斜面培养基的制作方法.doc

斜面培养基制作方法(仅供参考)1斜面培养基斜面培养基（agarslantculture-medium ）：固体培养基（solid culture medium ）的一种形式；制作时应趁热定量分装于试管内，并凝固成斜面的称为斜面培养基，用于菌种扩大转管及菌种保藏。其制作流程图如下图1.图12操作要点 倒入培养基的体积以试管1/4左右为宜，斜面的长度不超过试管的一半，一般用15 150mm 试管，其容量为5ml。2.1定型棉塞 将制作松紧适宜的棉塞塞进试管，然后放进鼓风的干热灭菌箱中于160定型2小时。定型后切记不能立即打开干热灭苗箱，否则棉塞易燃烧。要让其冷至100以下才能打开，接近室温打开更理想。这样制作的棉塞，便于培养基分装及接种，还有利于减少污染。棉塞的制作方法见下图2.图2-a图2-b 2.2分装试管 将配制好的培养基按常规方法分装试管，在此过程中切勿将培养基沾到度管上部。若沾到上部，一是影响试管的外观，二是易污染棉塞。如下图3.图32.3捆扎试管 管口堵入棉塞后7或9支试管扎一捆，棉塞部分用牛皮纸包扎。在包装纸上标明培养基名称，制备组别和姓名、日期等。如下图4.图42.4灭菌将手提式高压锅内的水换成干净的自来水，水按要求加入，不能过多。将捆成把的试管立放装进高压锅的内桶中，在试管顶上放适量棉花使之成凸形，再在上面盖上一层牛皮纸，盖上盖进行高压灭菌，在灭苗放冷气的过程中，要尽量慢，以免减压过快，培养基沸腾，打湿棉塞。冷气放彻底后，待压力达到灭苗要求时，稳压一定时间（培养基种类不同，灭苗时间要求不一样）。当达到灭菌时间后、最好让压力自然下降至零时再打开高压锅。打开高压锅时，移去试管上面的牛皮纸和棉花，然后盖上锅盖，并使锅留一条缝隙，让锅内余热烘干棉塞。2.5摆斜面 试管内的凝聚水主要是高温游离水在培养基凝固过程中遇外界温差过大形成的凝结水和摆放斜面时没有足够的热量烘干棉塞上的水分所致，要摆出高质量的斜面试管，必须在培养基凝固过程中避免温差过大，让其缓慢降温，使高温施离水被培养基所吸收，摆出的斜面才不会出现湿棉塞。具体做法为：首先让培养基在高压锅内把棉塞烘干，待试管冷却至50左右时取出摆斜面，然后覆盖保温物，让其自然冷却至室温。如下图5.图52.6接种 经无菌检验，确认无菌后方可进行接种。接种方法见下图6.图6