.1.5.2 设置关闭条件4.6.1.5.2.1在Offline Processing 模式下创建一个用于关闭的方法。通常情况下需要将泵的流速设置到低（或为零），并且需要关闭检测器的灯管，等等。用一个新的文件名将此方法保存到磁盘上。4.6.1.5.2.2 单击Shut Down窗口中“Open”按钮以选择关闭方法文件。另外，如果需要，也可选中或取消选中“Sample Cooler OFF”或“Degasser OFF After Cool Down”选项。4.6.2 等度洗脱方式4.6.2.1 按A泵的pump键，A、B泵将同时启动，pump指示灯亮。用检验方法规定的流动相冲洗系统，一般最少需6倍柱体积的流动相。4.6.2.2 检查各管路连接处是否漏液，如漏液应予以排除。4.6.2.3 观察泵控制屏幕上的压力值，压力波动应不超过1MPa。如超过则可初步判断为柱前管路仍有气泡，按4.5.6操作。4.6.2.4 观察基线变化。如果冲洗至基线漂移0.01mV/min，噪声为 Show Tray。或者，单击LC Setup Assistant窗口中的“Single Run”按钮或工具栏上的Single Run按钮。指定所需的项并单击Start按钮。4.7.2.2 记录自动启动和关闭：单击LC Setup Assistant窗口中的Start/Shut Down按钮。在Start/Shut Down对话框中单击需要记录的Startup、Shut Down和 Startup/Shut Down中的任一按钮并确认或更改设置。单击Submit按钮进入待机对话框，该对话框停留在屏幕上等候执行设置。4.7.2.3终止采集4.7.2.3.1 延长运行时间：选择Control Extend Run并输入添加到运行结束的时间值。要缩短采集时间，请指定一个负值。（对当前采集有效）4.7.2.3.2 紧急停机4.7.2.3.2.1 采集过程中，单击工具栏上的“Stop Run”按钮。接着就会出现一条消息，询问您是否“Abort the current run”,如果单击Yes，当前的数据采集就会终止。4.7.2.3.2.2 如果在随后出现的消息上单击Yes, 剩余的采集就不会再运行，序列就会终止。如果单击No, 剩余的采集就会开始运行。4.8更换流动相并排气泡4.8.1 将A/B管路的吸滤器放入装有准备好的流动相的储液瓶中；4.8.2 逆时针转动A/B泵的排液阀180，打开排液阀；4.8.3 按A/B泵的purge键，pump指示灯亮，泵大约以9.9ml/min的流速冲洗，3min（可设定）后自动停止；4.8.4 将排液阀顺时针旋转到底，关闭排液阀。4.8.5 如管路中仍有气泡，则重复以上操作直至气泡排尽。4.8.6 如按以上方法不能排尽气泡，从柱入口处拆下连接管，放入废液瓶中，设流速为5ml/min，按pump键，冲洗3min后再按pump键停泵，重新接上柱并将流速重设为规定值。4.9 液相色谱日常维护4.9.1 贮液器 清洁是保持流动相贮液器正常使用的关键，要尽可能使用HPLC级的溶剂和试剂含有缓冲盐和非HPLC级的流动相一定要通过0.45m的过滤器以除去其中的微粒物质。改变流动相时应防止交叉污染，陈旧的流动相和用久了的试剂瓶应定期废弃，防止生长微生物和组分改变。贮器内壁定期清洗，里面的附件要经常更换。 4.9.2 泵 泵的密封圈是最易磨损的部件，密封垫圈的损坏可引起系统的许多故障。采取下列措施可以延长垫圈的寿命： A 每天要把泵中的缓冲液体洗干净，防止盐沉积，泵要浸在无缓冲液的溶液或有机溶剂中； B 用HPLC级试剂； C 用烧结不锈钢沉子。要注意防止因泵阻塞造成压力过高而损坏柱塞杆或烧坏电机。 4.9.3. 进样器 停机后要用溶剂冲洗干净进样器内残留的样品和缓冲盐，防止无机盐沉积和样品微粒造成阀转子面磨损或阻塞，严禁用气相色谱那样的尖针头进样。 4.9.4 色谱柱 防止柱性能下降有以下几方面的措施： A 溶剂的化学腐蚀不能太强； B 避免微粒在柱头沉降； C 泵上要装压力限制器，防止压力过高冲击大； D 流动相pH7时用大粒度同种填料作预柱； E 柱头加烧结片不锈钢滤片，需要时加保护柱； 4.9.5. 检测器 要保持检测器清洁，每天用后连同色谱柱柱一起冲洗。提倡不定期用强溶剂反向冲洗检测池（拆开柱）。用脱过气的流动相，防止空气泡卡在池内。检测器灯有一定的寿命，不用时不要打开灯。5.0. 当仪器出现故障时应及时与厂家联系，使用人员不得擅自拆开维修。5.1. 使用人员应经过培训的且熟练操作仪器，每次使用应进行使用登记。