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生化各章题目及答案第一章 蛋白质（一）名词解释1 两性离子（dipolarion） 2 必需氨基酸（essential amino acid）3 等电点(isoelectric point,pI) 4 稀有氨基酸(rare amino acid)5 非蛋白质氨基酸(nonprotein amino acid) 6 构型(configuration)7 蛋白质的一级结构(protein primary structure) 8 构象(conformation)9 蛋白质的二级结构(protein secondary structure) 10结构域(domain)11蛋白质的三级结构(protein tertiary structure) 12氢键(hydrogen bond) 13蛋白质的四级结构(protein quaternary structure) 14离子键(ionic bond)15超二级结构(super-secondary structure) 16疏水键(hydrophobic bond) 17范德华力( van der Waals force) 18盐析(salting out)19盐溶(salting in) 20蛋白质的变性(denaturation)21蛋白质的复性(renaturation) 22蛋白质的沉淀作用(precipitation)23凝胶电泳（gel electrophoresis） 24层析（chromatography）(二) 填空题1蛋白质多肽链中的肽键是通过一个氨基酸的_基和另一氨基酸的_基连接而形成的。2大多数蛋白质中氮的含量较恒定，平均为_%，如测得1克样品含氮量为10mg,则蛋白质含量为_%。3在20种氨基酸中，酸性氨基酸有_和_2种，具有羟基的氨基酸是_和_，能形成二硫键的氨基酸是_.4蛋白质中的_、_和_3种氨基酸具有紫外吸收特性，因而使蛋白质在280nm处有最大吸收值。5精氨酸的pI值为10.76,将其溶于pH7的缓冲液中，并置于电场中，则精氨酸应向电场的_方向移动。6组成蛋白质的20种氨基酸中，含有咪唑环的氨基酸是_，含硫的氨基酸有_和_。7蛋白质的二级结构最基本的有两种类型，它们是_和_。8-螺旋结构是由同一肽链的_和 _间的_键维持的，螺距为_,每圈螺旋含_个氨基酸残基，每个氨基酸残基沿轴上升高度为_。天然蛋白质分子中的-螺旋大都属于_手螺旋。9在蛋白质的-螺旋结构中，在环状氨基酸_存在处局部螺旋结构中断。10球状蛋白质中有_侧链的氨基酸残基常位于分子表面而与水结合，而有_侧链的氨基酸位于分子的内部。11氨基酸与茚三酮发生氧化脱羧脱氨反应生成_色化合物，而_与茚三酮反应生成黄色化合物。12维持蛋白质的一级结构的化学键有_和_；维持二级结构靠_键；维持三级结构和四级结构靠_键，其中包括_、_、_和_.13稳定蛋白质胶体的因素是_和_。14GSH的中文名称是_，它的活性基团是_，它的生化功能是_。15加入低浓度的中性盐可使蛋白质溶解度_，这种现象称为_，而加入高浓度的中性盐，当达到一定的盐饱和度时，可使蛋白质的溶解度_并_,这种现象称为_,蛋白质的这种性质常用于_。16用电泳方法分离蛋白质的原理，是在一定的pH条件下，不同蛋白质的_、_和_不同，因而在电场中移动的_和_不同，从而使蛋白质得到分离。17氨基酸处于等电状态时，主要是以_形式存在，此时它的溶解度最小。18鉴定蛋白质多肽链氨基末端常用的方法有_和_。19测定蛋白质分子量的方法有_、_和_。20今有甲、乙、丙三种蛋白质，它们的等电点分别为8.0、4.5和10.0,当在pH8.0缓冲液中，它们在电场中电泳的情况为：甲_，乙_，丙_。21当氨基酸溶液的pH=pI时，氨基酸以_离子形式存在，当pHpI时，氨基酸以_离子形式存在。22谷氨酸的pK1(-COOH)2.19, pK2 (-NH+3 ) = 9.67, pKR(R基)= 4.25,谷氨酸的等电点为_。23天然蛋白质中的螺旋结构，其主链上所有的羰基氧与亚氨基氢都参与了链内_键的形成，因此构象相当稳定。24将分子量分别为a（90 000）、b（45 000）、c（110 000）的三种蛋白质混合溶液进行凝胶过滤层析，它们被洗脱下来的先后顺序是_。25肌红蛋白的含铁量为0.34%，其最小分子量是_.血红蛋白的含铁量也是0.34%，但每分子含有4个铁原子，血红蛋白的分子量是_.26一个-螺旋片段含有180个氨基酸残基，该片段中有_圈螺旋？该-螺旋片段的轴长为_.(三) 选择题1在生理pH条件下，下列哪种氨基酸带正电荷？A丙氨酸 B酪氨酸 C赖氨酸D蛋氨酸 E异亮氨酸2下列氨基酸中哪一种是非必需氨基酸？A亮氨酸 B酪氨酸 C赖氨酸D蛋氨酸 E苏氨酸3蛋白质的组成成分中，在280nm处有最大吸收值的最主要成分是：A酪氨酸的酚环 B半胱氨酸的硫原子C肽键 D苯丙氨酸4下列4种氨基酸中哪个有碱性侧链？A脯氨酸 B苯丙氨酸 C异亮氨酸 D赖氨酸5下列哪种氨基酸属于亚氨基酸？A丝氨酸 B脯氨酸 C亮氨酸 D组氨酸6下列哪一项不是蛋白质-螺旋结构的特点？A天然蛋白质多为右手螺旋B肽链平面充分伸展C每隔3.6个氨基酸螺旋上升一圈。D每个氨基酸残基上升高度为0.15nm.7下列哪一项不是蛋白质的性质之一？A处于等电状态时溶解度最小 B加入少量中性盐溶解度增加C变性蛋白质的溶解度增加 D有紫外吸收特性8下列氨基酸中哪一种不具有旋光性？ALeu BAla CGly DSer EVal9在下列检测蛋白质的方法中，哪一种取决于完整的肽链？A凯氏定氮法 B双缩尿反应 C紫外吸收法 D茚三酮法10下列哪种酶作用于由碱性氨基酸的羧基形成的肽键？A糜蛋白酶 B羧肽酶 C氨肽酶 D胰蛋白酶11下列有关蛋白质的叙述哪项是正确的？A蛋白质分子的净电荷为零时的pH值是它的等电点B大多数蛋白质在含有中性盐的溶液中会沉淀析出C由于蛋白质在等电点时溶解度最大，所以沉淀蛋白质时应远离等电点D以上各项均不正确12下列关于蛋白质结构的叙述，哪一项是错误的？A氨基酸的疏水侧链很少埋在分子的中心部位B电荷的氨基酸侧链常在分子的外侧，面向水相C白质的一级结构在决定高级结构方面是重要因素之一D白质的空间结构主要靠次级键维持13列哪些因素妨碍蛋白质形成-螺旋结构？A脯氨酸的存在 B氨基酸残基的大的支链C性氨基酸的相邻存在 D性氨基酸的相邻存在E以上各项都是14于-折叠片的叙述，下列哪项是错误的？A-折叠片的肽链处于曲折的伸展状态B的结构是借助于链内氢键稳定的C有的-折叠片结构都是通过几段肽链平行排列而形成的D基酸之间的轴距为0.35nm15持蛋白质二级结构稳定的主要作用力是：A盐键 B疏水键 C氢键 D二硫键16维持蛋白质三级结构稳定的因素是：A肽键 B二硫键 C离子键 D氢键 E次级键17凝胶过滤法分离蛋白质时，从层析柱上先被洗脱下来的是：A分子量大的 B分子量小的C电荷多的 D带电荷少的18. 下列哪项与蛋白质的变性无关？A. 肽键断裂 B氢键被破坏C离子键被破坏 D疏水键被破坏19蛋白质空间构象的特征主要取决于下列哪一项？A多肽链中氨基酸的排列顺序 B次级键C链内及链间的二硫键 D温度及pH20下列哪个性质是氨基酸和蛋白质所共有的？A胶体性质 B两性性质C沉淀反应 D变性性质E双缩脲反应21氨基酸在等电点时具有的特点是：A不带正电荷 B不带负电荷CA和B D溶解度最大E在电场中不泳动22蛋白质的一级结构是指：A蛋白质氨基酸的种类和数目 B蛋白质中氨基酸的排列顺序C蛋白质分子中多肽链的折叠和盘绕 D包括A,B和C(四) 是非判断题( ) 1氨基酸与茚三酮反应都产生蓝紫色化合物。( ) 2因为羧基碳和亚氨基氮之间的部分双键性质，所以肽键不能自由旋转。( ) 3所有的蛋白质都有酶活性。( ) 4-碳和羧基碳之间的键不能自由旋转。( ) 5多数氨基酸有D-和L-两种不同构型，而构型的改变涉及共价键的破裂。( ) 6所有氨基酸都具有旋光性。( ) 7构成蛋白质的20种氨基酸都是必需氨基酸。( ) 8蛋白质多肽链中氨基酸的排列顺序在很大程度上决定了它的构象。( ) 9一氨基一羧基氨基酸的pI为中性，因为-COOH和-NH2 的解离度相同。( ) 10蛋白质的变性是蛋白质立体结构的破坏，因此涉及肽键的断裂。( ) 11蛋白质是生物大分子，但并不都具有四级结构。( ) 12血红蛋白和肌红蛋白都是氧的载体，前者是一个典型的变构蛋白，在与氧结合过程中呈现变构效应，而后者却不是。( ) 13.用FDNB法和Edman降解法测定蛋白质多肽链N-端氨基酸的原理是相同的。( ) 14并非所有构成蛋白质的20种氨基酸的-碳原子上都有一个自由羧基和一个自由氨基。( ) 15蛋白质是两性电解质，它的酸碱性质主要取决于肽链上可解离的R基团。( ) 16在具有四级结构的蛋白质分子中，每个具有三级结构的多肽链是一个亚基。( ) 17所有的肽和蛋白质都能和硫酸铜的碱性溶液发生双缩尿反应。( ) 18一个蛋白质分子中有两个半胱氨酸存在时，它们之间可以形成两个二硫键。( ) 19盐析法可使蛋白质沉淀，但不引起变性，所以盐析法常用于蛋白质的分离制备。( ) 20蛋白质的空间结构就是它的三级结构。( ) 21维持蛋白质三级结构最重要的作用力是氢键。( )22具有四级结构的蛋白质，它的每个亚基单独存在时仍能保存蛋白质原有的生物活性。( )23变性蛋白质的溶解度降低，是由于中和了蛋白质分子表面的电荷及破 坏了外层的水膜所引起的。( )24蛋白质二级结构的稳定性是靠链内氢键维持的，肽链上每个肽键都参与氢键的形成。（五）问答题1什么是蛋白质的一级结构？为什么说蛋白质的一级结构决定其空间结构？2什么是蛋白质的空间结构？蛋白质的空间结构与其生物功能有何关系？3蛋白质的螺旋结构有何特点？4蛋白质的折叠结构有何特点？5举例说明蛋白质的结构与其功能之间的关系。6什么是蛋白质的变性作用和复性作用？蛋白质变性后哪些性质会发生改变？7简述蛋白质变性作用的机制。8蛋白质有哪些重要功能9下列试剂和酶常用于蛋白质化学的研究中：CNBr、异硫氰酸苯酯、丹黄酰氯、脲、6mol/L HCl、-巯基乙醇、水合茚三酮、过甲酸、胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶。其中哪一个最适合完成以下各项任务？（1）测定小肽的氨基酸序列。（2）鉴定肽的氨基末端残基。（3）不含二硫键的蛋白质的可逆变性；如有二硫键存在时还需加什么试剂？（4）在芳香族氨基酸残基羧基侧水解肽键。（4）在蛋氨酸残基羧基侧水解肽键。（5）在赖氨酸和精氨酸残基羧基侧水解肽键。10根据蛋白质一级氨基酸序列可以预测蛋白质的空间结构。假设有下列氨基酸序列（如图）：1 5 10 15 Ile-Ala-His-Thr-Tyr-Gly-Pro-Glu-Ala-Ala-Met-Cys-Lys-Try-Glu-Ala-Gln- 20 25 27Pro-Asp-Gly-Met-Glu-Cys-Ala-Phe-His-Arg（1）预测在该序列的哪一部位可能会出弯或-转角。（2）何处可能形成链内二硫键？（3）假设该序列只是大的球蛋白的一部分，下面氨基酸残基中哪些可能分布在蛋白的外表面，哪些分布在内部？天冬氨酸；异亮氨酸；苏氨酸；缬氨酸；谷氨酰胺；赖氨酸三、 习题解答（一）名词解释1两性离子：指在同一氨基酸分子上含有等量的正负两种电荷，又称兼性离子或偶极离子。2必需氨基酸：指人体（和其它哺乳动物）自身不能合成，机体又必需，需要从饮食中获得的氨基酸。3. 氨基酸的等电点：指氨基酸的正离子浓度和负离子浓度相等时的pH值，用符号pI表示。4稀有氨基酸：指存在于蛋白质中的20种常见氨基酸以外的其它罕见氨基酸，它们是正常氨基酸的衍生物。5非蛋白质氨基酸：指不存在于蛋白质分子中而以游离状态和结合状态存在于生物体的各种组织和细胞的氨基酸。6构型：指在立体异构体中不对称碳原子上相连的各原子或取代基团的空间排布。构型的转变伴随着共价键的断裂和重新形成。7蛋白质的一级结构：指蛋白质多肽链中氨基酸的排列顺序，以及二硫键的位置。8构象：指有机分子中，不改变共价键结构，仅单键周围的原子旋转所产生的原子的空间排布。一种构象改变为另一种构象时，不涉及共价键的断裂和重新形成。构象改变不会改变分子的光学活性。 9蛋白质的二级结构：指在蛋白质分子中的局部区域内，多肽链沿一定方向盘绕和折叠的方式。10结构域：指蛋白质多肽链在二级结构的基础上进一步卷曲折叠成几个相对独立的近似球形的组装体。11蛋白质的三级结构：指蛋白质在二级结构的基础上借助各种次级键卷曲折叠成特定的球状分子结构的构象。12氢键：指负电性很强的氧原子或氮原子与N-H或O-H的氢原子间的相互吸引力。13蛋白质的四级结构：指多亚基蛋白质分子中各个具有三级结构的多肽链以适当方式聚合所呈现的三维结构。14离子键：带相反电荷的基团之间的静电引力，也称为静电键或盐键。15超二级结构：指蛋白质分子中相邻的二级结构单位组合在一起所形成的有规则的、在空间上能辨认的二级结构组合体。16疏水键：非极性分子之间的一种弱的、非共价的相互作用。如蛋白质分子中的疏水侧链避开水相而相互聚集而形成的作用力。17范德华力：中性原子之间通过瞬间静电相互作用产生的一种弱的分子间的力。当两个原子之间的距离为它们的范德华半径之和时，范德华力最强。18盐析：在蛋白质溶液中加入一定量的高浓度中性盐（如硫酸氨），使蛋白质溶解度降低并沉淀析出的现象称为盐析。19盐溶：在蛋白质溶液中加入少量中性盐使蛋白质溶解度增加的现象。20蛋白质的变性作用：蛋白质分子的天然构象遭到破坏导致其生物活性丧失的现象。蛋白质在受到光照、热、有机溶剂以及一些变性剂的作用时，次级键遭到破坏导致天然构象的破坏，但其一级结构不发生改变。21蛋白质的复性：指在一定条件下，变性的蛋白质分子恢复其原有的天然构象并恢复生物活性的现象。22蛋白质的沉淀作用：在外界因素影响下，蛋白质分子失去水化膜或被中和其所带电荷，导致溶解度降低从而使蛋白质变得不稳定而沉淀的现象称为蛋白质的沉淀作用。23凝胶电泳：以凝胶为介质，在电场作用下分离蛋白质或核酸等分子的分离纯化技术。24层析：按照在移动相（可以是气体或液体）和固定相（可以是液体或固体）之间的分配比例将混合成分分开的技术。（二）填空题1 氨；羧基； 2 16 ；6.25 3 谷氨酸；天冬氨酸；丝氨酸；苏氨酸4 苯丙氨酸；酪氨酸；色氨酸；紫外吸收 5 负极 6 组氨酸；半胱氨酸；蛋氨酸 7 -螺旋结构；-折叠结构8 C=O；N=H；氢；0.54nm； 3.6；0.15nm；右9 脯氨酸；羟脯氨酸 10极性；疏水性 11蓝紫色；脯氨酸12肽键；二硫键；氢键；次级键；氢键；离子键；疏水键；范德华力13表面的水化膜；同性电荷 14谷胱甘肽；巯基15增加；盐溶；减小；沉淀析出；盐析；蛋白质分离16带电荷量；分子大小；分子形状；方向；速率 17两性离子；最小 18FDNB法（2,4-二硝基氟苯法）；Edman降解法（苯异硫氢酸酯法）19沉降法；凝胶过滤法；SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法（SDS-PAGE法）20不动；向正极移动；向负极移动； 21两性离子；负；223.2223氢键；24C；a；b 2516 672； 66 687； 2650圈；27nm（三） 选择题1D：5种氨基酸中只有赖氨酸为碱性氨基酸，其等电点为9.74,大于生理pH值，所以带正电荷。2B：人（或哺乳动物）的必需氨基酸包括赖氨酸、色氨酸、甲硫氨酸、苯丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、苏氨酸8种，酪氨酸不是必需氨基酸。3A：酪氨酸和苯丙氨酸在280nm处的克分子消光系数分别为540何120,所以酪氨酸比苯丙氨酸有较大吸收，而且大多数蛋白质中都含有酪氨酸。肽键的最大吸收在215nm,半胱氨酸的硫原子在280nm和215nm均无明显吸收。4D：在此4种氨基酸中，只有赖氨酸的R基团可接受氢质子，作为碱，而其它3种氨基酸均无可解离的R侧链。5B：氨基酸的-碳上连接的是亚氨基而不是氨基，所以实际上属于一种亚氨基酸，而其它氨基酸的-碳上都连接有氨基，是氨基酸。6B：天然蛋白质的-螺旋结构的特点是，肽链围绕中心轴旋转形成螺旋结构，而不是充分伸展的结构。另外在每个螺旋中含有3.6个氨基酸残基，螺距为0.54nm,每个氨基酸残基上升高度为0.15nm,所以B不是-螺旋结构的特点。7C：蛋白质处于等电点时，净电荷为零，失去蛋白质分子表面的同性电荷互相排斥的稳定因素，此时溶解度最小；加入少量中性盐可增加蛋白质的溶解度，即盐溶现象；因为蛋白质中含有酪氨酸、苯丙氨酸和色氨酸，所以具有紫外吸收特性；变性蛋白质的溶解度减小而不是增加，因为蛋白质变性后，近似于球状的空间构象被破坏，变成松散的结构，原来处于分子内部的疏水性氨基酸侧链暴露于分子表面，减小了与水分子的作用，从而使蛋白质溶解度减小并沉淀。8C：甘氨酸的-碳原子连接的4个原子和基团中有2个是氢原子，所以不是不对称碳原子，没有立体异构体，所以不具有旋光性。9B：双缩脲反应是指含有两个或两个以上肽键的化合物（肽及蛋白质）与稀硫酸铜的碱性溶液反应生成紫色（或青紫色）化合物的反应，产生颜色的深浅与蛋白质的含量成正比，所以可用于蛋白质的定量测定。茚三酮反应是氨基酸的游离的-NH与茚三酮之间的反应；凯氏定氮法是测定蛋白质消化后产生的氨；紫外吸收法是通过测定蛋白质的紫外消光值定量测定蛋白质的方法，因为大多数蛋白质都含有酪氨酸，有些还含有色氨酸或苯丙氨酸，这三种氨基酸具有紫外吸收特性，所以紫外吸收值与蛋白质含量成正比。10D：靡蛋白酶即胰凝乳蛋白酶作用于酪氨酸、色氨酸和苯丙氨酸的羧基参与形成的肽键；羧肽酶是从肽链的羧基端开始水解肽键的外肽酶；氨肽酶是从肽链的氨基端开始水解肽键的外肽酶；胰蛋白酶可以专一地水解碱性氨基酸的羧基参与形成的肽键。11A：蛋白质的等电点是指蛋白质分子内的正电荷桌能总数与负电荷总数相等时的pH值。蛋白质盐析的条件是加入足量的中性盐，如果加入少量中性盐不但不会使蛋白质沉淀析出反而会增加其溶解度，即盐溶。在等电点时，蛋白质的净电荷为零，分子间的净电斥力最小，所以溶解度最小，在溶液中易于沉淀，所以通常沉淀蛋白质应调pH至等电点。12A：在蛋白质的空间结构中，通常是疏水性氨基酸的侧链存在于分子的内部，因为疏水性基团避开水相而聚集在一起，而亲水侧链分布在分子的表面以充分地与水作用；蛋白质的一级结构是多肽链中氨基酸的排列顺序，此顺序即决定了肽链形成二级结构的类型以及更高层次的结构；维持蛋白质空间结构的作用力主要是次级键。13E：脯氨酸是亚氨基酸,参与形成肽键后不能再与C=O 氧形成氢键，因此不能形成-螺旋结构;氨基酸残基的支链大时，空间位阻大，妨碍螺旋结构的形成；连续出现多个酸性氨基酸或碱性氨基酸时，同性电荷会互相排斥，所以不能形成稳定的螺旋结构。14C：-折叠结构是一种常见的蛋白质二级结构的类型，分为平行和反平行两种排列方式，所以题中C项的说法是错误的。在-折叠结构中肽链处于曲折的伸展状态，氨基酸残基之间的轴心距离为0.35nm, 相邻肽链（或同一肽链中的几个肽段）之间形成氢键而使结构稳定。15C：蛋白质二级结构的两种主要类型是-螺旋结构和-折叠结构。在-螺旋结构中肽链上的所有氨基酸残基均参与氢键的形成以维持螺旋结构的稳定。在-折叠结构中，相邻肽链或肽段之间形成氢键以维持结构的稳定，所以氢键是维持蛋白质二级结构稳定的主要作用力。离子键、疏水键和范德华力在维持蛋白质的三级结构和四级结构中起重要作用，而二硫键在稳定蛋白质的三级结构中起一定作用。16E：肽键是连接氨基酸的共价键，它是维持蛋白质一级结构的作用力；而硫键是2分子半胱氨酸的巯基脱氢氧化形成的共价键，它可以存在于2条肽链之间也可以由存在于同一条肽链的2个不相邻的半胱氨酸之间，它在维持蛋白质三级结构中起一定作用，但不是最主要的。离子键和氢键都是维持蛋白质三级结构稳定的因素之一，但此项选择不全面，也不确切。次级键包括氢键、离子键、疏水键和范德华力，所以次项选择最全面、确切。17A：用凝胶过滤柱层析分离蛋白质是根据蛋白质分子大小不同进行分离的方法，与蛋白质分子的带电状况无关。在进行凝胶过滤柱层析过程中，比凝胶网眼大的分子不能进入网眼内，被排阻在凝胶颗粒之外。比凝胶网眼小的颗粒可以进入网眼内，分子越小进入网眼的机会越多，因此不同大小的分子通过凝胶层析柱时所经的路程距离不同，大分子物质经过的距离短而先被洗出，小分子物质经过的距离长，后被洗脱，从而使蛋白质得到分离。18A：蛋白质的变性是其空间结构被破坏，从而引起理化性质的改变以及生物活性的丧失，但其一级结构不发生改变，所以肽键没有断裂。蛋白质变性的机理是维持其空间结构稳定的作用力被破坏，氢键、离子键和疏水键都是维持蛋白质空间结构的作用力，当这些作用力被破坏时空间结构就被破坏并引起变性，所以与变性有关。 19A：蛋白质的一级结构即蛋白质多肽链中氨基酸的排列顺序决定蛋白质的空间构象，因为一级结构中包含着形成空间结构所需要的所有信息，氨基酸残基的结构和化学性质决定了所组成的蛋白质的二级结构的类型以及三级、四级结构的构象；二硫键和次级键都是维持蛋白质空间构象稳定的作用力，但不决定蛋白质的构象；温度及pH影响蛋白质的溶解度、解离状态、生物活性等性质，但不决定蛋白质的构象。20B：氨基酸即有羧基又有氨基，可以提供氢质子也可以接受氢质子，所以即是酸又是碱，是两性电解质。由氨基酸组成的蛋白质分子上也有可解离基团，如谷氨酸和天冬氨酸侧链基团的羧基以及赖氨酸的侧链氨基，所以也是两性电解质，这是氨基酸和蛋白质所共有的性质；胶体性质是蛋白质所具有的性质，沉淀反应是蛋白质的胶体性质被破坏产生的现象；变性是蛋白质的空间结构被破坏后性质发生改变并丧失生物活性的现象，这三种现象均与氨基酸无关。21E： 氨基酸分子上的正电荷数和负电荷数相等时的pH值是其等电点，即净电荷为零，此时在电场中不泳动。由于净电荷为零，分子间的净电斥力最小，所以溶解度最小。22B：蛋白质的一级结构是指蛋白质多肽链中氨基酸的排列顺序，蛋白质中所含氨基酸的种类和数目相同但排列顺序不同时，其一级结构以及在此基础上形成的空间结构均有很大不同。蛋白质分子中多肽链的折叠和盘绕是蛋白质二级结构的内容，所以B项是正确的。（四）是非判断题1错：脯氨酸与茚三酮反应产生黄色化合物，其它氨基酸与茚三酮反应产生蓝色化合物。2对：在肽平面中，羧基碳和亚氨基氮之间的键长为0.132nm，介于CN 单键和CN 双键之间，具有部分双键的性质，不能自由旋转。3错：蛋白质具有重要的生物功能，有些蛋白质是酶，可催化特定的生化反应，有些蛋白质则具有其它的生物功能而不具有催化活性，所以不是所有的蛋白质都具有酶的活性。4错：-碳和羧基碳之间的键是CC单键，可以自由旋转。5对：在20种氨基酸中，除甘氨酸外都具有不对称碳原子，所以具有L-型和D-型2种不同构型，这两种不同构型的转变涉及到共价键的断裂和从新形成。6错：由于甘氨酸的-碳上连接有2个氢原子，所以不是不对称碳原子，没有2种不同的立体异构体，所以不具有旋光性。其它常见的氨基酸都具有不对称碳原子，因此具有旋光性。7错：必需氨基酸是指人（或哺乳动物）自身不能合成机体又必需的氨基酸，包括8种氨基酸。其它氨基酸人体自身可以合成，称为非必需氨基酸。8对：蛋白质的一级结构是蛋白质多肽链中氨基酸的排列顺序，不同氨基酸的结构和化学性质不同，因而决定了多肽链形成二级结构的类型以及不同类型之间的比例以及在此基础上形成的更高层次的空间结构。如在脯氨酸存在的地方-螺旋中断，R侧链具有大的支链的氨基酸聚集的地方妨碍螺旋结构的形成，所以一级结构在很大程度上决定了蛋白质的空间构象。9错：一氨基一羧基氨基酸为中性氨基酸，其等电点为中性或接近中性，但氨基和羧基的解离度，即pK值不同。10错：蛋白质的变性是蛋白质空间结构的破坏，这是由于维持蛋白质构象稳定的作用力次级键被破坏所造成的，但变性不引起多肽链的降解，即肽链不断裂。11对：有些蛋白质是由一条多肽链构成的，只具有三级结构，不具有四级结构，如肌红蛋白。12对：血红蛋白是由4个亚基组成的具有4级结构的蛋白质，当血红蛋白的一个亚基与氧结合后可加速其它亚基与氧的结合，所以具有变构效应。肌红蛋白是仅有一条多肽链的蛋白质，具有三级结构，不具有四级结构，所以在与氧的结合过程中不表现出变构效应。13错：Edman降解法是多肽链N端氨基酸残基被苯异硫氢酸酯修饰，然后从多肽链上切下修饰的残基，经层析鉴定可知N端氨基酸的种类，而余下的多肽链仍为一条完整的多肽链，被回收后可继续进行下一轮Edman反应，测定N末端第二个氨基酸。反应重复多次就可连续测出多肽链的氨基酸顺序。FDNB法（Sanger反应）是多肽链N末端氨基酸与FDNB（2,4-二硝基氟苯）反应生成二硝基苯衍生物（DNP-蛋白），然后将其进行酸水解，打断所有肽键，N末端氨基酸与二硝基苯基结合牢固，不易被酸水解。水解产物为黄色的N端DNP-氨基酸和各种游离氨基酸。将DNP-氨基酸抽提出来并进行鉴定可知N端氨基酸的种类，但不能测出其后氨基酸的序列。14对：大多数氨基酸的-碳原子上都有一个自由氨基和一个自由羧基，但脯氨酸和羟脯氨酸的-碳原子上连接的氨基氮与侧链的末端碳共价结合形成环式结构，所以不是自由氨基。15对：蛋白质是由氨基酸组成的大分子，有些氨基酸的R侧链具有可解离基团，如羧基、氨基、咪唑基等等。这些基团有的可释放H+ ,有的可接受H+ ,所以使得蛋白质分子即是酸又是碱，是两性电解质。蛋白质分子中可解离R基团的种类和数量决定了蛋白质提供和接受H+ 的能力，即决定了它的酸碱性质。16对：在具有四级结构的蛋白质分子中，每个具有三级结构的多肽链是一个亚基。17错：具有两个或两个以上肽键的物质才具有类似于双缩脲的结构，具有双缩脲反应，而二肽只具有一个肽键，所以不具有双缩脲反应。18错：二硫键是由两个半胱氨酸的巯基脱氢氧化而形成的，所以两个半胱氨酸只能形成一个二硫键。19对：盐析引起的蛋白质沉淀是由于大量的中性盐破坏了蛋白质胶体的稳定因素（蛋白质分子表面的水化膜及所带同性电荷互相排斥），从而使蛋白质溶解度降低并沉淀，但并未破坏蛋白质的空间结构，所以不引起变性。根据不同蛋白质盐析所需的盐饱和度分段盐析可将蛋白质进行分离和纯化。20错：蛋白质的空间结构包括二级结构、三级结构和四级结构三个层次，三级结构只是其中一个层次。21错：维持蛋白质三级结构的作用力有氢键、离子键、疏水键、范德华力以及二硫键，其中最重要的是疏水键。22错：具有四级结构的蛋白质，只有所有的亚基以特定的适当方式组装在一起时才具有生物活性，缺少一个亚基或单独一个亚基存在时都不具有生物活性。23错：蛋白质变性是由于维持蛋白质构象稳定的作用力（次级键和而硫键）被破坏从而使蛋白质空间结构被破坏并山个丧失生物活性的现象。次级键被破坏以后，蛋白质结构松散，原来聚集在分子内部的疏水性氨基酸侧链伸向外部，减弱了蛋白质分子与水分子的相互作用，因而使溶解度将低。24错：蛋白质二级结构的稳定性是由链内氢键维持的，如-螺旋结构和-折叠结构中的氢键均起到稳定结构的作用。但并非肽链中所有的肽键都参与氢键的形成，如脯氨酸与相邻氨基酸形成的肽键，以及自由回转中的有些肽键不能形成链内氢键。（五） 问答题（解题要点）1答：蛋白质一级结构指蛋白质多肽链中氨基酸残基的排列顺序。因为蛋白质分子肽链的排列顺序包含了自动形成复杂的三维结构（即正确的空间构象）所需要的全部信息，所以一级结构决定其高级结构。2答：蛋白质的空间结构是指蛋白质分子中原子和基团在三维空间上的排列、分布及肽链走向。蛋白质的空间结构决定蛋白质的功能。空间结构与蛋白质各自的功能是相适应的。3答：（1）多肽链主链绕中心轴旋转，形成棒状螺旋结构，每个螺旋含有3.6个氨基酸残基，螺距为0.54nm,氨基酸之间的轴心距为0.15nm.。（2）-螺旋结构的稳定主要靠链内氢键，每个氨基酸的NH与前面第四个氨基酸的CO 形成氢键。（3）天然蛋白质的-螺旋结构大都为右手螺旋。4答：-折叠结构又称为-片层结构，它是肽链主链或某一肽段的一种相当伸展的结构，多肽链呈扇面状折叠。（1）两条或多条几乎完全伸展的多肽链（或肽段）侧向聚集在一起，通过相邻肽链主链上的氨基和羰基之间形成的氢键连接成片层结构并维持结构的稳定。（2）氨基酸之间的轴心距为0.35nm（反平行式）和0.325nm（平行式）。（3）-折叠结构有平行排列和反平行排列两种。5答：蛋白质的生物学功能从根本上来说取决于它的一级结构。蛋白质的生物学功能是蛋白质分子的天然构象所具有的属性或所表现的性质。一级结构相同的蛋白质，其功能也相同，二者之间有统一性和相适应性。6答：蛋白质变性作用是指在某些因素的影响下，蛋白质分子的空间构象被破坏，并导致其性质和生物活性改变的现象。蛋白质变性后会发生以下几方面的变化：（1）生物活性丧失；（2）理化性质的改变，包括：溶解度降低，因为疏水侧链基团暴露；结晶能力丧失；分子形状改变，由球状分子变成松散结构，分子不对称性加大；粘度增加；光学性质发生改变，如旋光性、紫外吸收光谱等均有所改变。（3）生物化学性质的改变，分子结构伸展松散，易被蛋白酶分解。7答：维持蛋白质空间构象稳定的作用力是次级键，此外，二硫键也起一定的作用。当某些因素破坏了这些作用力时，蛋白质的空间构象即遭到破坏，引起变性。8答：蛋白质的重要作用主要有以下几方面：（1）生物催化作用 酶是蛋白质，具有催化能力，新陈代谢的所有化学反应几乎都是在酶的催化下进行的。（2）结构蛋白 有些蛋白质的功能是参与细胞和组织的建成。（3）运输功能 如血红蛋白具有运输氧的功能。（4）收缩运动 收缩蛋白（如肌动蛋白和肌球蛋白）与肌肉收缩和细胞运动密切相关。（5）激素功能 动物体内的激素许多是蛋白质或多肽，是调节新陈代谢的生理活性物质。（6）免疫保护功能 抗体是蛋白质，能与特异抗原结合以清除抗原的作用，具有免疫功能。（7）贮藏蛋白 有些蛋白质具有贮藏功能，如植物种子的谷蛋白可供种子萌发时利用。（8）接受和传递信息 生物体中的受体蛋白能专一地接受和传递外界的信息。（9）控制生长与分化 有些蛋白参与细胞生长与分化的调控。（10）毒蛋白 能引起机体中毒症状和死亡的异体蛋白，如细菌毒素、蛇毒、蝎毒、蓖麻毒素等。9答：（a）异硫氢酸苯酯；（b）丹黄酰氯；（c）脲、-巯基乙醇；（d）胰凝乳蛋白酶；（e）CNBr; （f）胰蛋白酶。10答：（1）可能在7位和19位打弯，因为脯氨酸常出现在打弯处。（2）13位和24位的半胱氨酸可形成二硫键。（3）分布在外表面的为极性和带电荷的残基：Asp、Gln和Lys；分布在内部的是非极性的氨基酸残基：Try、Leu和Val；Thr尽管有极性，但疏水性也很强，因此，它出现在外表面和内部的可能性都有。第二章 核 酸(一)名词解释1单核苷酸(mononucleotide)2磷酸二酯键（phosphodiester bonds）3不对称比率（dissymmetry ratio）4碱基互补规律(complementary base pairing)5反密码子（anticodon）6顺反子（cistron）7核酸的变性与复性（denaturation、renaturation）8退火（annealing）9增色效应（hyper chromic effect）10减色效应（hypo chromic effect）11噬菌体（phage）12发夹结构（hairpin structure）13DNA的熔解温度（melting temperature Tm）14分子杂交（molecular hybridization）15环化核苷酸(cyclic nucleotide)（二）填空题1DNA双螺旋结构模型是_于_年提出的。2核酸的基本结构单位是_。3脱氧核糖核酸在糖环_位置不带羟基。4两类核酸在细胞中的分布不同，DNA主要位于_中，RNA主要位于_中。5核酸分子中的糖苷键均为_型糖苷键。糖环与碱基之间的连键为_键。核苷与核苷之间通过_键连接成多聚体。6核酸的特征元素_。7碱基与戊糖间是C-C连接的是_核苷。8DNA中的_嘧啶碱与RNA中的_嘧啶碱的氢键结合性质是相似的。9DNA中的_嘧啶碱与RNA中的_嘧啶碱的氢键结合性质是相似的。 10DNA双螺旋的两股链的顺序是_关系。11给动物食用3H标记的_，可使DNA带有放射性，而RNA不带放射性。12B型DNA双螺旋的螺距为_，每匝螺旋有_对碱基，每对碱基的转角是_。13在DNA分子中，一般来说G-C含量高时，比重_，Tm（熔解温度）则_，分子比较稳定。14在_ _条件下，互补的单股核苷酸序列将缔结成双链分子。15_RNA分子指导蛋白质合成，_RNA分子用作蛋白质合成中活化氨基酸的载体。16DNA分子的沉降系数决定于_、_。17DNA变性后，紫外吸收_ _，粘度_ _、浮力密度_ _，生物活性将_ _。18因为核酸分子具有_ _、_ _，所以在_nm处有吸收峰，可用紫外分光光度计测定。19双链DNA热变性后，或在pH2以下，或在pH12以上时，其OD260_，同样条件下，单链DNA的OD260_。20DNA样品的均一性愈高，其熔解过程的温度范围愈_。21DNA所在介质的离子强度越低，其熔解过程的温度范围愈_，熔解温度愈_，所以DNA应保存在较_浓度的盐溶液中，通常为_mol/L的NaCI溶液。22mRNA在细胞内的种类_，但只占RNA总量的_，它是以_为模板合成的，又是_合成的模板。 23变性DNA 的复性与许多因素有关，包括_，_，_，_，_，等。24维持DNA双螺旋结构稳定的主要因素是_，其次，大量存在于DNA分子中的弱作用力如_，_和_也起一定作用。25mRNA的二级结构呈_形，三级结构呈_形，其3末端有一共同碱基序列_其功能是_。26常见的环化核苷酸有_和_。其作用是_，他们核糖上的_位与_位磷酸-OH环化。27真核细胞的mRNA帽子由_组成，其尾部由_组成，他们的功能分别是_，_。28DNA在水溶解中热变性之后，如果将溶液迅速冷却，则DNA保持_状态；若使溶液缓慢冷却，则DNA重新形成_。（三）选择题1ATP分子中各组分的连接方式是：AR-A-P-P-P BA-R-P-P-P CP-A-R-P-P DP-R-A-P-P2hnRNA是下列哪种RNA的前体？AtRNA BrRNA CmRNA DSnRNA3决定tRNA携带氨基酸特异性的关键部位是：AXCCA3末端 BTC环； CDHU环 D额外环 E反密码子环4根据Watson-Crick模型，求得每一微米DNA双螺旋含核苷酸对的平均数为：:A25400 B2540 C29411 D2941 E35055构成多核苷酸链骨架的关键是：A23-磷酸二酯键 B 24-磷酸二酯键 C25-磷酸二酯键 D 34-磷酸二酯键 E35-磷酸二酯键6与片段TAGAp互补的片段为：AAGATp BATCTp CTCTAp DUAUAp7含有稀有碱基比例较多的核酸是：A胞核DNA B线粒体DNA CtRNA D mRNA8真核细胞mRNA帽子结构最多见的是：Am7APPPNmPNmP B m7GPPPNmPNmP Cm7UPPPNmPNmP Dm7CPPPNmPNmP E m7TPPPNmPNmP9 DNA变性后理化性质有下述改变：A对260nm紫外吸收减少 B溶液粘度下降 C磷酸二酯键断裂 D核苷酸断裂10双链DNA的Tm较高是由于下列哪组核苷酸含量较高所致：AA+G BC+T CA+T DG+C EA+C11密码子GA，所识别的密码子是：ACAU BUGC CCGU DUAC E都不对12真核生物mRNA的帽子结构中，m7G与多核苷酸链通过三个磷酸基连接，连接方式是：A2-5 B3-5 C3-3 D5-5 E3-313在pH3.5的缓冲液中带正电荷最多的是：AAMP BGMP CCMP DUMP14下列对于环核苷酸的叙述，哪一项是错误的？AcAMP与cGMP的生物学作用相反 B 重要的环核苷酸有cAMP与cGMPCcAMP是一种第二信使 DcAMP分子内有环化的磷酸二酯键15真核生物DNA缠绕在组蛋白上构成核小体，核小体含有的蛋白质是AH1、H2、 H3、H4各两分子 BH1A、H1B、H2B、H2A各两分子CH2A、H2B、H3A、H3B各两分子 DH2A、H2B、H3、H4各两分子EH2A、H2B、H4A、H4B各两分子（四）是非判断题（ ）1DNA是生物遗传物质，RNA则不是。（ ）2脱氧核糖核苷中的糖环3位没有羟基。（ ）3原核生物和真核生物的染色体均为DNA与组蛋白的复合体。（ ）4核酸的紫外吸收与溶液的pH值无关。（ ）5生物体的不同组织中的DNA，其碱基组成也不同。（ ）6核酸中的修饰成分（也叫稀有成分）大部分是在tRNA中发现的。（ ）7DNA的Tm值和AT含量有关，AT含量高则Tm高。（ ）8真核生物mRNA的5端有一个多聚A的结构。（ ）9DNA的Tm值随（A+T）/（G+C）比值的增加而减少。（ ）10B-DNA代表细胞内DNA的基本构象，在某些情况下，还会呈现A型、Z型和三股螺旋的局部构象。（ ）11DNA复性（退火）一般在低于其Tm值约20的温度下进行的。（ ）12用碱水解核酸时，可以得到2和3-核苷酸的混合物。（ ）13生物体内，天然存在的DNA分子多为负超螺旋。（ ）14mRNA是细胞内种类最多、含量最丰富的RNA。（ ）15tRNA的二级结构中的额外环是tRNA分类的重要指标。（ ）16对于提纯的DNA样品，测得OD260/OD280，则说明样品中含有RNA。（ ）17基因表达的最终产物都是蛋白质。（ ）18两个核酸样品A和B，如果A的OD260/OD280大于B的OD260/OD280，那么A的纯度大于B的纯度。（ ）19毫无例外，从结构基因中DNA序列可以推出相应的蛋白质序列。（ ）20真核生物成熟mRNA的两端均带有游离的3-OH。（五）简答题1将核酸完全水解后可得到哪些组分?DNA和RNA的水解产物有何不同？2计算下列各题：（1）T7噬菌体DNA，其双螺旋链的相对分子质量为2.5107。计算DNA链的长度（设核苷酸的平均相对分子质量为650）。（2）相对分子质量为130106的病毒DNA分子，每微米的质量是多少？（3）编码88个核苷酸的tRNA的基因有多长？（4）编码细胞色素C（104个氨基酸）的基因有多长（不考虑起始和终止序列）？（5）编码相对分子质量为9.6万的蛋白质的mRNA，相对分子质量为多少（设每个氨基酸的平均相对分子量为120）？3对一双链DNA而言，若一条链中（A+G）/（T+C）= 0.7，则：（1）互补链中（A+G）/（T+C）= ？（2）在整个DNA分子中（A+G）/（T+C）= ？（3）若一条链中（A+ T）/（G +C）= 0.7，则互补链中（A+ T）/（G +C）= ？（4）在整个DNA分子中（A+ T）/（G +C）= ？4DNA热变性有何特点？Tm值表示什么？5在pH7.0，0.165mol/L NaCl条件下，测得某一DNA样品的Tm为89.3。求出四种碱基百分组成。6 述下列因素如何影响DNA的复性过程：（1）阳离子的存在；（2）低于Tm的温度；（2）高浓度的DNA链。7核酸分子中是通过什么键连接起来的？8DNA分子二级结构有哪些特点？9在稳定的DNA双螺旋中，哪两种力在维系分子立体结构方面起主要作用？10简述tRNA二级结构的组成特点及其每一部分的功能。11用1mol/L的KOH溶液水解核酸，两类核酸（DNA及RNA）的水解有何不同？12如何将分子量相同的单链DNA与单链RNA分开？13计算下列各核酸水溶液在pH7.0，通过1.0cm光径杯时的260nm处的A值（消光度）。已知：AMP的摩尔消光系数A260 = 15400GMP的摩尔消光系数A260 = 11700CMP的摩尔消光系数A260 = 7500UMP的摩尔消光系数A260 = 9900dTMP的摩尔消光系数A260 = 9200求：（1）32mol/L AMP，（2）47.5mol/L CMP，（3）6.0mol/L UMP的消光度，（4）48mol/L AMP和32mol/L UMP混合物的A260消光度。(5) A260 = 0.325的GMP溶液的摩尔浓度(以摩尔/升表示，溶液pH7.0)。(6) A260 = 0.090的dTMP溶液的摩尔浓度(以摩尔/升表示，溶液pH7.0)。14如果人体有1014个细胞，每个体细胞的DNA量为6.4109个碱基对。试计算人体DNA的总长度是多少？是太阳-地球之间距离（2.2109公里）的多少倍？15指出在pH2.5、pH3.5、pH6、pH8、pH11.4时，四种核苷酸所带的电荷数（或所带电荷数多少的比较），并回答下列问题：（1）电泳分离四种核苷酸时，缓冲液应取哪个pH值比较合适？此时它们是向哪一极移动？移动的快慢顺序如何？（2）当要把上述四种核苷酸吸附于阴离子交换树脂柱上时，应调到什么pH值？（3）如果用洗脱液对阴离子交换树脂上的四种核苷酸进行洗脱分离时，洗脱液应调到什么pH值？这四种核苷酸上的洗脱顺序如何？为什么？三、习题解答（一）名词解释1. 单核苷酸(mononucleotide)：核苷与磷酸缩合生成的磷酸酯称为单核苷酸。2. 磷酸二酯键（phosphodiester bonds）：单核苷酸中，核苷的戊糖与磷酸的羟基之间形成的磷酸酯键。3. 不对称比率（dissymmetry ratio）：不同生物的碱基组成由很大的差异，这可用不对称比率（A+T）/（G+C）表示。4. 碱基互补规律(complementary base pai