实验三、血清、红细胞制备.ppt

实验三 实验动物的采血方法 动物血清及红细胞的制备方法指导老师 程燕 实验目的 1 学习实验动物不同部位的取无菌采血方法 2 学习动物血清 红细胞的制备 3 观察兔 豚鼠的免疫器官 实验原理 免疫系统由免疫器官 免疫组织 免疫细胞和免疫分子组成 免疫细胞1 固有免疫的组成细胞 吞噬细胞 淋巴器官 树突状细胞 NK细胞 NKT细胞 嗜酸性粒细胞和嗜碱性粒细胞 2 适应性免疫应答细胞 T细胞 B细胞免疫分子1 膜型分子 TCR BCR CD分子 粘附分子 MHC分子 细胞因子受体 2 分泌型分子 免疫球蛋白 补体 细胞因子 实验原理 血液是一种结缔组织 细胞间质 血液系统是各种重要的免疫细胞 免疫分子的载体 也是各种免疫事件发生的场所 组成 1 血浆 血浆蛋白 白蛋白 球蛋白 纤维蛋白原 脂蛋白 无机盐 氧等成分 激素 酶 抗体 细胞代谢产物等 2 血细胞 红血球 白血球 有粒白细胞 中性粒细胞 嗜酸性粒细胞和嗜碱性粒细胞和无粒白细胞 单核细胞和淋巴细胞 血小板 实验原理 实验研究中 要采集实验动物的血液进行检查或分析 故必须掌握血液的正确采集 分离和保存的操作技术 采血方法的选择 主要决定于实验的目的所需血量以及动物种类 用血量较少可刺破组织取毛细血管的血 当需血量较多时可作静脉采血 原则 静脉采血时 若需反复多次 应自远离心脏端开始 以免发生栓塞而影响整条静脉 实验原理 现将采用血方法按动物和部位分别加以介绍 小鼠和大鼠采血方法 割尾采血法 尾静脉穿刺采血 眼眶后静脉丛采血 摘眼球法 断头采血 颈 股 动静脉采血豚鼠采血法 耳缘剪口采血 心脏采血 股动脉采血 背中足静脉取血兔采血法 耳静脉采血 耳中央动脉采血 心脏取血 后肢胫部皮下静脉取血 股动静脉 颈动静脉取血 鸡采血法 翼根静脉采血 心脏采血 颈静脉采血 实验原理 家兔采血方法 1 耳缘静脉采血 家兔固定 将耳缘静脉皮肤上的毛拔去或剪去 75 酒精消毒 用左手食指和中指夹住静脉近心端 以使其血管怒张拇指和小指夹住耳缘部分 以左手无名指和小指放在耳下作垫 待静脉充盈后 右手持注射器使针头由静脉末端刺入 顺血管方向向心端刺约1 1 5cm 放松左手拇指和食指对血管的压迫 右手缓慢抽吸注射器 若注射阻力较大 说明针头没有刺入静脉 应调整针头或重新穿刺 也可以刀片在血管上切一小口 让血自然流出 滴入盛器内 采血完毕 用干棉球按压止血 2 兔心脏穿刺取血 家兔背位固定 在左胸第2 4肋间剪毛一块 用75 酒精和碘伏消毒 然后用5 10ml注射器 在胸骨左缘3 4肋间心尖搏动最明显处作垂直穿刺 注意事项有 动作宜迅速 以缩短在心脏内的留针时间和防止血液凝固 如针头已进入心脏但抽不出血时 应将针头稍微后退一点 在胸腔内针头不应左右摆动以防止伤及心 肺 实验原理 豚鼠采血方法 1 背中足静脉取血固定动物 将动物脚背面用酒精消毒 找出背中足静脉后 以左手的拇指和食指拉住豚鼠的趾端 右手拿的注射针刺入静脉 采血后 用纱布或脱脂棉压迫止血 反复采血时 两后肢交替使用 2 心脏采血通常在胸骨左缘的正中 选心跳最强的部位作穿刺 针头宜稍细长些 以免发生手术后穿刺孔出血 其操作手法详见兔心脏采血 实验动物的采血量 血清的制备 血清的制备 不加抗凝剂无菌静脉采血2ml 37 自然凝固 待血清开始出现后 放冰箱内12小时或24小时 离心分离血清 3000rpm 5 10min 得到的上清液即为血清 小心将上清吸出 注意切勿吸出细胞成分 血浆的制备 需加抗凝剂 抗凝剂 血液 1 9 无菌静脉采血2ml 注射器用抗凝剂润洗 将血液加入到有抗凝剂的离心管中颠倒混匀 离心 3000rpm 5 10min 后所得的上清液即为血浆 注意 血清的保存可以在每50ml血清中加1 硫柳汞水溶液1ml防腐 红细胞及悬液制备 标准红细胞的制备 取全血1ml 加等渗盐水2 3ml 充分摇匀离心沉淀 弃去上清液 然后再加生理盐水2 3ml按上述方法洗涤 共三次 离心去上清 余下的为压积红细胞 红细胞悬液的制备 2 红细胞悬液 压积红细胞2滴 新鲜等渗盐水4ml 5 红细胞悬液 压积红细胞5滴 新鲜等渗盐水4ml 10 红细胞悬液 压积红细胞5滴 新鲜等渗盐水2ml注意 标准红细胞盐水悬液临用前制备 最多存放3天 用柠檬酸葡萄糖溶液 ACD 溶液保存最长可保存1周 实验器材 实验动物 豚鼠 兔实验试剂 血液抗凝剂 1 500u肝素钠注射液 生理盐水实验器材 5ml注射器 一次性离心管 5 10 15ml规格 普通吸管 尖吸管 1ml刻度吸管75 酒精棉球水平离心机 实验步骤 1 用75 酒精棉球消毒采血部位皮肤2 用5ml注射器分别抽取豚鼠或兔静脉血2ml豚鼠采血法 背中足静脉取血心脏采血 兔采血法 耳缘静脉采血心脏采血3 制备血清 红细胞 如上述流程 注意事项 1 采血部位需要进行消毒2 采血用的注射器和试管必须保持清洁干燥 3 注意血清与血浆制备的区别 抗凝剂的使用4 不同规格离心管的使用 实验作业 1 血清 血浆的组分的区别 2 血清 血浆制备方法及操作的区别